p3 Flashcards
La secuencia original es: 5’ TTC GTG 3’
La secuencia con mutación es: 5’ TAC GTG 3’
Según las bases que cambiaron, ¿Cuál es tipo de mutación?
* Transición
* Transversión
* Deleción
* Inserción
TRANSVECCION
De las siguientes opciones, selecciona la que tiene el codón de inicio y un codón de
STOP:
AUG - UAA
De las siguientes opciones ¿Cuál es un efecto de las cascadas de señalización?
* Regulación de la expresión génica
* Formación de enlaces fosfodiéster
* Síntesis de RNA de interferencia maduro
* Formar spliceosoma
REGULACION DE LA EXPRESION GENICA
La secuencia original es: 5’ TAC GT6 3’
La secuencia con mutación es: 5’ TC GTG 3’
Según las bases que cambiaron, ¿Cuál es tipo de mutación?
DELECION
Esta es una mutación en donde cambia una base, pero no cambia el aminoácido para el que codifica. Según su efecto en el fenotipo ¿qué tipo de mutación es?
SILENCIOSA O NEUTRA
¿Cuál es tipo de mutación que ocurre en un SNP?
MUTACION DE TIPO DE SUSTITUCION
De las siguientes opciones ¿Cuál es un ejemplo de un tipo de polimorfismo?
- PCR
- SNP
* ncRNA
* Splicing alternativo
SNP
El genotipo para los genes ABO sanguíneos de este paciente, es: BO. ¿Cuál de las siguientes características son ciertas para este paciente?
es heterocigoto para los genes ABO
De las siguientes opciones ¿Cuál es una característica de las enzimas de restricción
tipo Il que usamos en las prácticas?
* Son exonucleasas
* Son Ligasas
* Son polimerasas
* Son endonucleasas
ENDONUCLEASAS
EN UNA MUESTRA CUAL ES CARRIL MAS GRANDE DE DNA
EL QUE ESTA MAS CERCA
…
Es un cofactor común para las DNA-polimerasas y para las enzimas de rest
Es un cofactor común para las DNA-polimerasas y para las enzimas de restricción
tipo II:
MAGNESIO
Cuando una enzima de restricción corta un fragmento de DNA, deja dos tipos de extremos ¿Cuáles son estos?
Extremos Romos y Extremos Cohesivos
Es uno de los objetivos de hacer clonación molecular de DNA:
AMPLIFICAR FRAGMENTOS DE DNA ESPECIFICOS
De las siguientes opciones, selecciona cuál NO es un tipo de vector:
* Cósmidos
* SNP
* Vectores virales
* Plasmidos
* Cromosoffas artificiales
SNP
PASOS PARA LA CLONACION
- PREPARAR EL FRAGMENTO DE DNA O GEN
- PREPARAR EL VECTOR
- LIGACION DEL VECTOR Y FRAGMENTO DE DNA O GEN
- INCORPORACION DE UNA CELL POR TRANSFORMACION
- PROPAGACION DE LA CELL
- SELECCION DE CELULAS TRANSFORMANTES
- EXPRESION DEL FRAGMENTO DE DNA CLONADO
Quiero clonar varios genes con sus promotores, en total son 200 kilobases, ¿Qué tipo de vector es el más adecuado?
- Cromosoma artificial de levaduras
¿Cuál es la diferencia entre transformación y transfección molecular?
TRANFORMACION ES PARA CELL PROCARIONTE
Y TRASFECCION PARA EUCARIONTES
Método de transfección más usado en plantas.
BIOBALISTICA
Método de transfección más usado en humanos.
LIPOSOMAS Y MICROINYECCION
Tipo de transformación que emplea
Cloruro de Calcio y fue la que utilizamos en el laboratorio.
TRANSFORMACION QUIMICA
ES UN METODO DE SELECCION DE BACTERIAS TRANSFORMADAS MUY UTILIZADO EN LAB
Que el vector o plásmido tenga un gen de resistencia a un antibiótico.
Es un tipo de genoteca que sólo contiene regiones codificantes:
GENOTECA DE CDNA
el dna genomico es para codificantes y no codificantes
De las siguientes opciones, selecciona cuales si pueden observarse en una electroforesis para su análisis: (3)
RNA, DNA, Y PROTEINAS
En ocasiones se prefiere hacer una electroforesis que tengan mejor resolución, esta generalmente es vertical… ¿De qué esta hecha la matriz sólida para estos geles?
POLIACRILAMIDA
Es el buffer o amortiguador que lleva glicerol, colorantes como xylen cyanol, e intercaladores de DNA, este se mezcla con la muestra de DNA, y así se carga en el gel. ¿A qué buffer nos referimos?
BUFFER DE CARGA (LOADING BUFFER)
Es la primer fase, suele ser a 94 0 95 grados centígrados. Se busca que se rompan los puentes de hidrógeno y se separen las cadenas de DNA.
DESNATURALIZACION
Es la segunda fase, se hace de 54 a 59 grados centrígrados. En esta fase los primers se alinean a su secuencia complementaria.
