Parte Prática - Exames Flashcards
Relativamente ao laboratório de cultura de células, selecione a opção correta:
a. A câmara de fluxo laminar vertical contém filtros HEPA, que filtram microrganismos de tamanho superior a 0.2 μm, em que o fluxo de ar filtrado atinge a amostra na direção horizontal.
b. O microscópio invertido contém a fonte de luz e o condensador no topo, permitindo a observação das células.
c. Durante todos os procedimentos realizados na cultura de células, apenas é necessário utilizar bata de laboratório como medida de proteção individual.
d. Antes de iniciarmos o trabalho, não é necessário limpar e desinfetar a área de trabalho dentro da câmara de fluxo laminar, sendo possivel começar a trabalhar de imediato.
Alínea B!
O composto dimetilsulfóxido (DMSO), atua como agente criopreservante aquando da congelação de células porque (selecione a opção correta):
a. Impede a contaminação das células com bactérias durante o período em que as células se encontram congeladas.
b. O DMSO não induz toxicidade nas células.
c. Permite a hidratação das células durante o processo de congelação.
d. Impede a formação de cristais de gelo intracelulares e extracelulares durante o processo de congelação.
Alínea D!
Selecione a afirmação correta relativamente a genes repórteres e antibióticos de seleção.
a. Para selecionar células utilizando um antibiótico, como a Puromicina, é necessário as células expressaram um gene de resistência ao composto usado.
b. Não é possível combinar a utilização de um gene repórter, como o EGFP, e de um antibiótico de seleção na mesma placa de cultura.
c. Em cultura de células, os antibióticos são apenas utilizados como proteção contra contaminações.
d. Após o tratamento de células com Mitomicina C, não se observa alterações a nivel da proliferação celular comparativamente a uma condição sem tratamento.
Alínea A!
Qual dos procedimentos não deve ser feito, na câmara de fluxo laminar que usou?
a. Passar com um objeto não-estéril por cima de uma placa de cultura aberta.
b. Passar com um objeto não-estéril à frente de uma placa de cultura aberta.
c. Passar com um objeto não-estéril por cima de uma placa de cultura fechada.
d. Passar com um objeto não-estéril lateralmente a uma placa de cultura aberta.
Alínea A!
Determine aproximadamente qual o volume de DNA que deve utilizar para a transfecção de células, considerando que a concentração é de 1.37μg/μl e que precisa de colocar 600ng de DNA:
a. Volume de DNA: 0,23μl
b. Volume de DNA: 437,96μl
c. Volume de DNA: 0,44μl
d. Volume de DNA: 2,28μl
Alínea C!
Durante a cultura de células, se detetar uma contaminação bacteriana na sua linha celular deve (selecione a opção correta):
a. Adicionar antibióticos e aguardar que a contaminação passe.
b. Lavar várias vezes as células com PBS.
c. Deitar fora as células e descongelar um novo frasco de células.
d. Continuar a trabalhar com estas células como se nada fosse.
Alínea C!
Queremos preparar uma subcultura de células HeLa com uma diluição de 1:4 num volume final de 10ml, e partindo de uma suspensão celular inicial de 6 ml. Qual o volume de células e de meio de cultura que precisa de adicionar ao novo frasco de cultura? (Selecione a opção correta)
a. 2.5ml de suspensão celular e 7.5ml de meio de cultura.
b. 2ml de suspensão celular e 8ml de meio de cultura.
c. 1.5ml de suspensão celular e 8.5ml de meio de cultura.
d. 1ml de suspensão celular e 9ml de meio de cultura.
Alínea A!
Num protocolo de passagem e expansão de células, indique qual a frase correta relativamente à ordem pela qual se deve realizar o procedimento:
a. O procedimento inicia-se colocando a solução de PBS diretamente em cima das células, colocando-se de seguida a solução de tripsina durante 5min, e depois coloca-se meio de cultura novo.
b. O procedimento começa com a aspiração do sobrenadante, seguido de lavagem com PBS e aspiração, colocando-se de seguida tripsina durante 5min e aspirando-se a tripsina, e depois coloca-se meio de cultura novo.
c. O procedimento inicia-se com o descongelamento das células no banho a 37°C, após o qual se coloca as células num tubo e se realiza um passo de centrifugação, seguindo-se por fim a ressuspensão das células.
d. O procedimento começa com a aspiração do sobrenadante, seguido de lavagem com PBS e aspiração deste, colocando-se depois tripsina durante 5min, e de seguida meio de cultura novo.
