microscope Flashcards
Microscope à fond clair
composé (3)
Condensateur
Objectif
Oculaire
Agrandissement =
objectif x oculaire
capacité d’une lentille de séparer ou distinguer des petits objets proches l’un
de l’autre.
Résolution
distance minimale entre deux points qui peuvent être perçus
comme étant distincts
Limite de résolution
Qui et quand ?
Théorie de l’optique d’un microscope
Ernest Abbé 1870
Équation L.R
L.R = λ/2 η sin θ
Dans L.R sin θ =?
Ouverture numérique
Trois facteurs où l’on peut intervenir pour améliorer LR
Longueur d’onde
Indice de réfraction
Têta
Longueur d’onde du Violet
0,400 um
Longueur d’onde rouge
0,700 um
Meilleurs limites de résolution:
Meilleur microscope?
Meilleur pour la lumière blanche?
0,1u
0,2u
Définition du contraste
Capacité de distinguer une structure de son environnement
Le contraste est directement proportionnel ____________.
…à la quantité de lumière absorbée par l’échantillon
La préparation de type «état frais» est bien pour étudier ? (4)
- morphologie
- motilité
- axe de division cellulaire (protozoaires)
- Corps d’inclusion cytoplasmique
La préparation de type coloration se fait en trois grandes étapes, quelle sont-elle?
Fixation de l’organisme
Flamme
Colorant
La préparation de type coloration est bine pour étudier la ___________ et l’__________.
Morphologie
arrangement
Les colorants peuvent être (2)
Des acides
Des basiques neutres
Nommez les types de coloration différentielle (2)
Coloration de Gram
Alcolo-acido-résistance
Nommez les 4 structures qui peuvent être coloré pour être mieux observer?
Endospore
Flagelle
Capsule
Corps d’inclusion
Pour la colaration de Gram, les structure de couleur rouge seront considéré comme Gram (+ ou -)?
Gram négatif (-)
Pour la colaration de Gram, les structure de couleur violet seront considéré comme Gram (+ ou -)?
Gram positif (+)
Qui a mis au point la coloration de Gram ?
Christian Gram
Pourquoi utiliser un MS à Fond noir, contraste de phase ou a contraste d’interférence différentielle?
Si l’on doit observer des cellules vivantes de façon à suivre un processus dynamique tel qu’un mouvement ou une phagocytose
(P.29 Microbiologie)
Les différence entre le MS à Fond noir et à fond blanc sont au niveau du _________.
Condensateur
Le condensateur du MS à fond noir est différent de celui du MS à Fond blanc en trois façons, lesquelles?
Le cône d’Abbé + miroirs
L’éclairage oblique
Visualisation de rayon dévié
Décirvez l’image produite par un MS à contraste de phase.
Image sombre sur fond clair
Quel est le principe de MS à Contraste de phase ?
Mise en phase de la lumière incidente
V/F: le MS à Contraste de phase nous permets de visualiser des structures fines sans coloration ni fixation de cellules vivantes.
Vrai
Le MS à contraste de phase est surtout utiliser pour…
Pour étudier les structures fines des microorganismes vivants
Quelle est le principe du Microscope d’interférence différentielle?
Polarisation variable de la lumière incidente
→Réfraction de la lumière par les structures cellulaires vivantes
→changement de polarisation de la lumière
→changement d’intensité
Avec un MS DIC, y a -t-il un halo de diffraction ?
non
Comment est controlé le système de lentilles polarisantes ?
Par informatique
On peux considérer le MS DIC comme un MS ____ de gamme
haut
Quelle est la limite de la MS DIC?
Les préparation doivent être transparent.
V/F: il existe un appareil se disant moyen de gamme qui intègre à la fois un MS à fond noir, un MS à contraste de phase et MS DIC.
Faux,
3 types de microscope intégrés dans le même appareil
• Microscope à fond clair
• Microscope à fond noir
• Microscope à contraste de phase
Nommez les 5 type de MS photonique.
MS à fond clair MS à fond noir MS à contraste de phase MS à contraste d'interférence différentielle MS à fluorescence
EN MS à fluorescence, on nomme les colorant fluorescents des __________.
fluorochromes
V/F les colorant fluorescent permets de coloré tout en gardant la cellule vivante?
Vrai
Nommez et expliquer les application de la MS à fluorescence (2)
Fluorochromes vitaux:
observer le nombre de cellules mortes vs vivantes
Immunofluorescence
Diagnostique à l’aide d’anticorps spécifique couplé à des fluorochromes. Lorsque fixé à la bonne protéine,, lumière fluo, indique la présence d’un type de pathogène
Année d’apparition des MS électronique
1931
Quel est le grossissement des MS électronique
400 000x
Quel est le L.R des MS électronique
0,05nm
Principe général des MS électronique
déviation des champs électro par des aimants
Les lentille des MS photonique sont remplacé des _______-______ en électronique.
électro-aimants
Nommez les trois limites des MS élecroniques
Les électrons voyagent dans le vide
Les électrons son non-pénétrants
Le matériel vivant est non électro-dense
Techniques de préparation « coloration»
Expliquez la technique de l’ombrage
Vaporisation de métaux dans un angle bien précis, tout ce qui va être exposé aux métaux va être absorbé
Techniques de préparation « coloration»
Expliquez brièvement la coloration négative
À l’aide d’acide phosphotungstique,
Il y aura accumulation dans les creux, les creux seront pus sombre et les protubérances plus claires
relief –> utilisé pour observer la structure des virus
Techniques de préparation « coloration»
Expliquez brièvement le cyodécapage
congélation à des température très basses (-180 degré)
COupe transversale –> fracture aux zones de faiblesse
Suivi de la technique d’ombrage
Techniques de préparation « coloration»
Expliquez brièvement l’immuno-localisation cellulaire
Anticorps spécifique protééine/structure
Anticorps-billes Fe ou Au : couplage avec des billes de fer ou d’or
Localisation d’une protéine dans la cellule
Nommez les deux types de MS électronique
Microscope électronique à transmission
Microscope à Balayage
Microscope électronique à transmission ou Microscope à Balayage?
Les électrons traversent l’échantillon
TEM
Microscope électronique à transmission ou Microscope à Balayage?
Image par transparence
TEM
Microscope électronique à transmission ou Microscope à Balayage?
Les électrons sont réfléchis par la surface de l’échantillon
Balayage
Microscope électronique à transmission ou Microscope à Balayage?
On voit seulement l’extérieur de la cellule
Blayage
Microscope électronique à transmission ou Microscope à Balayage?
Donne un effet 3D
Balayage
Quel est l’avantage d’utiliser la cryo-électromicroscopie?
Avec la congélation rapide à très basse température, il y vitrification de l’eau ce qui conserve l’apparence naturelle donc extrêmement clair
conservation de l’intégrité des structures sous-vide
MS confocal à balayage laser (photonique)
Illumination par laser
utilisation de fluorochromes
reconstitution de l’image 3D et évolution vs temps
MS à balayage de sonde
MS à effet tunnel une sonde balaie la surface Grossissement 10^8 liens intermoléculaires observations en milieu aqueux Perception plus précise des structures vivantes et des matériaux