HIBRIDACION O ALINIAMINETO
Es la tercera fase, se hace a 72 grados centígrados, aunque puede variar. En esta fase la DNA-polimerasa sintetiza las nuevas cadenas de DNA.
AMPLIFICACION O EXTENSION
En este tipo de PCR que se cuantifica la cantidad de DNA que se va amplificando en cada ciclo, por lo que se puede medir la expresión de los genes de manera muy precisa.
- qPCR o PCR-tiempo real.
A partir de RNA, se producen miles de copias de cDNA. Por lo que se puede medir expresión de genes, o detección de RNA viral.
- RT-PCR
Es una técnica de PCR que en combinación con el corte de una o varias enzimas de restricción se pueden detectar polimorfismos.
RFLP
Se puede detectar presencia o ausencia de una secuencia de DNA. Es una detección cualitativa.
pcr DE PUNTO FINAL
Es un método de diagnóstico molecular, en el que se obtiene la secuencia específica de DNA que se esté buscando.
SECUENCIACION
De las siguientes técnicas, selecciona con cuales podemos detectar proteínas:
WESTERN Y SOUTHERN
- Tienes un paciente con obesidad, sospechas que es un caso de obesidad monogénica (que se debe a un sólo gen). Conoces la secuencia de este gen y sabes que tiene un polimorfismo que origina la enfermedad y quieres saber si este polimorfismo está presente en tu paciente. ¿Qué técnica usarías?
POLIMORFISMO - PFLP
Sospechas que este paciente tiene una alteración cromósomica, le falta un pedazo de 10 mil pares de bases en el cromosoma 5. ¿Qué tipo de técnica usarías para confirmar tu sospecha?
FISH
Es un tipo de técnica de diagnóstico, que se usa para conocer la presencia o ausencia de una proteína, por medio del uso de anticuerpos:
ELISA
Tienes un paciente con cáncer, sospechas que se está expresando demasiado (sobreexpresando) el gen Ras-K, hiciste un RT-PCR y salió positivo, pero los controles no salieron bien ¿Qué técnica usarías para corroborar tus resultados del RT-PCR?
NORTHERN BLOT
Son un tipo de anticuerpos que reconocen el mismo epítope en el mismo antígeno.
Anticuerpos monoclonales
Para obtener este tipo de anticuerpos, se inocula un modelo animal, se espera a que desarrolle anticuerpos, y estos se extraen para su uso:
POLICLONALES
TECNICAS PARA EDICION DE GENES
CRISPR-CAS9, EXON SPPIKKING
Este es un paciente que no puede producir suficiente insulina, por lo que la terapia más adecuada para él es inyectarle insulina exógena. ¿Qué tipo de terapia molecular es esta?
PROTEINAS RECOMBINANTES
3 ESTRATEGIAS PARA TERAPIA GENICA O TERAPIA MOLECULAR
SILENCIAMIENTO, EDICION Y ADICION DE GENES
Es un paciente en donde se sobreexpresa el gen BCL2, lo que le produce una alteración en la regulación de la apoptosis. Buscas disminuir la expresión de este gen con terapia génica ¿Qué tipo de técnica se ajusta mejor a este objetivo?
RNA de interferencia (miRNA)
Es un tipo de RNA no codificante que regula la expresión de los genes, y se asocia con esta proteína para hacer su función:
siRNA y RISC
Son los componentes de CRISPR-Cas:
*RNA guía y la nucleasa Cas.
Análisis cromosómico. Se revisa si el número y tamaño de cromosomas es normal.
CARIOTIPO
Se pueden detectar anomalías cromosómicas, o deleciones de fragmentos grandes de un gen o un grupo de genes
FISH
Se puede detectar para predisposición para una enfermedad por la presencia de un determinado alelo. Es necesario conocer la secuencia del gen.
PCR
Se pueden detectar variantes polimórficas.
RFLP
Comparación, detección de secuencias con mutaciones asociadas a una enfermedad. Es caro y laborioso, por lo que generalmente se sustituye por otra técnica.
SECUENCIACION
Método para detectar proteínas que se expresan en un padecimiento específico.
ANTICUERPOS
Comparación de genomas, se puede comparar expresión de genes.
MICROARREGLO
QUE TIPO DE ENZIMA TIENE?
Southern blot (DNA)
Northern blot (RNA)
ACIDOS NUCLEICOS
Western blot ES PARA?
PROTEINAS
Hibridación in situ, como FISH.
DNA Y CROMOSOMAS
CRISP CAS ES PARA
EDICION DE GENES
Consiste en analizar los exones de ciertos genes seleccionados
EXOMA CLINICO DIRIGIDO
En este caso, la prueba consiste en el análisis de todos los exones de
todos los genes conocidos asociados a enfermedades
EXOMA CLINICO COMPLETO
Consiste en la secuenciación de todos los exones de los más de 20.000 genes conocidos.
EXOMA COMPLETO
Diagnóstico y
orientación del
tratamiento
médico.
EXOMA
PREVENCION Y DX MEDICO
GENOMA
