Prática Flashcards
Antigénio
qualquer coisa que se liga a uma estrutura proteica (anticorpo ou recetor específico)
recetor específico de linfócitos T- TCR
recetor específico de linfócitos B- BCR
Autoantigénio
Antigénios do próprio organismo. Não há resposta imune. Se houver- imunogénios
Aloantigénio
Antigénios de outros indíviduos da mesma espécie.
Normal haver resposta imune (transplantes de orgãos)
Xenoantigénio
antigénios de indivíduos de outras espécies
Imunogénio
antigénio que causa uma resposta imune contra ele próprio
Hapteno
Molécula pequena que não é imunogénica mas que se pode ligar a um anticorpo se se conjugar com uma proteína. Passa a ser suficientemente grande para ser reconhecida por BCR e TCR
o que é a haptenização?
Quando o hapteno se liga a moléculas do próprio organismo e altera essa molécula (ex. proteína)
superantigénio
classe de antigénios capaz de causar uma ativação inespecífica de linfócitos T e causar uma resposta imune exagerada
Epitopo
Determinante antigénico. É a zona de ligação do antigénio capaz de se ligar ao anticorpo
É possivel que vários anticorpos se liguem a várias partes diferentes do mesmo antigénio?
Sim, os antigénios são bastante grandes, podem ter várias zonas de ligações (epitopos)
Paratopos
é a zona do anticorpo que se liga ao antigénio(epitopo)
Anticorpo
imunoglobulina produzida pelos plasmócitos, com especifidade para o antigénio
Estrutura do anticorpo
- Em “Y”
- 2 cadeias leves ( cada tem 1 região variável e 1 constante)
- 2 cadeias pesadas (cada tem 1 região variável e 3/4 regiões constantes)
Onde se encontra o paratopo?
Na região variável, dá especificidade ao anticorpo
Qual a parte de ligação ao antigénio?
Região variável
O que dá a função efetora ao anticorpo?
A porção constante, que depende principalmente da estrutura da cadeia pesada
Cadeia pesada γ (gama)
anticorpo IgG
Como são definidas as 5 classes/isotipos de imunoglobulinas?
De acordo com os 5 tipos de cadeias pesadas
Cadeia pesada α (alfa)
anticorpo IgA
Cadeia pesada μ (miu)
Anticorpo IgM
Cadeia pesada ε (epsilon)
anticorpo IgE
Cadeia pesada δ (delta)
anticorpo IgD
O que é a região de charneira?
É a região de flexibilidade. Vai permitir que os braços se abram, fechem ou rodem entre eles. Anticorpo desenha-se como um Y mas n funciona como um Y
Quais os tipos de cadeias leves?
Kapa e lambda
As duas cadeias pesadas são iguais entre elas e as duas cadeias leves são iguais?
Sim. As duas regiões de ligação ao antigénio ligam-se a epitopos iguais. Os dois paratopos são iguais e só se ligam a epitopos iguais.
Quais as funções dos anticorpos IN VIVO?
- Neutralização
- Opsonização
- Ativação do complemento
- Citólise
- Desgranulação dos mastócitos
Neutralização
INATIVAÇÃO
O anticorpo liga-se a uma moléculas e isso vai ser suficiente que o patogénio exerça a sua infeção (Ex. toxinas)
Opsonização
Fagocitose facilitada por monócitos, macrófagos ou PMNs
Ativação do complemento
Citólise e opsonização (facilitação da fagocitose)
Citotoxicidade dependende de anticorpo
Lise da célula.
Anticorpos dizem às células citotóxicas quas as células que devem matar
Desgranulação dos mastócitos
IgE
Libertação de grânulos para destruir o patogénio (ex. parasitas)
Quais as funções dos anticorpos IN VITRO?
- Aglutinação
- Precipitação
- Ativação do Complemento (C)
Aglutinação
particula antigénica + Ac específico
resulta na agregação de particulas
Precipitação
Ag solúvel + Ac resulta em precipitação
Ativação do complemento (C)
Ag em solução ou em partícula + Ac específico resulta na ativação do complemento
Características da reação antigénio anticorpo
- Ligação não covalente
- Especificidade
- Afinidade Ag-Ac
- Avidez Ag-Ac
Ligação não covalente
Equilíbrio dinâmico
Reversível
Forças fracas :
*Ligações de hidrogénio
*Forças de Van der Walls
*Ligações iónicas
*Ligações hidrofóbicas
Especificidade
Conceito chave-fechadura (um epitopo só pode ser ligado por um paratopo que encaixa de forma perfeita)
Depende de CDRs ou HVRs.
Quantas regiões HVRs existem?
3 em cada cadeia leve
3 em cada cadeia pesada
O que são as regiões framework?
Sequencias de aminoácidos entre as regiões hipervariáveis
Afinidade Ag-Ac
Ligação de um só epitopo à região hipervariavel
Balanço das forças atrativas e repulsivas
Reações cruzadas
Anticorpos podem se ligar a antigénios diferentes desde que os seus epitopos sejam estruturalmente semelhantes.
