Microscopie Flashcards
Quels sont les types de microscope communs?
- microscope simple
- microscope composé
De quoi est composé le microscope simple?
une seule lentille permettant de grossir l’image
Comment fonctionne un microscope composé?
- l’image est d’abord agrandie par l’objectif
- l’image est ensuite agrandie par l’oculaire
Quels sont les types de microscope composés?
- microscope droit
- microscope inversé
- stéréomicroscope
Quelle est la prinicpale utilité du microscope droit?
visualisation de lames
Quelle est la principale utilité du microscope inversé?
observation d’échantillons vivants
Quelle est la principale utilité du stéréomicroscope?
- observer les échantillons en 3 dimensions
Quel est le principal avantage des stéréomicroscopes?
le système de grossissement interne permet de choisir le grossissement sans changer d’objectif
Quel est le rôle de l’objectif?
responsale du premier grossissement
Comment peut-on déterminer le grossissement que permet un objectif?
- pouvoir de grossissement indiqué en “x”
- couleur de la ligne sur l’objectif
À quoi correspond la résolution d’un objectif?
la distance minimale séparant deux points pouvant être distingués
À quoi la résolution est-elle proportionnelle?
son ouverture numérique
De quoi la résolution est-elle indépendante?
du grossissement
Qu’est-ce que l’ouverture numérique (NA)?
indice de la quantité de lumière qu’un objectif peut recueillir
Quel est l’impact de l’ouverture numérique sur la résolution?
plus NA est grande, meilleure est la résolution
Quel est la relation entre l’ouverture numérique et la distance de travail?
plus la NA est grande, plus la distance de travail est courte
Où peut-on retrouver la NA sur l’objectif?
se trouve à côté du grossissement sur l’objectif
Qu’est-ce que permet l’utilisation d’un milieu d’immersion?
- augmenter l’ouverture numérique (et donc aussi sa résolution)
- plus de lumière est captée par l’objectif
Quel est le principe de l’utilisation d’un milieu d’immersion?
permet de diminuer les changements d’indices de réfraction
Quels sont les types d’illumination?
- lumière transmise
- lumière réfléchie
Quel type d’échantillon est utilisé avec la lumière transmise?
échantillons transparents
Quel type d’échantillon est utilisé avec la lumière réfléchie?
- des échantillons opaques
- des métaux
- des échantillons en fluorescence
Quelle est l’utilité d’un condenseur?
concentrer la lumière
Quelle est l’utilité du diaphragme?
ajuster la luminosité, le contraste et la profondeur de champ
Qu’est-ce qui correspond au condenseur en lumière réfléchie?
l’objectif
Quels sont les effets de l’ouverture du diaphragme sur:
- la luminosité
- la résolution
- la profondeur de champ
- le contraste?
- luminosité augmente
- résolution augmente
- profondeur de champ diminiue
- le contraste diminue
Comment ajuster le condenseur sans diaphragme de champ?
- faire la mise au point sur l’échantillon
- monter ou descendre le condenseur afin de voir le plan givré
- remonter le condenseur jusqu’à ce que l’image devienne nette
Comment ajuster le condenseur avec un diaphragme de champ?
- faire la mise au point à 10x
- fermer le diaphragme de champs jusqu’à ce qu’il soit visible
- monter ou descendre le condenseur jusqu’à ce que les contours du diaphragme devienne net
- ouvrir complètement le diaphragme de champ
Quels sont les types de tête du microscope?
- monoculaire
- binoculaire
- trinoculaire avec caméra
Quel est le rôle de la tête du microscope?
porter le ou les oculaires
Comment peut-on calculer le grossissement total?
en multipliant le grossissement de l’objectif avec celui de l’oculaire
Qu’est-ce qu’est le coefficient de champ?
indication de la largeur du champ de vision de l’oculaire
Quelles sont les techniques de microscopie en lumière transmise?
- champ clair
- contraste de phase
- contraste interférentiel
Quelle est l’utilité de la microscopie en champ clair?
permet de voir les spécimens ayant un bon contraste ou les spécimens colorés
Quelle est l’utilité de la microscopie à contraste de phase?
permet de changer les différences de phase en contraste (liquide vs solide)
Quel autre nom est utilisé pour la microscopie à contraste interférentiel?
