Microscopes Flashcards
Vrai ou Faux: Les principes physiques des microscopes photoniques et électriques sont les mêmes.
Vrai
Quelle est la raison de la différence entre le grossissement du microscope photonique et celui du microscope électrique?
La longueur d’onde du microscope électronique est plus faible, pcq les électrons ont une longueur d’onde plus faible que celle des photons
Quel est le rôle du condensateur?
Concentrer la lumière sur l’échantillon
Quels sont les limites du microscope photonique?
La limite de résolution.
Le contraste.
Par quelle formule la limite de résolution est-elle calculée?
L.R. = longueur d’onde / 2.n.Sin(teta)
n = indice de réfraction du milieu (entre l’échantillon et l’objectif).
teta = moitié de l’angle du cone de lumière entrant dans l’objectif.
Que veut dire ouverture numérique (NA)?
NA = n.Sin(teta)
Elle est normalement indiquée sur l’objectif.
Qu’arrive t il si l’on diminue la longueur d’onde dans une observation au microscope photonique?
la limite de résolution diminue, la qualité de l’observation augmente.
les rayons UV, quelle lentille peuvent ils traverser?
La lentille formée de Quartz
les rayons UV, quelle lentille ne peuvent ils pas traverser?
Le verre
Quelle sont les limites d’utilisation de rayons UV dans un microscope?
- Le verre est opaque aux UV, il faut utiliser des lentilles de Quartz, ce qui est trop couteux.
- Les UV sont à l’extérieur du visible. Il faut faire une transformation optique pour pouvoir observer.
- Question de sécurité.
L’huile à immersion, augmente ou diminue la limite de résolution?
Diminue
Qu’arrive il à la limite de résolution (augmente ou diminue) si l’objectif est plus long?
objectif plus long = distance entre objectif et échantillon diminue = angle teta plus grand = sinus plus grand = limite de résolution diminue.
Qui a amélioré le microscope à fond clair?
Kohler
Quels sont les désavantages de la microscopie à fond clair?
1- Peu de contraste si l’on ne fait pas de colorations.
2- Difficile de voir les petits microorganismes.
Est-ce que le microscope à fond clair permet de voir l’intérieur d’une cellule?
Oui
Que peut on voir dans la préparation à l’état frais? (fond clair)
1-On voit la motilité
2- on voit la morphologie
3- on peut voir les axes de division cellulaire (protozoaires)
4- on voit les corps d’inclusion
Quels sont les désavantages de la préparation à l’état frais? (fond clair)
1- le contraste est très faible
2- les petits microorganismes ne peuvent pas être observés
Quels sont les 2 groupes de coloration qu’on peut faire pour la microscopie à fond clair?
- coloration simple
- coloration différentielle
Quels sont les 2 techniques de coloration différentielle qu’on peut faire pour la microscopie à fond clair?
Gram
AAR (alcoolo-acido-resistent)
Quelle est la charge de la coloration simple
positive (la plupart des microorganismes ont des surfaces chargées négativement).
À quoi sert la coloration de Gram
Permet de distinguer différents groupes de bactéries, structure membranaire, distinguer les structures à l’intérieur, etc.
À quoi sert la coloration AAR
à détecter les mycobactéries, disgnostiquer des maladies (comme tuberculose).
Qui a inventé la coloration AAR
Ziehl et Neelsen
Quel agent est retenu par les mycobactéries dans la coloration AAR?
le Carbol-Fuchsine
Quels sont les autres microscopes optiques?
- à fond noir
- à contraste de phase
- à contraste d’interférence différentielle
- à fluorescence
Quelle est la différence dans l’image des microscopes à fond clair vs à fond noir
- fond clair: structure sombre, fond clair
- fond noir: structure claire, fond noir
Dans quels compartiments le microscope à fond noir diffère?
Le condensateur contient un Cône de Abbe et des miroirs
Comment agit la lumière en microscopie à fond noir?
la lumière est dirigée sur l’échantillon grace au cone de abbe et des miroirs, donc la lumière arrive de manière oblique sur l’échantillon.
Ex: Dans une image, on ne voit que du noir, rien n’apparait. Quelle est la raison?
il n’y a pas d’échantillon. en microscopie à fond noir, on voit seulement la lumière déviée par l’échantilon.
Donc pas de lumière déviée = pas d’échantillon
Vrai ou Faux
les organismes sont morts dans la microscopie à fond noir.
Faux
on ne fait ni fixation ni coloration
Vrai ou faux
le microscope à contraste de phase a la même du extérieur d’un microscope à fond clair
Vrai
Dans quels compartiments le microscope à contraste de phase diffère?
Condensateur et Objectif
le condensateur contient un anneau de phase
l’objectif contient une lame de phase
Comment agit la lumière en microscopie à contraste de phase?
il y a une mise en phase de la lumière. l’échantillon réfracter la lumière, et c’est la différence de phase qui montre une image.