Epitopo partilhado
Epitopo semelhante (menor força de ligação)
Avidez Ag-Ac
Força total de ligação de um antigénio com vários epitopos
Interação de 1º epitopo aumenta a possibilidade de reação com 2º epitopo
Uma alta avidez pode compensar uma baixa afinidade?
Sim
Qual a primeira classe de anticorpos a ser produzida na resposta primária?
IgM.
Forma pentâmeros, cada IgM tem 10 zonas de ligaçao. Por isso tem capacidade de formar avidezes elevadas.
Fatores que afetam in vitro a ligação das reações antigénio anticorpo
Afinidade
Avidez
Ratio Ag-Ac
Todos os testes baseados em reacções Ag/Ac podem ser usados para
detectar quer o Ag quer o Ac?
Sim
Quais as fases das reações Ag-Ac
1º fase : rápida, n visivel
2º fase: lenta, visivel
3º fase: “invivo” - ativação de mecanismos efetores (não observável “invitro”)
Zona de equivalência
Zona máxima de precipitação ou aglutinação quando o antigénio e o anticorpo de encontram em condições ótimas
Pré-zona
Excesso de anticorpo. sem reação
Pós-zona
Excesso de antigénio. sem reação
O que é a aglutinação?
reação entre antigénios naturais insolúveis ou antigénios adsorvidos à superfície de partículas (células) e anticorpos
A formação de rede ocorre tanto nas reações de precipitação com nas de aglutinação?
Sim
Na aglutinação a rede é formada com moléculas grandes ou pequenas?
Grandes
Aglutinogénio
antigénio que participa numa reação de algutinação
tem pelo menos dois determinantes antigénicos (epitopos)
Aglutininas
anticorpos que participam da reação de aglutinação
- IgM
- IgG: aglutinina pobre, exige condições ótimas de temperatura e PH para a formação do aglutinado
O que é o título?
é a maior diluição para a qual se verifica aglutinação. É o inverso da última diluição
A aglutinação é quantitativa ou qualitativa?
qualitativa, ou ocorre ou nao ocorre
Para que serve o título?
Transforma um ensaio qualitativo num ensaio semi-quantitativo
Características das reações de aglutinação
- Rapidez
- Visualização fácil (requer poucos complexos Ac-Ag)
- Técnica sensível
- Resultados só qualitativos ou semi-quantitativos
Classificação das reações de aglutinação
- Direta
- Indireta ou passiva
- inibição da aglutinação
- técnicas com antiglobulina
Qual o tipo de aglutinação nos sistemas ABO e Rh eritrocitários?
aglutinação direta
Quais os tipos de antigénios usados na aglutinação direta?
grandes partículas insolúveis ou antigénios celulares
O que permite detetar a aglutinação direta?
- antigénios particulados desconhecidos usando anticorpos específicos conhecidos
- anticorpos usando antigénios particulados conhecidos
Porque razão uma pessoa do grupo A tem anticorpos anti-B?
Não é necessário ter tido contacto com outro grupo sanguíneo para ter anticorpos para ele. Deve-se ás reações cruzadas.
Existem, no ambiente, pólen e bacterias que têm moléculas extremamente parecidas com os antigénios A e Be com as quais toda a gente contacta. Cria-se uma resposta IgM contra estes antigénios sem nunca ter tido contacto com eles.
Quais os melhores antigénios para serem usados em reações de aglutinação?
Antigénios particulados
Fases da aglutinação indireta
1º junção do antigénio ao portador
2º antigénio-portador + anticorpo = aglutinação
Antigénios com um só epitopo podem permitir uma reação de aglutinação?
Não, pois não há formação de rede
O que permite detetar a aglutinação indireta?
Deteção de anticorpos contra antigénios solúveis, quandos estes estão adsorvidos a partículas de bentonite ou esferas de látex, ou mais frequentemente a eritrócitos humanos ou de carneiro.
Também se podem usar anticorpos adsorvidos a partículas para detetar antigénios específicos.
O que é o fator reumatóide?
É uma IgM anti-IgG. Pode ser utilizado como um anticorpo que reconhece outro anticorpo que neste caso se torna num antigénio.
Onde pode ser usada a aglutinação indireta?
- diagnóstico de sífilis
- pesquisa de fator reumatóide
- rubéola
- analise de drogas
- proteína C reativa (CRP)
Qual o princípio da técnica da inibição da aglutinação?
Que a ligação Ag-Ac é reversível, por isso podemos formar uma rede e depois destruí-la se ela não estiver na proporção certa.
Tipos de reações na inibição da aglutinação
Reação positiva - não se forma aglutinado
Reação negativa - forma-se aglutinado
Como funciona a inibição da aglutinação no caso da gravidez?
Temos uma proporção perfeita de anticorpo anti-beta-HCG e partículas de beta-HCG de uma molécula de látex.