Alínea D!
A eficiência de transfecção das células pode ser afetada por diversos fatores. Selecione a opção correta.
a. Diferentes tipos celulares não deveriam apresentar diferentes eficiências de transfecção, usando o mesmo agente de transfecção.
b. A qualidade/integridade do DNA plasmidico não afetam a eficiência de transfecção.
c. Podemos utilizar genes repórteres para avaliar a eficiência de transfecção das células.
d. O agente de transfecção selecionado não afeta a eficiência deste procedimento.
Alínea C!
Após a contagem de células de uma suspensão celular de 3ml, utilizando a câmara de Neubauer, obteve-se uma média de 50 células por quadrante. Considerando que para a contagem de células, misturou 10ul da suspensão celular com 10ul de azul de tripano, tendo colocado 10μl desta mistura na câmara de Neubauer, determine qual o número total de células que se encontram na suspensão celular?
a. 3x106 células
b. 1x106 células
c. 15x106 células
d. 1.5x106 células
Alínea A!
Indique qual a opção correta relativamente à observação das preparações de culturas transfectadas no microscópio de fluorescência.
a. Para observar a expressão da proteina EGFP, poderíamos utilizar um microscópio de luz visivel.
b. A marcação com DAPI permitiu a observação de todas as células que se encontravam na preparação visualizada.
c. As células transfectadas não se encontravam coradas com DAPI, sendo apenas visível a fluorescência da proteína EGFP.
d. A marcação com DAPI encontrava-se no citoplasma das células HeLa.
Alínea B??
Indique qual o propósito de utilizar a solução de tripsina na cultura de células (selecione a opção correta):
a. Lavar as células que estão aderentes ao frasco de cultura para remover células mortas.
b. Destacar as células que não estão aderentes ao frasco de cultura para remover células mortas.
c. Destacar as células aderentes ao frasco de cultura através de dissociação mecânica.
d. Destacar as células aderentes ao frasco de cultura através de dissociação enzimática.
Alínea D!
Para preparar 100ml de meio de cultura, indique qual o volume que devemos adicionar de cada solução tendo em conta as seguintes informações: (i) a solução de Glutamax encontra-se a uma concentração inicial de 200mM, e pretendemos que esteja a uma concentração final de 2mM no meio preparado; (ii) a solução de Penicilina/Estreptomicina (10000 U) que está 100x concentrada, deverá estar 1x concentrada no meio que pretendemos preparar; (iii) pretendemos adicionar 10% de soro fetal bovino (FBS) ao meio final preparado. (Selecione a opção correta)
a. 1ml de Glutamax, 1ml de Penicilina/Estreptomicina (10000 U), 10ml de FBS, 88ml de DMEM.
b. 2ml de Glutamax, 1ml de Penicilina/Estreptomicina (10000 U), 10ml de FBS, 86ml de DMEM.
c. 2ml de Glutamax, 2ml de Penicilina/Estreptomicina (10000 U), 10ml de FBS, 86ml de DMEM.
d. 1ml de Glutamax, 1ml de Penicilina/Estreptomicina (10000 U), 5ml de FBS, 93ml de DMEM.
Alínea A!
Após a contagem de células utilizando o hemocitómetro, o número total de células obtido foi de 5x10^6 células/ml. Pretendemos plaquear 2x10^5 células por poço. Quais as diluições que devem ser feitas para se adicionar 1ml da suspensão celular por poço?
a. 1/5 e depois 1/2.
b. 1/2 e depois 1/12.5.
с. 1/10 e depois 1/5.
d. 1/8.6 e depois 1/3.
Alínea B!
Indique a afirmação correta sobre as células HeLa utilizadas nas aulas práticas:
a. As células HeLa foram isoladas do colo do útero de um indivíduo saudável.
b. As células HeLa foram isoladas do colo do útero, tendo um genoma normal (2n - 46 cromossomas).
c. As células HeLa foram isoladas de um carcinoma cervical de origem epitelial.
d. As células HeLa apresentam fenótipo semelhante aos fibroblastos, com morfologia alongada e fusiforme.
Alínea C!
