Replicação; PCR Flashcards
Quais são os tipos de replicação?
Modelo theta (procariontes)
Circulo-rolante (plasmideos e virus)
Linear (eucariotos)
Como é a replicação do modelo theta?
Se inicia em uma origem de replicação, com abertura da dupla fita formando uma bolha de replicação e formando duas forquilhas de replicação (uma para cada lado da bolha), elas vão replicando as duas fitas nos dois sentidos até formar duas duplas fitas
O que fazem as proteinas iniciadoras e um exemplo delas
DNA A: reconhecem a origem e abrem a dupla fita em sítios específicos
O que faz o DNA B?
É uma helicase que abre a hélice na forquilha de replicação
O que faz o DNA G?
É uma primase. Adicionam os primers, que são os primeiros nucleotideos de rna da replicação e a partir do primer a DNA polimerase vai polimerizando a fita, adicionando nucleotídeos na fita complementar
O que faz a DNA girase?
Gira o dna diminuindo a tensão da dupla fita gerada pela dna helicase
O que são as SSDs?
Proteínas ligadora de fita simples. Evita que bases complementares se liguem antes que ocorra a replicação da fita que está aberta
O que é a fita líder?
É a fita que esta sendo formada no sentido da abertura da forquilha
O que é a fita tardia?
Fita sendo formada no sentido contrário da forquilha. Ocorre em fragmentos: fragmentos de okazaki (esse fragmentos são ligados pela ligase)
Quais enzimas tem atividade revisora?
Dna polimerase 1 e 3
Qual dna polimerase é responsavel pelo alongamento do dna e qual e responsável por colocar ou tirar primers?
Alongamento: 3
Colocar ou tirar primers: 1
O que o Ciprofloxacino faz no organismo?
Ciprofloxacino atua impedindo a ação da girase, bactérias não conseguem replicar o dna e consequentemente não conseguem se proliferar
O que fazem as DNA polimerases?
Catalisam as reações de alongamento de cadeia. Primer é colocado, após isso a dna polimerase polimeriza até o próximo fragmento (nas fitas tardias). Nas fitas contínuas há apenas a polimerização
Quais são as dna polimerases de eucariontes?
Alfa: inicio da síntese de DNA nuclear, tem atividade de primase
Delta: síntese de filamentos lagging dna nuclear
Epsilon: síntese de filamento leading
Os telomeros são responsáveis pelo que?
Dão estabilidade aos cromossomos e impedem a degradação do dna
Porque a cada ciclo de replicação o dna diminuiria de tamanho?
Porque a fita tardia não tem espaço para colocar um primer de polimerização no sentido contrário à abertura da forquilha
O que faz a dna telomerase?
Ela possui um molde em rna da sequência complementar à sequência consenso (cada espécie tem a seu tipo de sequência repetitiva). Elas reconhecem as sequências consenso livres dos telomeros e ela se liga e completa e alonga a fita molde da fita tardia, abrindo espaço para a primase adicionar um primer e a partir dele ocorrer a polimerização do trecho final que não foi replicado
O que acontece quando o telômero é replicado?
Eles formam uma alça: há a abertura de um trecho do telômero e ocorre a invasão de uma extremidade 3’ em uma região telomerica de dupla fita. Essa abertura é feita por uma helicase TRF1 e depois proteínas se ligam ao TRF1 para revestir os telômeros
Quais são os requisitos do processo de replicação do dna?
- Um molde de DNA unifilamentar
- Matéria prima para a síntese do novo filamento de DNA (nucleotideos)
- Enzimas e outras proteínas que leem o molde e sintetizam a nova fita a partir da informação contida no molde
O que é o PCR?
Reação em cadeia da polimerase (PCR). É uma replicação in vitro
Quais são os componentes do PCR?
Dna, primers, nucleotideos, taq polimerases (de termobacterias), termociclador (modifica a temperatura interna por tempos pré estabelecidos)
Quais são os processos do PCR?
- Desnaturação para a dupla fita do dna se separar
- Anelamento. Para que os primers reconheçam a sequência complementar no molde e ocorra o pareamento dos primers
- Atuação das taq polimerases para reconhecem os primers e alongar as fitas novas
- Repete o ciclo
Qual é a diferença do PCR para o qPCR (PCR e tempo real)
Os primers que serão utilizados ou alguns nucleotideos podem ser marcados com fluorescência, dessa maneira, a medida for ocorrendo os ciclos de replicação, é possivel avaliar a fluorescência e avaliar e quantificar a fluorescência ao longo dos ciclos
