microscopes Flashcards

1
Q

Pourquoi les grossissement des microscopes photoniques (optique) et électronique ?

A

longueur d’ondes photons et longueur d’onde électrons = différentes

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2
Q

quels sont les 3 principaux composants d’un microscope ?

A

1- condensateur
2- objectif
3- oculaire

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3
Q

comment fait-on pour calculer l’agrandissement final d’un microscope ?

A

objectif x oculaire

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4
Q

qu’est-ce que la limite de résolution ? Comment est-elle calculée ?

A

distance minimale entre deux points qui peuvent être perçus comme étant distincts

0,5 x longueur d’onde / indice de réfraction x 0,5 angle du cône de lumière entrant dans l’objectif

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5
Q

Vrai ou faux. Avoir une grande limite de résolution est préférable.

A

Faux

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6
Q

qu’est-ce que l’ouverture numérique (NA)? Où est-il indiqué ?

A

c’est le ‘‘n sin 0’’

sur l’objectif

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7
Q

quels sont les longueur d’onde du visible ? de l’ultraviolet ?

A

1- 400 à 700nm

2- 180 à 400nm

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8
Q

Quel est la solution afin d’obtenir un longueur d’onde la plus petite possible? Pourquoi est-ce compliqué

A

d’aller dans les ultraviolets
ils sont invisibles à l’oeil nu et le verre est opaque au UV
il faudrait donc utiliser du quartz, mais trop $$$
alors on doit faire une transformation optique

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9
Q

Quel est l’indice de réfraction de l’air ?
le verre ?
l’huile?
Où est-il identifié ?

A

1.00
1.50
1.56
sur l’objectif

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10
Q

Quand utilise-t’on l’huile à immersion ?

A

avec des objectifs à fort grossissement

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11
Q

Plus la limite de construction de l’objectif est _______, plus le cout de l’objectif est _________.

A

Grand

élevé

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12
Q

À quelle grandeur les meilleurs microscopes permettent-ils de voir ? Les microscopes à lumière blanche ?

A
  1. 1 u

0. 2 u

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13
Q

qu’est-ce que le contraste ? À quoi est-il proportionnel ?

A

c’est la capacité à distinguer une structure de son environnement
proportionnel à la différence de quantité de lumière absorbée = structure vs milieu

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14
Q

Donnez un exemple de microscope basé sur le contraste.

A

Microscope à fond clair de Köhler = structures sombres sur fond clair

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15
Q

Quel est le désavantage d’utiliser une préparation à l’état frais avec un microscope à fond clair ? Les avantages?

A

diminue le contraste

on voit la morphologie, la motilité (déplacement) et l’axe de division cellulaire (protozoaire)

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16
Q

Comment peut-on voir les corps d’inclusions cytoplasmiques avec un microscope à fond clair ?

A

En utilisant des microorganisme de grande taille

17
Q

Pourquoi ne pas simplement utiliser des colorants avec les organismes vivants avec les microscopes à fond clair ? que permettent ils de voir ?

A

car il y a peu de colorant qui ne tuent pas les organismes, ils exigent une fixation et une coloration

Il permettent de voir la morphologie et l’arrangement

18
Q

Quel sont les deux types de colorations ? Donnez des exemple.

A

1- simple = 1 seul colorant = bleu de méthylène = positif (coloration uniforme)

2- différentielle = Gram +/- = + violet et - rouge (rétention du violet de cristal)

3- différentielle = alcoolo-acido-résistance de Ziehl Nelson = mycobactéries (rétention du Carbol-Fuchsine)

19
Q

Quelles structures les colorations différentielles permettent-elles de voir ?

A
les structures cellulaires comme
1- endospores
2- capsule
3- flagelles
4- corps d'inclusion
20
Q

Donnez 4 types de microscopes photoniques.

A

1- microscopes à fond noir
2- microscope à contraste de phase
3- microscope à contraste d’interférence différentielle
4- microscope à fluorescence

21
Q

Quelles sont les similarités et les différences entre un microscope à fond clair et un microscope à fond noir ?

A

structures claire sur fond noir

pareil : extérieur = fond clair
différent : condensateur = Cône de Abbe + miroirs, éclairage oblique, visualisation des rayons déviés

22
Q

Quel est l’avantage d’utiliser un microscope à fond noir avec des organismes vivants ?

