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BM > Prática > Flashcards

Prática Flashcards

1
Q

O que avalia o angulo de contacto?

A

a molhabilidade da superfície para diferentes líquidos

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2
Q

Do que depende o angulo de contacto?

A

do equilíbrio entre a tensão de superfície entre sólido, liquido ou vapor

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3
Q

Qual a relação entre as forças coesivas para uma superfície ser hidrofóbica?

A

forças coesivas entre moléculas de água > forças coesivas entre água e superfície

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4
Q

Qual o angulo de contacto para uma superfície hidrofílica?

A

< 90

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5
Q

Do que depende o caráter +/- hidrofóbico de um material?

A

da quantidade de grupos OH na sua superfície

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6
Q

O que é preciso para se poder avaliar o ângulo de contacto de uma superfície?

A

estar limpa e livre de potenciais agentes;
ser lisa e homogénea;
ser insolúvel no solvente utilizado;

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7
Q

Porque é que limpamos as lâminas com etanol 99%?

A

vão fornecer grupos OH à superfície do material para ele depois reagir com sigmacote;
permitem secagem rápida, porque é muito volátil.

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8
Q

O que é a sonicação?

A

Limpeza com recurso a ultrassons

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9
Q

Quais são as características do sigmacote?

A

solução em heptano que forma um filme microscopicamente fino e covalente sobre o vidro;
é um agente de cilarização (capaz de reparar danos e fissuras);
altera a molhabilidade da superfície (fica hidrofóbico).

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10
Q

Se fizéssemos um tratamento térmico nas lâminas após a adição do sigmacote para que é que isto serviria?

A

Aumentar a durabilidade do tratamento.

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11
Q

Quais são as características do PCL? (9)

A

PCL=policaprolactona;
polímero;
termoplástico;
alto peso molecular;
hidrofóbico;
semi-cristalino;
baixo ponto de fusão;
biodegradável e bio-reabsorvível (lento);
solúvel em solventes orgânicos.

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12
Q

Como é que ocorre a degradação do PCL e do PLA?

A

Hidrólise do grupo éster

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13
Q

Quais são as características do PLA?

A

biodegradável, mas + rápido que o PLA pq tem - carbonos;
hidrofóbico;
semi-cristalino;
baixa resistência térmica.

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14
Q

Quais são os métodos de processamento de filmes de PCL e quais as vantagens/desvantagens de usar cada um deles? (2)

A

melt blending:
-vantagens: não há resíduos de solvente;
-desvantagens: gasta + energia e é + complexo
solvent casting:
-vantagens: conseguimos criar poros;
-desvantagens: resíduos do solvente

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15
Q

Que métodos se podem usar para verificar se há resíduos de solvente no método de solvent casting?

A

FTIR e ressonancia magnética nuclear

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16
Q

Que solvente e que usamos para a produção de filmes de PCL?

A

diclorometano

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17
Q

Quais são as vantagens da produção de scaffolds?

A

conseguimos controlar o tamanho dos poros, orientação das fibras e posicionamento;
obtemos uma rede homogénea.

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18
Q

Qual é a temperatura ideal a que a resistência da máquina de fazer os scaffolds tem que ter?

A

> que o melting point;
< que a temperatura de degradação.

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19
Q

Porque é que é importante controlar a temperatura da plataforma da máquina dos scaffolds?

A

Permite uma maior adesão das camadas, o que impede desalinhamento.

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20
Q

Qual é a influencia do tamanho dos poros do scaffold no desenvolvimento das células?

A

Muito grande: células ficam muito isoladas por isso é mais difícil produzir matriz;
Muito pequeno: células não conseguem entrar no poro.

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21
Q

Que técnicas existem para modificar a superfície do PCL e PLA? (5)

A

protein coating;
plasma treatment;
photo-induced grafting;
chemical etching;
hidrolise de superfície.

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22
Q

No que é que consiste a hidrolise da superfície do PCL?

A

implementar novos grupos funcionais na superfície, alterando a química da superfície e assim modificando as interações com água, proteínas e células;
alteração da hidrofobicidade e molhabilidade da superfície;
aumenta a rugosidade e porosidade da superfície.

23
Q

Que parâmetros afetam a reação de hidrolise da superfície do PCL?

A

[NaOH];
tempo;
temperatura.

24
Q

Que parâmetros do PCL afetam a sua hidrólise?

A

porosidade;
área de contacto;
espessura

25
Q

Quais são as vantagens e desvantagens da hidrolise do PCL?

A

V: podemos regular a taxa de hidrolise regulando a [NaOH];
D: possibilidade de perder a integridade do polímero

26
Q

Que parâmetros do PCL são alterados com a sua hidrolise?

A

Propriedades mecânicas e químicas;
topografia;
morfologia.

27
Q

Qual é a primeira coisa que acontece quando adicionamos NaOH ao PCL?

A

delaminação da superfície

28
Q

Porque é que utilizamos PBS na lavagem do PLA?

A

Porque o PBS é um tampão que não vai interagir com possíveis resíduos do NaOH e vai manter o pH constante de 7.

29
Q

Porque é que incubamos o PLA em vácuo?

A

Para limpar os poros

30
Q

No que consiste uma cultura celular?

