Parcial Lab Bio Corte 1 Flashcards
Para que sirve el agua de milli Q
Purificación
El no utilizar SDS en la extracción de ADN provocaría
No se disgregarán las membranas
Para la lisis de la envoltura nuclear se usa
SDS
En el proceso de extracción de ADN humano la degradación del ADN se evita utilizando
EDTA
En la extracción de ADN humano, cuál es la sustancia que se utiliza para la precipitación de proteínas
Solución concentrada en sales
En la técnica de extracción del ADN de sangre humana, el precipitado blanco que corresponde al ADN recién separado de los componentes del extracto celular, se puede observar después de haber agregado
NaCl
El antibiótico que se usó en el ,edil de cultivo para forzar a e.coli a mantener el plasmado recombinante fue
Ampicilina
El plasmido pGluc-2 es un vector que se utiliza para la expresión de genes que provienen de
Mamíferos
Cuando se mide la pureza del ADN en el rango de luz ultravioleta, la presencia de proteínas se pueden medir debido a que presentan su maximo de absorción a
280nm
Que hace el tritón x-100
Disuelve lípidos y proteínas sin altera, la estructura de otras moléculas
Células nucleadas
Leucocitos
Células anucleadas
Eritrocitos y plaquetas
En la extracción del ADN sanguíneo el tampon A (hipotonico) servía para
Lisis de la membrana cell y para desprender la hemoglobina
Que es la heparina
Es un anticoagulante que se pega a los sitios activos de las enzimas, bloquea la acción de las polimerasas y endonucleasas sobre el ADN
Máximo de absorción de luz del ADN
260nm
Ecuación de Lambert Beer
Absorbancia= coeficiente de extinción del medio x Logintid atravesada por el rayo de luz x concentración de la solución
Para que la muestra se considere pura tiene que tener un rango de pureza de
Entre 1.8 y 2.0
Si el valor de pureza es inferior a 1.8 indica que hay
Proteínas y sales
Si el valor de pureza es superior a 2.0 iinidica que hay
Alcoholes
Fórmula para encontrar la concentración del ADN
(A320-A260) X factor de dilucion x 50 Ug/ml
Fórmula para calcular la pureza
(A320-A260)/(A320-A280)
como se Purifica el ADN
En este caso para obtener una muestra pura se debe emplear un método de extracción orgánico llamado precipitación este se utiliza al tener ADN con etanol en presencia de sales y a bajas temperaturas.
La técnica consiste en que mediante centrifugación el ADN precipitado formará un sedimento en el fondo del tubo; luego se retirará todo el sobrenadante y dejaremos secar el sedimento para que se evapore el etanol para así finalmente resuspenderlo en el volumen que deseemos de agua o del tampón que nos sea más útil con la finalidad de tenerlo en disolución listo para su estudio. Este método logra retirar las proteínas y otros componentes celulares separándolos de los ácidos nucleicos. El ADN obtenido es de doble hebra.
Luego de esto y una vez obtenido el pellet con ADN, realizaremos un lavado con etanol al 70 % que permite una mayor purificación o elución de los ácidos nucleicos de los iones y sales residuales.
Para que sirve la expresión de los genes del plasmido pCMV-GLuc2
- Ori pMB1
- Promotor Pcmv
- Promotor del virus SV40 Psv40
- Gen luciferasa del calamar
- genes de resistencia a antibióticos: neomicina y ampicilina
A, vector pcmv-gluc2 se le clono Gpi para
Transformar químicamente la cepa de E.coli
