microscopes Flashcards
Pourquoi les grossissement des microscopes photoniques (optique) et électronique ?
longueur d’ondes photons et longueur d’onde électrons = différentes
quels sont les 3 principaux composants d’un microscope ?
1- condensateur
2- objectif
3- oculaire
comment fait-on pour calculer l’agrandissement final d’un microscope ?
objectif x oculaire
qu’est-ce que la limite de résolution ? Comment est-elle calculée ?
distance minimale entre deux points qui peuvent être perçus comme étant distincts
0,5 x longueur d’onde / indice de réfraction x 0,5 angle du cône de lumière entrant dans l’objectif
Vrai ou faux. Avoir une grande limite de résolution est préférable.
Faux
qu’est-ce que l’ouverture numérique (NA)? Où est-il indiqué ?
c’est le ‘‘n sin 0’’
sur l’objectif
quels sont les longueur d’onde du visible ? de l’ultraviolet ?
1- 400 à 700nm
2- 180 à 400nm
Quel est la solution afin d’obtenir un longueur d’onde la plus petite possible? Pourquoi est-ce compliqué
d’aller dans les ultraviolets
ils sont invisibles à l’oeil nu et le verre est opaque au UV
il faudrait donc utiliser du quartz, mais trop $$$
alors on doit faire une transformation optique
Quel est l’indice de réfraction de l’air ?
le verre ?
l’huile?
Où est-il identifié ?
1.00
1.50
1.56
sur l’objectif
Quand utilise-t’on l’huile à immersion ?
avec des objectifs à fort grossissement
Plus la limite de construction de l’objectif est _______, plus le cout de l’objectif est _________.
Grand
élevé
À quelle grandeur les meilleurs microscopes permettent-ils de voir ? Les microscopes à lumière blanche ?
- 1 u
0. 2 u
qu’est-ce que le contraste ? À quoi est-il proportionnel ?
c’est la capacité à distinguer une structure de son environnement
proportionnel à la différence de quantité de lumière absorbée = structure vs milieu
Donnez un exemple de microscope basé sur le contraste.
Microscope à fond clair de Köhler = structures sombres sur fond clair
Quel est le désavantage d’utiliser une préparation à l’état frais avec un microscope à fond clair ? Les avantages?
diminue le contraste
on voit la morphologie, la motilité (déplacement) et l’axe de division cellulaire (protozoaire)
Comment peut-on voir les corps d’inclusions cytoplasmiques avec un microscope à fond clair ?
En utilisant des microorganisme de grande taille
Pourquoi ne pas simplement utiliser des colorants avec les organismes vivants avec les microscopes à fond clair ? que permettent ils de voir ?
car il y a peu de colorant qui ne tuent pas les organismes, ils exigent une fixation et une coloration
Il permettent de voir la morphologie et l’arrangement
Quel sont les deux types de colorations ? Donnez des exemple.
1- simple = 1 seul colorant = bleu de méthylène = positif (coloration uniforme)
2- différentielle = Gram +/- = + violet et - rouge (rétention du violet de cristal)
3- différentielle = alcoolo-acido-résistance de Ziehl Nelson = mycobactéries (rétention du Carbol-Fuchsine)
Quelles structures les colorations différentielles permettent-elles de voir ?
les structures cellulaires comme 1- endospores 2- capsule 3- flagelles 4- corps d'inclusion
Donnez 4 types de microscopes photoniques.
