Mikroskopi Flashcards
Lysmikroskopets totale forstørrelsesevne
Objektivforstørrelsen x okularforstørrelsen
Vores kan højst forstørre 400x
Forskelle på lysmikroskopi, transmissions‐elektronmikroskopi og scanning elektronmikroskopi
LM: Bruger lys, max opløsningsevne = 0,4 um
TEM: Skyder elektroner gennem objektet, opløsningsevne = 0,2 nm, ultra tynde snit
SEM: Elektroner skydes på objekt, opfanges af detektor, til at se overflader, opløsningsevne = dårligere end TEM, ikke nær så tynde snit
Trin i præparation af væv til lys- og elektronmikroskopi
FIKSERING: Standser celleprocessor med fiksativer, som samtidig fastholder strukturen, koagulerende (ændrer proteiners konformation) og gelerende (danner tværbindinger)
INDSTØBES: støbes ind i fx smeltet paraffin
SKÆRES: skæres tyndest hvis det er TEM
FARVES
Forskelle mellem uspecifikke, selektive og specifikke farvemetoder + eksempler
USPECIFIKKE: enten basofile eller acidofile, fx hæmatoxylin (blå), toluidinblåt (blå) og methylblåt (basofile) og eosin ((lyserød) acidofile). De basofile hæfter sig ved aniongrupper og de acidofile hæfter sig til kationgrupper.
SELEKTIVE: specifikke komponenter, fx Van Gieson -> kollagen (rød), Mallory-Azan -> bindevæv (blå), orcein -> elastin (rødbrun) og PAS -> glykoproteiner (pink).
SPECIFIKKE: enzymhistokemi (enzymaktivitet), fx Feulgen (DNA), Immunhistokemi -> specifikke antigener gennem primære og sekundære antistoffer.
Basofili og acidofili
BASOFILE: farver blåt,
Fx hæmatoxylin, toluidinblåt og methylblåt
hæfter sig ved aniongrupper (negativt ladede partikler) fx. DNA og RNA
ACIDOFILE: farver lyserødt
Fx eosin
hæfter til kationgrupper (positivt ladede partikler) fx. Cytoplasmatiske proteiner
Principper og formål med enzymhistokemi og immunhistokemi
Farves for specifikke enzymer/antigener i præparatet.
ENZYMHISTOKEMI: udfældning eller dannelse af farvet komponent ved en reaktion som er blevet katalyseret af det enzym som der testes for.
IMMUNHISTOKEMI: specifikke antistoffer, hæfter sig til det antigen man tester for, anvendes da et sekundært antistof som har enten et fluorescerende (til LM) eller tungmetal (til TEM) hæftet til sig = ses via mikroskopi.
