Practica 4: Prueba de inhibicion de la hemoaglutinacion (HI) Determinacion de la enfermedad de New Castle

Question 1

para que se utiliza la prueba HI

Answer 1

Diagnostico
Perfil serologico
Investigacion
Evaluacion post-vacunal

Question 2

muestras que se pueden utilizar

Answer 2

Suero

Yema

Question 3

que detecta la prueba

Answer 3

Anticuerpos

Question 4

material utilizado

Answer 4

suero problema
antigeno especifico
PVC: solucion salina buferada
Globulos rojos lavados al 1%
Control positivo
placa para HI fonde en V con 96 pocillos

Question 5

enfermedades que se pueden diagnosticar con la prueba

Answer 5

influenza aviar
bronquitis infecciosa
mycoplasma septicum
mycoplasma gallinarum

Question 6

virus naturalmente hemoaglutinantes

Answer 6

New castle
Bronquitis
Influenza aviar

Question 7

sedimentacions

Answer 7

los glubulos rojos se sedimentan, viajan al fondo por el peso

Question 8

hemoaglutinacion

Answer 8

los globulos rojos no se sedimentan y se crea una red que los une evitando la sedimentacion de los mismos

Question 9

inhibicion de la hemoaglutinacion

Answer 9

el suero con el antigeno se unen evitando la union al globulo rojo produciendo la sedimentacion formando el boton

Question 10

procedimiento

Answer 10

1. 25microlitros de PBS en los 96 pocillos
2. 25 microlitros de suero problema en la primera fila (8 sueros)
3. agitar con una micropipeta multicanal de 4 a 6 veces, de la fila 1 a la 12
4. tomar 25 microlitros de la fila 1 y se pasa a la 2, se mexzcla y se pasa a la 3 hasta llegar a la 11
5. se succionan 25 microlitros de la fila 11 y se descartan
6. se agregan 25microlitros de antigeno de new castle de la 1 a la 11 y de la A a la H
7. incubar por 30 minutos a 22°C para la interaccion antigeno anticuerpo
8. agregar 25 icrolitros de globulos rojos al 1% en toda la placa
9. incubar por 30 a 40minutos a 22°C y se puede observar la inhibicion como un punto rojo
   10 la lectura se realiza inclinando la placa 45°

Question 11

por que se agita de la 1 a la 11

Answer 11

para que se diluyan el suero y ver cuantos anticuerpos hay que succionar

Question 12

resultados

Answer 12

titulos mayor a 9: desafio de campo

titulos menor a 4: negativos se interpreta como 0

Question 13

fundamento de la prueba de HI

Answer 13

los anticuerpos especificos bloquean las hemoaglutininas del virus en el suero problema dando lugar a la sedimentacion de los globulos rojos formando el boton.