1- microscopes à fond noir
2- microscope à contraste de phase
3- microscope à contraste d’interférence différentielle
4- microscope à fluorescence
Quelles sont les similarités et les différences entre un microscope à fond clair et un microscope à fond noir ?
structures claire sur fond noir
pareil : extérieur = fond clair
différent : condensateur = Cône de Abbe + miroirs, éclairage oblique, visualisation des rayons déviés
Quel est l’avantage d’utiliser un microscope à fond noir avec des organismes vivants ?
visualisation de structures sans coloration ni fixation
Quels sont les similarités et les différences avec un microscopes à contraste de phase ?
pareil : extérieur = fond clair
différences internes : condensateur et objectifs = anneaux de phase
est-il possible de retrouver plusieurs types de microscopie photonique dans un même microscope ?
oui, on change les pièces du condensateur (à fond clair, à fond noir, à contraste de phase)
MAIS à contraste de phase différentielle = trop cher pour ça
comment fait-on la différence entre un microscope à épifluorescence et un microscope à fluorescence ?
cela dépend de la position de la source lumineuse
sur le dessus = épi
comment fonctionne les fluorochromes ?
ils sont excité par une lampe UV avec un filtre sélectif qui bloque les autres, ils absorbent les UVs et émettent des photons dans le visible
quel est le rôle du miroir dichromatique ? du filtre d’excitation ?
il réfléchit les ondes courtes (UV) et transmet les ondes longues (visible)
contraire = élimine grandes longueurs d’onde
comment différencier une cellule morte d’une cellule vivante grâce à l’épifluorescence ?
vivante = exclusion par membrane cytoplasmique morte = membrane plasmique perméable
Comment se déroule l’immunofluorescence ?
il faut coupler un fluorochrome à un anticorps et cela permet de détecter une protéine spécifique
À quand remonte le premier microscope électronique ? Qui a gagner un prix Nobel pour ses recherches sur le sujet ?
1931
Ruska en 1986
comparez les grossissement et les limites de résolution des microscopes photoniques et électroniques. Comment peut-on expliquer cette différence ?
photonique = 1000 x et L.R = 0.1 u électronique = 400 000 x et L.R = 0,05 nm
la Ld’o des électrons est de 5x10 à la -12 m alors que cette des photos est de seulement 5x10 à la -7 m
Quel sont les éléments de base d’un microscope électronique ?
condensateur, objectif, oculaire = électro-aimants et lentilles magnétiques
image = écran fluorescent, plaque photographique et détecteur numérique
Quelles sont les trois limites principales des microscopes électroniques ?
1- électrons = voyagent dans le vide donc échantillons = matériel non-vivant
2- électrons = non pénétrants donc coupes ultra-fines de 20 à 100 nm (imprégnation et altérations fréquentes)
3- matériel vivant = non électron-dense donc contraste diminue beaucoup
Quel est la solution pour augmenter le contraste des échantillons lorsque l’on utilise un microscope électronique ?
il faut faire une coloration avec des matériaux imperméables aux électrons (absorbe les électrons = couleur noire)
1- métaux (fer, or, uranium, lanthane)
2- acide phosphotungstique
Qu’est-ce que la technique d’ombrage (shadow casting)? Comment fait-on pour savoir l’élévation des échantillons ?
on vaporise des métaux avec un angle précis = recouvre l’échantillon et projette une ombre
On utilise des billes témoins avec une taille prédéfinie et on compare les ombres
Qu’est-ce que la technique de coloration négative ?
on utilise de l’acide phosphotunstique qui s’accumule dans les creux
creux = sombres
protubérances = claires
permet de voir le relief et la structure des virus
qu’est-ce que le cryodécapage (freeze etching/fracture) ?
on congèle à -180 et on fait une coupe transversale, les zones de faiblesses vont fracturer et ensuite on fait la technique d’ombrage
permet de voir l’intérieur des cellules et la structure
comment fait-on pour détecter une protéine spécifique avec un microscope électrique ?
on utilise l’immuno-localisation cellulaire
on utilise des anticorps spécifiques couplés à des billes d’Au ou de Fe (ce qui permet de les détecter)
Qu’est-ce que la cryoélectromicroscopie et la cryotomographie électronique ?
1- congélation rapide à -135 C avec éthane ou azote liquide
2- = vitrification de l’eau (conservation intégrité structure sous vide)
3- microscopie à basse T (tomographie = strates = sans production de coupe)
4- reconstruction informatique 3D
