microscopes

Question 1

Pourquoi les grossissement des microscopes photoniques (optique) et électronique ?

Answer 1

longueur d’ondes photons et longueur d’onde électrons = différentes

Question 2

quels sont les 3 principaux composants d’un microscope ?

Answer 2

1- condensateur
2- objectif
3- oculaire

Question 3

comment fait-on pour calculer l’agrandissement final d’un microscope ?

Answer 3

objectif x oculaire

Question 4

qu’est-ce que la limite de résolution ? Comment est-elle calculée ?

Answer 4

distance minimale entre deux points qui peuvent être perçus comme étant distincts

0,5 x longueur d’onde / indice de réfraction x 0,5 angle du cône de lumière entrant dans l’objectif

Question 5

Vrai ou faux. Avoir une grande limite de résolution est préférable.

Answer 5

Faux

Question 6

qu’est-ce que l’ouverture numérique (NA)? Où est-il indiqué ?

Answer 6

c’est le ‘‘n sin 0’’

sur l’objectif

Question 7

quels sont les longueur d’onde du visible ? de l’ultraviolet ?

Answer 7

1- 400 à 700nm

2- 180 à 400nm

Question 8

Quel est la solution afin d’obtenir un longueur d’onde la plus petite possible? Pourquoi est-ce compliqué

Answer 8

d’aller dans les ultraviolets
ils sont invisibles à l’oeil nu et le verre est opaque au UV
il faudrait donc utiliser du quartz, mais trop $$$
alors on doit faire une transformation optique

Question 9

Quel est l’indice de réfraction de l’air ?
le verre ?
l’huile?
Où est-il identifié ?

Answer 9

1.00
1.50
1.56
sur l’objectif

Question 10

Quand utilise-t’on l’huile à immersion ?

Answer 10

avec des objectifs à fort grossissement

Question 11

Plus la limite de construction de l’objectif est _______, plus le cout de l’objectif est _________.

Answer 11

Grand

élevé

Question 12

À quelle grandeur les meilleurs microscopes permettent-ils de voir ? Les microscopes à lumière blanche ?

Answer 12

0. 1 u

0. 2 u

Question 13

qu’est-ce que le contraste ? À quoi est-il proportionnel ?

Answer 13

c’est la capacité à distinguer une structure de son environnement
proportionnel à la différence de quantité de lumière absorbée = structure vs milieu

Question 14

Donnez un exemple de microscope basé sur le contraste.

Answer 14

Microscope à fond clair de Köhler = structures sombres sur fond clair

Question 15

Quel est le désavantage d’utiliser une préparation à l’état frais avec un microscope à fond clair ? Les avantages?

Answer 15

diminue le contraste

on voit la morphologie, la motilité (déplacement) et l’axe de division cellulaire (protozoaire)

Question 16

Comment peut-on voir les corps d’inclusions cytoplasmiques avec un microscope à fond clair ?

Answer 16

En utilisant des microorganisme de grande taille

Question 17

Pourquoi ne pas simplement utiliser des colorants avec les organismes vivants avec les microscopes à fond clair ? que permettent ils de voir ?

Answer 17

car il y a peu de colorant qui ne tuent pas les organismes, ils exigent une fixation et une coloration

Il permettent de voir la morphologie et l’arrangement

Question 18

Quel sont les deux types de colorations ? Donnez des exemple.

Answer 18

1- simple = 1 seul colorant = bleu de méthylène = positif (coloration uniforme)

2- différentielle = Gram +/- = + violet et - rouge (rétention du violet de cristal)

3- différentielle = alcoolo-acido-résistance de Ziehl Nelson = mycobactéries (rétention du Carbol-Fuchsine)

Question 19

Quelles structures les colorations différentielles permettent-elles de voir ?

Answer 19

les structures cellulaires comme
1- endospores
2- capsule
3- flagelles
4- corps d'inclusion

Question 20

Donnez 4 types de microscopes photoniques.

Answer 20

1- microscopes à fond noir
2- microscope à contraste de phase
3- microscope à contraste d’interférence différentielle
4- microscope à fluorescence

Question 21

Quelles sont les similarités et les différences entre un microscope à fond clair et un microscope à fond noir ?

Answer 21

structures claire sur fond noir

pareil : extérieur = fond clair
différent : condensateur = Cône de Abbe + miroirs, éclairage oblique, visualisation des rayons déviés

Question 22

Quel est l’avantage d’utiliser un microscope à fond noir avec des organismes vivants ?