A

Remoção de células de um animal ou planta, seguida por crescimento num meio artificial favorável.

31
Q

Que tipos de culturas celulares existem?

A

Cultura primária: células são retiradas diretamente do tecido e cultivadas até ocuparem todo o substrato
Linha celular: deriva da cultura primária; há linhas finitas e contínuas

32
Q

Que células é que crescem em suspensão e que células crescem aderidas ao substrato?

A

aderidas: fibroblastos e células epiteliais;
suspensão: linfoblastos

33
Q

Que equipamentos são necessários para fazer uma cultura celular? (6)

A

câmara de fluxo laminar (condições asséticas);
incubadora (condições ambientais);
banho de água;
centrifugadora;
congelador;
microscópio invertido.

34
Q

Que condições do ambiente de cultura se podem variar?

A

Fisioquímicas: temperatura, pH, pressão osmótica, tensão de O2 e CO2
Fisiológicas: concentração de hormonas e nutrientes.

35
Q

O que é que o meio de cultura fornece às células?

A

Nutrientes, fatores de crescimento e hormonas e regula o pH e a pressão osmótica.

36
Q

Quais são as características do meio de cultura usado na cultura celular?

A

FBS: soro bovino fetal;
inibe a tripsina e fornece fatores de crescimento e adesão, hormonas, lípidos e minerais.

37
Q

O que é que a variação do pH de uma cultura celular significa?

A

-contaminação (muda cor e turvidez);
-necessidade de trocar o meio de cultura;
-diminuição do CO2, tem que ir à incubadora.

38
Q

Que contaminantes podem existir numa cultura celular?

A

Químicos: impurezas (endotoxinas), plastificantes e detergentes;
Biológicos: bactérias, leveduras, vírus, microplasmas, contaminação cruzada.

39
Q

O que faz a tripsina?

A

enzima digestiva que cliva as proteínas que medeiam a adesão celular, ou seja, liberta as células da superfície de cultura.

40
Q

Que corante se usa para corar as células mortas para a contagem de células?

A

Trypan blue

41
Q

Do que depende a adsorção de proteínas?

A

-hidrofobicidade da superfície;
-topografia e rugosidade de superfície;
-impedimento estérico;
-carga da superfície e da molécula.

42
Q

Como é que a adsorção de proteínas pode ser modelada?

A

-tratamento da superfície;
-modificação do polímero;
-coating com moléculas bioativas.

43
Q

O que é que se faz depois da tripsinização e contagem das células e contas?

A

splitting (centrifugação) e seeding das células

44
Q

O que é que é preciso avaliar para avaliarmos a resposta biológica das culturas celulares?

A

-morfologia celular;
-atividade metabólica.

45
Q

Como é que avaliamos a morfologia celular?

A

SEM

46
Q

Que técnicas existem para avaliar a atividade metabólica? (4)

A

-MTT tetrazolium colorimentric assay;
-MTS assay;
-WST-1 assay;
-resazurin assay.

47
Q

Como é que funciona a resazurina?

A

penetra células emtablicamente ativas na forma oxidada (azul e sem fluorescência) e é reduzida (rosa e com fluorescência) pela cadeia respiratória.

48
Q

Como é que é feita a preparação das amostras para o SEM?

A
  1. Lavar com PBS;
  2. Lavar com formaldeído (fixar);
  3. Desidratação progressiva .
49
Q

Como funciona o SEM?

A

Um feixe de eletrões incide na superfície da amostra e varre essa superfície, então são emitidas radiações que são detetadas por um detetor que retira a informação através de um espetro ou imagem.

50
Q

Como é que é obtida a melhor resolução possível no SEM?

A

O feixe de eletrões vai atravessar diafragmas e espelhos até conseguir alcançar o menor diâmetro possível, e isso vai fazer obter a maior resolução.

51
Q

Quais são os modos que existem no SEM? Quais as características?

A
  1. Alto vácuo (usado):
    -amostras condutoras e secas (se não forem reveste-se com ouro paládio por pulverização iónica);
    -tem boa resolução porque é feito a baixa pressão e o feixe de eletrões tem o menor número de interações possível;
    -a temperaturas <0.
  2. Baixo vácuo:
    -amostras secas e não condutoras;
    -leva ao encontro dos eletrões com moléculas de ar, por isso há maior dispersão dos eletrões, maior diâmetro e pior resolução.
  3. Modo ambiental:
    -amostras hidratadas
52
Q

Que tipos de eletrões/fotões saem das amostras no SEM?

A
  1. eletrões secundários (imagem):
    -baixa energia e detetam só a superfície (boa informação de topografia e morfologia);
    -zonas claras = + relevo;
    -zonas escuras = + plano;
  2. eletrões retrofundidos (imagem):
    -eletrões com + energia;
    -permite ver + profundidade;
    -zonas claras = maior numero atómico;
    -zonas escuras = menor número atómico.
  3. fotões de raio X (espetro):
    -permite saber a composição elementar da amostra.
53
Q

O que é que seria de esperar na análise do angulo de contacto nos filmes de PCL?

A

À medida que aumentava o tempo de tratamento deveria diminuir o ângulo de contacto porque a superfície ficava mais hidrofílica.

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