DIC (Differential interference contrast)
Quelle est l’utilité de la microscopie à contraste interférentiel?
- permet de mieux voir les spécimens offrant peu de contraste (manque de lumière)
- produit des images avec un effet quasi-3D
Quel type d’illumination utilise la microscopie à fluorescence?
lumière réfléchie
Quel type d’image produit la microscopie à fluorescence?
des images sur fond noir où seuls les fluorphores sont visibles
Quelles sont les utilités de la fluorescence en biologie?
- détection de structures cellulaires
- détection de cellules spécifiques
- détection de certaines réactions
- détection de molécules spécifiques
Quel est le principe de la fluorescence?
excitation d’une molécules avec une lumière spécifique, qui va émettre un photon lors de son retour à son orbitale de base
Qu’est-ce que le photoblanchiment?
la perte de fluorescence d’un fluorophore
Quelle est l’utilité d’ajouter des antioxydants dans le milieu?
permet de diminuer le photoblanchiment
Qu’est-ce que la contamination entre canaux?
lorsqu’on peut voir un fluorophore dans un canal autre que celui désiré
Qu’est-ce qui peut causer une contamination entre canaux?
lorsque des fluorophores sont trop rapprochés au niveau des propriétés spectrales
Comment peut-on éviter la contamination entre canaux?
en utilisant des fluorophores dont les spectres d’excitation et d’émission sont éloignés
Quels sont les types de fluorophores?
- fluorophores réactifs
- fluorophores conjugués
- FISH
Qu’est-ce qu’un fluorophore réactif?
une molécule fluorescente qui a une affinité pour certaines structures
Qu’est-ce qu’un fluorophore conjugué?
un fluorophore liés à une autre molécule permettant la détection de cibles spécifiques
À quoi sont généralement liés les fluorophores?
- des anticorps
- des acides nucléiques
Qu’est-ce que l’immunofluorescence?
la détection par un anticorps conjugué à un fluorophore
Qu’est-ce que permet l’immunofluorescence?
permet de détecter un antigène spécifique
Quelle étape précède la détection d’antigènes intracellulaires?
les cellules doivent être fixées et perméabilisées
Quels sont les types d’immunofluorescence?
- détection directe
- détection indirecte
Quelle est l’utilité d’un fluorophore conjugué à un acide nucléique?
permet de cibler et de détecter une séquence spécifique d’ADN ou d’ARN
Qu’est-ce que sont les protéines fluorescentes?
des protéines exprimées par les cellules et agissant comme fluorophores
Qu’est-ce que permettent les protéines fluorescentes?
d’observer facilement des phénomènes dans des organismes vivants
Quelles sont les techniques de microscopie à fluorescence?
- microscopie à épifluorescence
- microscopie confocale à disque rotatif
- microscopie confocale à balayage laser
Quel avantage offre la microscopie confocale par rapport à la microscopie en épifluorescence?
la microscopie confocale permet de produire des images où seule la lumière au focus est captée
Quel est le fonctionnement de la microscopie confocale à balayage laser?
l’image est reconstituée point par point
Quel est le fonctionnement de la microscopie confocale à disques rotatifs?
la lumière émise passe à travers un disque rotatif rempli de petits trous, ce qui filtre la lumière hors focus
Quel est le principal avantage de la microscopie multi-photons?
comme l’excitation ne se fait qu’en un seul point, il y a un faible taux de photoblanchiment
Qu’est-ce que sont les microscopies super-résolution?
les techniques permettant d’atteindre une résolution plus grande que celle permise par la limite de diffraction
Quels sont les types de microscopie électronique?
- microscopie électronique à transmission
- microscopie électronique à balayage
Comment fonctionne la microscopie électronique?
utilisation d’un faisceau d’électrons au lieu d’un faisceau de photons
Qu’est-ce qui permet la résolution supérieure de la microscopie électronique?
la très faible longueur d’onde des électrons
Quel est le désavantage de la microscopie électronique?
ne permet pas de faire de l’imagerie d’organismes vivants
