Molekuler Biyoloji Flashcards
DNA önemli ozellikleri?
*Negatif yüklü
*Suda cozunur alkolde cozunmez
*İnaktif DNA nükleusda sıkı paketlidir
İnaktif DNA neden sıkica paketlenmistir?
Sıkı paketlenip inaktif kalmasi icin ve DNA ekspresyonunu kontrol etmek icindir
DNA izolasyon asamalari nedir?
1.Lizis
2.Denaturayson veya proteoliz ile DNA-PROTEİN kompleksinin ayrilmasi
*3.(PRESİPİTASYON) DNA nin basit enzimatik yontemlerle makromolekullerden(proteinler RNA) ayrilmasi
DNA izolasyonunda mekanik olan fiziksel yontemler nelerdir?
*Osmotik şok
*Ultrasonikasyon
*Dondurma-çözme (donrurara enzim aktivitesini durdurursun çözerek DNA yi serbest birakirsin)
*Havan
*Sıvı azot
*French press
DNA izolasyonunda
*Osmotik şok
*Ultrasonikasyon
*Sıvı azot
Nasil işe yarar açiklayiniz?
*osmotik şok hucre ve dis ortam arasindaki osmotik farki artirarak hucre zarinin gecirgenligini artirip hucre organellerinin disari cikmasini saglar DNA eldesi kolaylaşir.
*Ultrasonikasyon ses dalgalarinin titresimi ile hucre zarini parcalar
*Sivi azot hucre zarinin aniden donmasini saglayarak hucre zarini parçalar.
Denaturasyon Renaturasyon islemi nedir?
Denaturasyon sarmal yapinin cozunmesinini saglar yuksek ph ya da sicaklik ile. Renaturasyon ise tam tersidir kosullar eski haline getiildiginde gerceklesir. Ancak kosullar eski haline aniden getirilirse şok etkisiyle DNA yapisinda bozunmalar meydana gelir.
DNA izolasyonu yontemleri nelerdir?
- Fiziksel yontemler
- Kimyasal yontemler
- Enzimlerin ve çözuculerin kullanimi
Lizozim nedir?
Bakteri hucresindeki peptidoglikanin tabakasindaki glikozidik baglari hidroliz eder.
EDTA nedir?
Lizozimin icteki peptidoglikan tabakaya gecisini kolaylastirir ve magneztj baglayarak DNAaz enziminin aktivitesini inhibe eder.
Amonyum sulfat ve sodyum sulfat ne icin kullanilir?
Proteinlerin cokeltilmesi icin kullanilir
Tris nedir?
Ph tamponudur. Ph degisimine karsi direnclidir. DNA nin çözünür halde kalmasini saglar ama onu korur
SDS nedir?
Hucre zarini parcalamak icin kullanilir DNA ya zarar vermez
Presipitasyon nedir?
DNA nin enzimatik veya kimyasal yontemlerle proteinler ve RNA lardan arindirilma islemidir
İsopropanol ve etanol izolasyonda ne ise yarar?
DNA yi cokeltmek icin kullanilirlar
Trizol nedir?
En iyi RNA izole edici maddedir
Fenol/kloroform DNA izolasyonu icin ne ise yarar?
*Fenolde nukleit asitler cozunmez
*Lipidler, proteinler ve polisakkaritler fenol fazina gecerler
* fenol denature edici olarak davranir proteiner denature olarak cokelir ve ara fazda toplanir
*Kloroform ise DNA yi cozeltiden ayirir
Fenol daha cok dna yi proteinlerden ayirirken kloroform dna yi korur
DNA ve proteinlerin max absorbe ettigi nanometreler kaçtir?
DNA 260
Protein 280
DNA izolasyonu detayli asamalarini sayin 5 madde
- Lizis çözeltisi ile kan ornegi karistirilir ve 65° de inkube edilir
- Ustune kloroform eklenerek santrifuj edilir
- DNA iceren ust sulu faz yeni tüpe koyulur ve taze hazirlanmis presipitasyon solusyon eklenir
- Supernatant tamamen uzaklastirilir ve tuz cozeltisinde DNA pelleti hafif vortekslenerek cozulur.
- Pellet bir kez etanol ile yikanir ve hafif pipetaj ile steril deiyonize su icinde cozulur.
Pcr icadi kimindir?
Kary mullis
İlk kez basarili gerceklestirilen in vitro DNA amplifikasyonu kim tarafindan gerceklestirilmistir?
Saiki ve arkadaslari
DNA dizilimi hangi uçtan başlayarak devam eder?
3’
Pcr da RNA nasil kullanilabilir?
cDNA sayesinde yanj tamamlayici DNA. Bu DNA mrna dan sentezlenen DNA dir. Molekul agirligi fazla olan DNA yi notl ve sfil kullanarak kestikten sonra kullanabiliriz
Notl ve sfil enzimleri ne ise yarar
Notl ve Sfil direkt DNA nin belirli bolumunu taniyip kesebilen enzimdir