-Se a mulher não estiver grávida, ocorre reação de aglutinação
- Se a mulher estiver grávida, produz grande quantidade de beta-HCG pela placenta o que recobrir todo o anticorpo presente no kit, pelo que este anticorpo não vai ficar disponível para se ligar à beta-HCG da partícula de látex. Não ocorre aglutinação
Onde pode ser usada a inibição da aglutinação?
CMV (citomegalovírus)
Sarampo
Rubeola
Herpes
COOMBS direto
Pode utilizar-se invivo quando já se deu a ligação do anticorpo (IgG) do soro de um indivíduo ao seu próprio glóbulo vermelho.
O que permite estudar as técnicas de antiglobulina?
Através de reações de aglutinação, casos em que o anticorpo é fracamente aglutinante, ou seja, forma complexos Ag-Ac, mas não consegue formar rede.
Para a formação de rede adicionam-se Imunoglobulinas anti-globulina humana (anti-Ig)
Quais as técnicas de antiglobulina existentes?
Técnica direta/COOMBS direto
Técnica indireta/COOMBS indireto
O que vai fazer o segundo anticorpo (antiglobulina-COOMBS) na técnica de antiglobulina?
Faz a ponte entre os anticorpos primários e vai formar a reação de aglutinação
Utilizações da técnica de antiglobulina
-Doença hemolítica no recém-nascido
-Anemias hemolíticas autoimunes
- Reações hemolíticas após transfusão
- Deteção de drogas à superfície de eritrócitos, contra o qual o organismo está a produzir anticorpos que se fixam no eritrócito
Classificação Rh
Pessoas que têm antigénio D do Rh na superfície dos seus eritrócitos são Rh+
Doença hemolítica do recém nascido
A mãe Rh- tem um primeiro filho Rh+ e o contacto entre eles cria na mãe anticorpos anti-D. Se a mãe tiver um segundo filho Rh+ ela já tem os anticorpos anti-D, que podem atravessar a placenta e destruir os glóbulos vermelhos do filho
Bébe nascido com anemia e pretendemos saber se é uma incompatibilidade Rh, que teste usamos?
COOMBS direto. No recém nascido já temos os antigénio e os anticorpos provenientes da mãe, vamos apenas adicionar o reagente coombs. Se o teste for positivo significa que está a ocorrer uma doença hemolítica por anticorpo materno.
Teste COOMBS indireto
Permite detetar anticorpos incompletos no soro do doente frente a eritrócitos e antigénios de um soro teste.
Etapas do COOMBS indireto
Etapa 1- No sangue do doente apenas existe o anticorpo, temos de adicionar o alvo do anticorpo(antigénio) para que se dê a primeiroa ligação
Etapa 2 - Adicionar o reagente de COOMBS para que se dê a aglutinação
Se temos uma mãe que teve um primeiro filho Rh+ e queremos saber se ficou imunizada para o Rh que teste usamos?
Teste COOMBS indireto. A mãe poderá ter anticorpo, mas não tem antigénio.
Se o teste for positivo a mãe tem anticorpo anti-D
A incompatibilidade AB0 ocorre por reatividade cruzada mediada por que classe de antigénios?
IgM, não atravessam a placenta.
Precipitação
-Elementos solúveis (antigénio e anticorpo) agregam-se formando um precipitado insolúvel e visível.
-Partículas mais pequenas que as da aglutinação.
-Pode ocorrer em fase sólida
Qual a mais sensível, aglutinação ou precipitação? Porque?
A aglutinação. As partículas são maiores e particulas maiores têm mais epitopos e maior possibilidade de formar ligações.
De que depende a precipitação?
Da capacidade dos anticorpos de formarem grandes redes de complexos Ac-Ag “cross-linked” que precipitam da solução onde se encontram
Precipitina
Anticorpo (solúvel) capaz de interagir e precipitar antigénios em solução
Precipitinogénio
Antigénio (solúvel) que induz a formação de um anticorpo saudável capaz de formar precipitados. Tem de ser multivalente
Diferenças entre precipitação e aglutinação
Solubilidade e tamanho dos antigénios:
-Precipitação: antigénios solúveis
-Aglutinação: Antigénios insolúveis
Aglutinação é mais sensivel
Como tornar uma reação de precipitação numa de aglutinação?
Ligando antigénios solúveis a partículas de latex ou células
Através de que métodos se quantifica o precipitado nas precipitações em meio líquido?
Turbidimetria
Nefelometria
Que anticorpos permite medir o nefelómetro?
IgA, IgG, IgM, IgE
Imunodifusão radial quantitativa ou qualitativa
Quantitativa, permite obter a concentração de um dos reagentes utilizando uma curva padrão
Vantagens e desvantagens da nefelometria
Vantagens:
-rápido e simples
- várias determinações simultâneas
Desvantagens:
-reagentes caros
-necessidade de diluir o soro várias vezes
-necessário corrigir a dispersão basal (Hgb, lípidos)
