Révision Examen Final Flashcards
Quel est le but du clonage?
Isoler et amplifier à l’identique une séquence d’ADN d’intérêt.
Quels sont les 2 types d’ADN des bactéries?
Chromosomique et plasmidique.
Quelles sont les étapes de clonage dans un vecteur?
- Digestion + ligation
- Transformation + sélection + amplification
- Purification de l’ADN recombinant
- Analyse/séquençage
Quelle est la particularité de la réplication des plasmides?
Origine de réplication est un site unique.
Qu’est-ce qu’un vecteur navette?
Plasmide pouvant se répliquer dans deux organismes différents.
Quelle est la structure principale d’un plasmide?
Site ori
Marqueurs de sélection (antibiotiques, opérons)
Site de clonage mulitple (sites de restriction uniques)
Décrire l’action des enzymes de restriction.
Coupent l’ADN à des sites correspondant à des séquences palindromiques.
Qu’est-ce qui caractérise la nomenclature des enzymes de restriction?
Genre - Espèce - Souche - Numéro
Quelles sont les extrémités générées par les enzymes de restriction? Décrire.
Bouts cohésifs / collants (avec overhang)
Bouts francs
Pourquoi des bouts collants sont préférés pour un clonage?
Le overhang guide l’hybridation des molécules d’ADN selon la complémentarité de leurs séquences.
Quel co-facteur est nécessaire à l’action de la T4 ADN ligase?
L’ATP.
Qu’est-ce qui est lié par la T4 ADN ligase?
5’-P à 3’-OH
Qu’est-ce que la transformation?
Le processus qui permet de faire pénétrer les vecteurs dans les bactéries.
Comment on prépare des bactéries chimiquement compétentes?
Solution de CaCl2, congélation avec vecteur suivie de choc thermique.
Comment on prépare des bactéries électrocompétentes?
Électrochoc provoque l’introduction du vecteur dans la bactérie via champ électrique.
Combien d’antibios impliqués dans la sélection négative?
- On réplique la culture dans un deuxième milieu pour faire la sélection.
Comment fonctionne la sélection positive?
Sélection blanc-bleu avec lacZ. Bleu si natif, blanc si insert.
Quels sont les inducteurs naturels et artificiels de l’opéron lactose?
Naturel: lactose
Artificiel: IPTG
Comment mesurer la concentration d’ADN en solution?
Absorption UV à 260nm.
Comment visualiser des acides nucléiques sur un gel?
Utilisation d’une molécule fluorescente (EtBr) ou autres colorants. Visualisation avec un transilluminateur UV.
Sous quelle forme l’ADN migre t’il selon sa masse moléculaire?
Forme linéarisée.
Quel est le principe d’une carte de restriction?
Digestion par plusieurs enzymes de restriction et migration sur gel. Utiliser l’information sur la taille des fragments pour prédire la position des sites de restriction sur l’ADN.
Quels facteurs affectent l’hybridation des acides nucléiques?
Composition en base de la région d’hybridation
Degré de complémentarité des séquences
Température
Sels
Quel est l’impact du contenu GC sur l’hybridation?
Les liens GC sont plus efficaces (3 ponts H) donc un contenu plus élevé donne une meilleure hybridation.
Qu’est-ce que la stringence?
Capacité d’une solution à agir sur l’appariement de l’ADN. Plus elle est élevée, plus elle déstabilise les doubles-brins.
Comment peut-on identifier une séquence d’intérêt dans un mélange?
Marquage par une sonde radioactive.
Quelle est la molécule ciblée lors d’un Southern blot?
ADN
Quelle est la molécule ciblée lors d’un Northern blot?
ARN
