Modèle BY-2 Flashcards
Le modèle BY-2 est fondé sur quel organisme? Que signifie BY?
Nicotiana tabacum. Bright Yellow
Quelle est la raison explicant la couleur particulière d’une culture d’un modèle BY-2? Quelle structure est formée?
l’obscurité empêche la formation de choloroplastes. Des amyloplastes sont formés (plutôt que des choloplastes)
Quelle est la source de carbone dans le milieu de culture du modèle BY-2?
du saccharose (3%)
Décrit la culture des cellules de tabac:
Au niveau du volume de la culture;
La méthode de culture (continue/discontinue);
Rapidité de croissance;
Production de nicotine?;
Production d’ubiquinone?;
Le rôle de Pseudomonas et Rhodotarula;
La température;
Agitation?;
Lumière;
Décrit la culture des cellules de tabac:
Au niveau du volume de la culture: énorme volume 1000L
La méthode de culture (continue/discontinue): continue
Rapidité de croissance: rapide
Production de nicotine?: non
Production d’ubiquinone?: oui
Le rôle de Pseudomonas et Rhodotarula: aide à la croissance
La température: 25^C
Agitation?: oui, 200 rpm
Lumière: NON
Nomme deux avantages des cellules BY-2
- Idéale pour la LOCALISATION SUBCELLULAIRE par IMMUNOFLUORESCENCE ou par expression de protéines de fusion (eGFP), car ce sont des grandes cellules
- Étude du CYCLE CELLULAIRE et de sa régulation facile grâce à sa croissance rapide et la possibilité de SYNCHRONISER les cellules entre elles
Qu’est-ce qu’un cal (microcal)
Un agrégat de cellules
Vrai ou Faux?
Les cellules BY-2 forment des microcals en culture
Faux
Vrai ou Faux?
Les cellules BY-2 émettent de la lumière par elles-même? (autofluorescence notoire)
Faux
Qu’est-ce que du DAPI? Quel est sont rôle dans l’observation du cycle cellulaire au microscope.
C’est un fluorophore bleu qui se lit à de l’ADN. Permet de suivre l’ADN tout au long du cycle cellulaire.
Décrire un moyen de transformation STABLE des cellules végétales
Avec Agrobacterium tumefaciens (la souche bactérienne contient GFP dans sont plasmide)
Décrire un moyen de transformation TRANSITOIRE des cellules végétales
Bolistique/ Canon à particule
Vrai ou Faux?
Il est possible d’observer au microscope, grâce à une protéine de fusion fluorescente, les empilement des sacs golgien (appareil de golgi)
Vrai
Nommer les étapes de la mitose et leur principale caractéristique
Prophase: Condensation de la chromatine
Métaphase: Allignement des chromosomes à l’équateur
Anaphase: Séparation des chromatides soeurs
Télophase: Fermeture de la cellule
Nommer les étapes du cycle cellulaire et leur principale caractéristique
G1: Rien
S: Synthèse (réplication d’ADN)
G2: rien
M: Mitose (division cellulaire)
Nomme deux drogues qui inhibe une étape du cycle cellulaire. Quelle étape est inhibée et pourquoi?
APHIDICOLINE: inhibe la polymérase alpha -> impossible de synthétiser l’ADN. bloque l’entrée en phase S
PROPYZAMIDE: inhibe la formation de microtubule. Empêche la mitose.
Quelle est la particularité des deux drogues permettant la synchronisation des cellules BY-2?
Le blocage qu’elles cause est RÉVERSIBLE
À quoi servent le H^3 Thymidine et ses analogues (BrdU et EdU) dans l’étude du cycle cellulaire?
Le H^3 Thymidine et ses analogues s’incrustent dans le noyaux, ce qui permet de suivre la progression du cycle (phase S)
À quoi servent le DAPI et l’IP dans l’étude du cycle cellulaire?
Permettent de se lier à l’ADN et de suivre la progression du cycle (phase M)
Vrai ou faux?
Il est possible de réaliser un double blocage pour mieux synchroniser les cellules BY-2? Comment peut-on évaluer une “meilleure synchronisation”?
Vrai, on juge la synchronisation par l’indice mitotique. PLus l’indice (%) est grand, meilleure la synchronisation est )
Avec quelle technique est-il possible d’évaluer la quantitée d’ADN contenue dans une cellule?
Cytométrie en flux
Les Cdk sont des kinases qui dépendent de cyclines. Comment les cyclines sont-elles régulées au cours du cyle cellulaire? Nommer les deux manières.
- Régulations transcriptionnelle (l’accumulation d’ARNm va augmenter la quantité de cycline synthétisée et l’activité totale (régulation positive))
- Régulation post-traductionnelle (dégradation de la protéine (régulation négative))
Quel seuil de quel molécule faut-il franchir pour débuter la mitose?
Il faut avoir assez du complexe Cdk2-cyclineM
On peut observer le plus haut pic d’intensité de fluorescence et le plus bas dans pic d’intensité de fluorescence dans une même mitose. Pourquoi?
Car la cycline se dégrade au fil de la mitose. C’est la dégradation de la cycline qui permet l’avancée de la mitose (formation de l’APC/C: anaphase promoting complex)
À quoi sert le motif D-box? Où est-il situé? Par quelle enzyme sera-t-elle reconnue?
Il va être reconnu par l’ubiquitine ligase, menant à sa dégradation (régulation post-traductionnelle)
Qu’arrive-t-il lorsque le motif D-box est muté?
La cellule mère n’est jamais divisée, car l’APC/C n’est jamais formée. Mème à multipoïdie.