Quels est le role de la lame de phase?
augmente ou diminue la différence de phase entre les structures, donc augmente le constraste
qui a développé le microscope à contraste de phase
Zernike
Quelle type d’image on voit dans contraste de phase?
image sombre sur fond clair
Comment peut on voir des images colorés en contraste de phase si on ne colore pas la structure?
on utilise des filtres colorants
Vrai ou faux
les cellules dans contraste de phase sont vivantes
Vrai
Qu’est ce qui distingue une image par contraste de phase des autres microscopes?
la structure est entourée d’un couche lumineuse, appelée halo de phase.
qui a développé le microscope à contraste d’inteférence différentielle?
Nomarski
que subit la lumière dans la microscopie à contraste d’inteférence différentielle?
La lumière est polarisée à angle variable
Qu’arrive t il à la lumière polarisée lorsqu’elle touche l’échantillon dans l’interférence différentielle?
Les structures causent une modification de polarisation, ce qui génère l’image
Qu’est ce qui distingue une image par interférence différentielle des autres microscopes?
- Image vive (couleurs vives)
- Impression de 3D
- Ombre dans les creux/derrière la cellule, comme si l’échantillon est éclairé d’un seul coté.
Comment modifier la lumière sans agir sur la phase de la lumière?
on polarise la lumière (donc on fait une microscopie interférence différentielle)
Quelle est la différence dans les compartiment d’un microscope interférence différentielle vs contraste de phase?
Condensateur: l’interférence requiert un système de lentilles qui polarisent la lumière, controlé par informatique.
interférence différentielle vs fond clair?
- cellules vivantes (i.d.) vs cellules mortes (f.c.)
- permet de montrer des structures fines (i.d.) vs non (f.c.)
- montre les structures internes bcp plus clairement (i.d.)
Quelle est la limite de l’interférence différentielle?
Les préparation transparentes.
La lumière polarisée doit être capable de passer.
Quels microscopes photoniques se ressemblent de l’extérieur?
fond clair, fond noir et contraste de phase.
Peut on utiliser l’UV dans les microscopes photoniques?
Oui, microscope à épifluorescence et à fluorescence
quelle est la différence entre le microscope à épifluorescence et le microscope à fluorescence?
Épifluorescence: la source de rayons UV n’est pas en bas, elle ne peut pas affecter l’oeil, donc plus de sécurité.
Quelles particules sont utilisés dans la microscopie fluorescence
les fluorochromes
que font les fluorochromes?
ils absorbent l’énergie lumineuse en UV et émettent dans le visible.
quelle portion du spectre est considérée UV?
280 nm à 400 nm
Quel compartiment est utilisé pour protéger l’oeil de tout rayon UV?
des filtres séléctifs bloquant les rayons UV.
comment s’appelle la lentille utilisée dans le microscope fluorescence?
miroir dichroique: réfléchit les UV, mais laisse passé les lumières du visible
Quelle lame laisse passer les UV
Quartz
Quels sont les applications du microscope à fluorescence?
- Fluorochromes vitaux
- Immunofluorescence
- FISH
À quoi servent les fluorochromes vitaux.
Permettent de distinguer et quantifier les cellules vivantes vs mortes
En utilisant les fluorochromes vitaux, quelle cellule (vivante ou morte) émet une fluorescence, et laquelle qui n’émet pas? et pourquoi?
- Cellule vivante: pas de fluorescence, car membrane séléctive, ne laisse pas passer les fluorochromes.
- Cellule morte: fluorescence, car membrane imperméable, laisse passer les fluorochromes.
- Quelle technique fait intervenir des morceaux d’ADN?
- Quelle technique fait intervenir des anticorps?
- FISH
- Immunofluorescence?
Quel est le principe de l’immunofluorescence?
anticorps couplés à des fluorochromes, qui détectent une protéine membranaire ou cytoplasmique (antigène)
Que peut détecter l’immunofluorescence?
des protéines ou des organismes (ayant une protéine membranaire spécifique à elle)
Vrai ou faux
Lorsqu’on veut détecter un virus par immunofluorescence et on le cible avec un anticorps, les structures fluorescentes sont des virus.
Faux.
Le virus est trop petit pour être vu en microscopie photonique.
Les structures fluorescentes sont des cellules infectés par le virus, et non pas le virus-même.
Vrai ou faux
on peut parfois voir une fluorescence qui n’est que des anticorps dans le milieu et qui n’ont pas reconnu un antigène précis.
Faux
les anticorps qui ne reconnaissent pas des antigènes vont être éliminés.
Que veut dire hybridation
appariement d’une molécule d’ADN avec une autre molécule d’ADN ayant une séquence complémentaire.
À quoi sert la technique FISH
détecter et quantifier une espèce spécifique.
quelles sont les limites de FISH
- peut prendre des années, car la séquence d’ADN utilisée doit être spécifique à l’espèce cible, or bcp d’autres espèces peuvent avoir la même séquence.