Réplication ADN procaryote

Question 1

Réplication semi-conservative

Answer 1

Molécule fille contient :

• un brin ADN parental
• un brin ADN nouvellement synthétisé

Démonstration :
Bacs cultivées dans milieu N15 lourd puis transfert dans N14 léger. Puis séparation mol ADN par centrifugation sur gradient CsCl

Question 2

Synthèse ADN

Answer 2

• Addition de new nucléotides en 3’
• UNIDIRECTIONNELLE
• Amorce

Synthèse brin discontinu : fragments d’Okazaki reliés par ligase

Question 3

Synthèse fragments d’Okazaki

Answer 3

• Amorce ARN détachées/soulevées de l’ADN par ADN pol du fragment d’Okazaki adjacent
• Amorce ARN forme un rabat et est clivée de ADN par une flap endonucléase
• ADN ligase lie les 2 fragments
  Amorce aussi requise pour brin continue

Question 4

Etapes réplication ADN

Answer 4

• Séparation des 2 brins à l’origine de réplication –> 2 fourches de réplication bidirectionnelles
• Synthèse amorces ARN
• Synthèse brin continu et discontinu

Question 5

ADN E. Coli

Answer 5

Circulaire ~5.1 Mb

1 SEULE origine de réplication SPECIFIQUE

Question 6

Définition réplisome

Answer 6

= Ensemble des prots présentes dans fourches de réplication qui permettent réplication ADN

Question 7

Que contient le réplisome d’E. Coli ?

Answer 7

• un facteur de chargement (clamp loader) : 1 sous-unité delta, 1 delta’, 3 tau
• prots beta-clamps
• ADN pol III
• Hélicase DnaB : 6 sous-unités et liée à DnaG. C’est une ATPase de type RecA. Se déplace 5’–>3’ (encercle brin discontinu)
• ARN primase DnaG : contient 1 domaine liaison Zinc, 1 domaine ARN pol, 1 domaine liaison hélicase. Synthétise amorce ARN

Question 8

Sous-unités tau du facteur de chargement clamp loader

Answer 8

Extention en C-term qui se lie à DnaB et ADN pol-III

Sous-unités tau peuvent être tronquée en C-term et ne possèdent plus ces motifs de liaison –> sous-unités gamma.

Question 9

Extention C-term des sous-unités tau

Answer 9

Maintient prots du réplisome –> facilite synthèse brin discontinu

1) 2 ADN pol répliquent brin discontinu
2) facteur de chargement clamp loader lie prot beta-clamp
3) la charge sur brin discontinu
4) clamp-loader déplace/apporte ADN pol au niveau du nouveau beta-clamp

Question 10

Moteur ds cell : Exemple de Rad50

Answer 10

ATPases : hydrolysent ATP –> ADP
Sont liées ou non à l’ATP (état lié ou état basal)
A l’état basal, les 2 sous-unités de Rad50 ne sont pas liées
+ ATP –> liaison –> hydrolyse –> dissociation des 2 sous-unités

Autres ATPases : RecA, AAA+ ATPases