Answer 22

visualisation de structures sans coloration ni fixation

Question 23

Quels sont les similarités et les différences avec un microscopes à contraste de phase ?

Answer 23

pareil : extérieur = fond clair

différences internes : condensateur et objectifs = anneaux de phase

Question 24

est-il possible de retrouver plusieurs types de microscopie photonique dans un même microscope ?

Answer 24

oui, on change les pièces du condensateur (à fond clair, à fond noir, à contraste de phase)

MAIS à contraste de phase différentielle = trop cher pour ça

Question 25

comment fait-on la différence entre un microscope à épifluorescence et un microscope à fluorescence ?

Answer 25

cela dépend de la position de la source lumineuse

sur le dessus = épi

Question 26

comment fonctionne les fluorochromes ?

Answer 26

ils sont excité par une lampe UV avec un filtre sélectif qui bloque les autres, ils absorbent les UVs et émettent des photons dans le visible

Question 27

quel est le rôle du miroir dichromatique ? du filtre d’excitation ?

Answer 27

il réfléchit les ondes courtes (UV) et transmet les ondes longues (visible)
contraire = élimine grandes longueurs d’onde

Question 28

comment différencier une cellule morte d’une cellule vivante grâce à l’épifluorescence ?

Answer 28

vivante = exclusion par membrane cytoplasmique
morte = membrane plasmique perméable

Question 29

Comment se déroule l’immunofluorescence ?

Answer 29

il faut coupler un fluorochrome à un anticorps et cela permet de détecter une protéine spécifique

Question 30

À quand remonte le premier microscope électronique ? Qui a gagner un prix Nobel pour ses recherches sur le sujet ?

Answer 30

1931

Ruska en 1986

Question 31

comparez les grossissement et les limites de résolution des microscopes photoniques et électroniques. Comment peut-on expliquer cette différence ?

Answer 31

photonique = 1000 x et L.R = 0.1 u 
électronique = 400 000 x et L.R = 0,05 nm 

la Ld’o des électrons est de 5x10 à la -12 m alors que cette des photos est de seulement 5x10 à la -7 m

Question 32

Quel sont les éléments de base d’un microscope électronique ?

Answer 32

condensateur, objectif, oculaire = électro-aimants et lentilles magnétiques

image = écran fluorescent, plaque photographique et détecteur numérique

Question 33

Quelles sont les trois limites principales des microscopes électroniques ?

Answer 33

1- électrons = voyagent dans le vide donc échantillons = matériel non-vivant

2- électrons = non pénétrants donc coupes ultra-fines de 20 à 100 nm (imprégnation et altérations fréquentes)

3- matériel vivant = non électron-dense donc contraste diminue beaucoup

Question 34

Quel est la solution pour augmenter le contraste des échantillons lorsque l’on utilise un microscope électronique ?

Answer 34

il faut faire une coloration avec des matériaux imperméables aux électrons (absorbe les électrons = couleur noire)

1- métaux (fer, or, uranium, lanthane)
2- acide phosphotungstique

Question 35

Qu’est-ce que la technique d’ombrage (shadow casting)? Comment fait-on pour savoir l’élévation des échantillons ?

Answer 35

on vaporise des métaux avec un angle précis = recouvre l’échantillon et projette une ombre

On utilise des billes témoins avec une taille prédéfinie et on compare les ombres

Question 36

Qu’est-ce que la technique de coloration négative ?

Answer 36

on utilise de l’acide phosphotunstique qui s’accumule dans les creux
creux = sombres
protubérances = claires
permet de voir le relief et la structure des virus

Question 37

qu’est-ce que le cryodécapage (freeze etching/fracture) ?

Answer 37

on congèle à -180 et on fait une coupe transversale, les zones de faiblesses vont fracturer et ensuite on fait la technique d’ombrage

permet de voir l’intérieur des cellules et la structure

Question 38

comment fait-on pour détecter une protéine spécifique avec un microscope électrique ?

Answer 38

on utilise l’immuno-localisation cellulaire

on utilise des anticorps spécifiques couplés à des billes d’Au ou de Fe (ce qui permet de les détecter)

Question 39

Qu’est-ce que la cryoélectromicroscopie et la cryotomographie électronique ?

Answer 39

1- congélation rapide à -135 C avec éthane ou azote liquide
2- = vitrification de l’eau (conservation intégrité structure sous vide)
3- microscopie à basse T (tomographie = strates = sans production de coupe)
4- reconstruction informatique 3D