A

visualisation de structures sans coloration ni fixation

23
Q

Quels sont les similarités et les différences avec un microscopes à contraste de phase ?

A

pareil : extérieur = fond clair

différences internes : condensateur et objectifs = anneaux de phase

24
Q

est-il possible de retrouver plusieurs types de microscopie photonique dans un même microscope ?

A

oui, on change les pièces du condensateur (à fond clair, à fond noir, à contraste de phase)

MAIS à contraste de phase différentielle = trop cher pour ça

25
comment fait-on la différence entre un microscope à épifluorescence et un microscope à fluorescence ?
cela dépend de la position de la source lumineuse | sur le dessus = épi
26
comment fonctionne les fluorochromes ?
ils sont excité par une lampe UV avec un filtre sélectif qui bloque les autres, ils absorbent les UVs et émettent des photons dans le visible
27
quel est le rôle du miroir dichromatique ? du filtre d'excitation ?
il réfléchit les ondes courtes (UV) et transmet les ondes longues (visible) contraire = élimine grandes longueurs d'onde
28
comment différencier une cellule morte d'une cellule vivante grâce à l'épifluorescence ?
``` vivante = exclusion par membrane cytoplasmique morte = membrane plasmique perméable ```
29
Comment se déroule l'immunofluorescence ?
il faut coupler un fluorochrome à un anticorps et cela permet de détecter une protéine spécifique
30
À quand remonte le premier microscope électronique ? Qui a gagner un prix Nobel pour ses recherches sur le sujet ?
1931 | Ruska en 1986
31
comparez les grossissement et les limites de résolution des microscopes photoniques et électroniques. Comment peut-on expliquer cette différence ?
``` photonique = 1000 x et L.R = 0.1 u électronique = 400 000 x et L.R = 0,05 nm ``` la Ld'o des électrons est de 5x10 à la -12 m alors que cette des photos est de seulement 5x10 à la -7 m
32
Quel sont les éléments de base d'un microscope électronique ?
condensateur, objectif, oculaire = électro-aimants et lentilles magnétiques image = écran fluorescent, plaque photographique et détecteur numérique
33
Quelles sont les trois limites principales des microscopes électroniques ?
1- électrons = voyagent dans le vide donc échantillons = matériel non-vivant 2- électrons = non pénétrants donc coupes ultra-fines de 20 à 100 nm (imprégnation et altérations fréquentes) 3- matériel vivant = non électron-dense donc contraste diminue beaucoup
34
Quel est la solution pour augmenter le contraste des échantillons lorsque l'on utilise un microscope électronique ?
il faut faire une coloration avec des matériaux imperméables aux électrons (absorbe les électrons = couleur noire) 1- métaux (fer, or, uranium, lanthane) 2- acide phosphotungstique
35
Qu'est-ce que la technique d'ombrage (shadow casting)? Comment fait-on pour savoir l'élévation des échantillons ?
on vaporise des métaux avec un angle précis = recouvre l'échantillon et projette une ombre On utilise des billes témoins avec une taille prédéfinie et on compare les ombres
36
Qu'est-ce que la technique de coloration négative ?
on utilise de l'acide phosphotunstique qui s'accumule dans les creux creux = sombres protubérances = claires permet de voir le relief et la structure des virus
37
qu'est-ce que le cryodécapage (freeze etching/fracture) ?
on congèle à -180 et on fait une coupe transversale, les zones de faiblesses vont fracturer et ensuite on fait la technique d'ombrage permet de voir l'intérieur des cellules et la structure
38
comment fait-on pour détecter une protéine spécifique avec un microscope électrique ?
on utilise l'immuno-localisation cellulaire | on utilise des anticorps spécifiques couplés à des billes d'Au ou de Fe (ce qui permet de les détecter)
39
Qu'est-ce que la cryoélectromicroscopie et la cryotomographie électronique ?
1- congélation rapide à -135 C avec éthane ou azote liquide 2- = vitrification de l'eau (conservation intégrité structure sous vide) 3- microscopie à basse T (tomographie = strates = sans production de coupe) 4- reconstruction informatique 3D