Révision Examen Final

Question 1

Quel est le but du clonage?

Answer 1

Isoler et amplifier à l’identique une séquence d’ADN d’intérêt.

Question 2

Quels sont les 2 types d’ADN des bactéries?

Answer 2

Chromosomique et plasmidique.

Question 3

Quelles sont les étapes de clonage dans un vecteur?

Answer 3

1. Digestion + ligation
2. Transformation + sélection + amplification
3. Purification de l’ADN recombinant
4. Analyse/séquençage

Question 4

Quelle est la particularité de la réplication des plasmides?

Answer 4

Origine de réplication est un site unique.

Question 5

Qu’est-ce qu’un vecteur navette?

Answer 5

Plasmide pouvant se répliquer dans deux organismes différents.

Question 6

Quelle est la structure principale d’un plasmide?

Answer 6

Site ori
Marqueurs de sélection (antibiotiques, opérons)
Site de clonage mulitple (sites de restriction uniques)

Question 7

Décrire l’action des enzymes de restriction.

Answer 7

Coupent l’ADN à des sites correspondant à des séquences palindromiques.

Question 8

Qu’est-ce qui caractérise la nomenclature des enzymes de restriction?

Answer 8

Genre - Espèce - Souche - Numéro

Question 9

Quelles sont les extrémités générées par les enzymes de restriction? Décrire.

Answer 9

Bouts cohésifs / collants (avec overhang)

Bouts francs

Question 10

Pourquoi des bouts collants sont préférés pour un clonage?

Answer 10

Le overhang guide l’hybridation des molécules d’ADN selon la complémentarité de leurs séquences.

Question 11

Quel co-facteur est nécessaire à l’action de la T4 ADN ligase?

Answer 11

L’ATP.

Question 12

Qu’est-ce qui est lié par la T4 ADN ligase?

Answer 12

5’-P à 3’-OH

Question 13

Qu’est-ce que la transformation?

Answer 13

Le processus qui permet de faire pénétrer les vecteurs dans les bactéries.

Question 14

Comment on prépare des bactéries chimiquement compétentes?

Answer 14

Solution de CaCl2, congélation avec vecteur suivie de choc thermique.

Question 15

Comment on prépare des bactéries électrocompétentes?

Answer 15

Électrochoc provoque l’introduction du vecteur dans la bactérie via champ électrique.

Question 16

Combien d’antibios impliqués dans la sélection négative?

Answer 16

2. On réplique la culture dans un deuxième milieu pour faire la sélection.

Question 17

Comment fonctionne la sélection positive?

Answer 17

Sélection blanc-bleu avec lacZ. Bleu si natif, blanc si insert.

Question 18

Quels sont les inducteurs naturels et artificiels de l’opéron lactose?

Answer 18

Naturel: lactose
Artificiel: IPTG

Question 19

Comment mesurer la concentration d’ADN en solution?

Answer 19

Absorption UV à 260nm.

Question 20

Comment visualiser des acides nucléiques sur un gel?

Answer 20

Utilisation d’une molécule fluorescente (EtBr) ou autres colorants. Visualisation avec un transilluminateur UV.

Question 21

Sous quelle forme l’ADN migre t’il selon sa masse moléculaire?

Answer 21

Forme linéarisée.

Question 22

Quel est le principe d’une carte de restriction?

Answer 22

Digestion par plusieurs enzymes de restriction et migration sur gel. Utiliser l’information sur la taille des fragments pour prédire la position des sites de restriction sur l’ADN.

Question 23

Quels facteurs affectent l’hybridation des acides nucléiques?

Answer 23

Composition en base de la région d’hybridation
Degré de complémentarité des séquences
Température
Sels

Question 24

Quel est l’impact du contenu GC sur l’hybridation?

Answer 24

Les liens GC sont plus efficaces (3 ponts H) donc un contenu plus élevé donne une meilleure hybridation.

Question 25

Qu'est-ce que la stringence?

Answer 25

Capacité d'une solution à agir sur l'appariement de l'ADN. Plus elle est élevée, plus elle déstabilise les doubles-brins.

Question 26

Comment peut-on identifier une séquence d'intérêt dans un mélange?

Answer 26

Marquage par une sonde radioactive.

Question 27

Quelle est la molécule ciblée lors d'un Southern blot?

Answer 27

ADN

Question 28

Quelle est la molécule ciblée lors d'un Northern blot?

Answer 28

ARN