Microscope Flashcards
Nommez une différence et une similitude entre les microscopes photoniques (optique) et les microscopes électroniques
Le microscope électronique utilise des électrons (courtes longueurs d’onde) pour bombarder les échantillons et ont un grand pouvoir d’agrandissement comparativement au photonique.
Le microscope photonique permet d’observer des microorganismes de grande taille (longueur d’onde visible)
Principe physique des deux microscopes sont similaires.
Quels sont les 6 sortes de microscopes photoniques?
à fond clair à fond noir à contraste de phase à contraste d'interférence différentielle à fluorescence confocal à balayage laser
Qu’est ce que la limite de résolution (LR)?
distance minimale entre deux points qui peuvent être perçu comme étant ditincts
Quand l’indice de réfraction du milieu augmente qu’arrive-t-il à la limite de résolution?
Elle diminue
Qu’elle est la composition d’un microscope à fond clair?
Condensateur, objectif et oculaire
À quoi sert le condensateur?
À fournir un éclairage adéquat en focalisant la lumière
Quels sont les avantages d’observer un microorganisme à l’état frais?
diminution du contraste organisme encore vivant permet d'observer la morphologie permet d'observer la motilité permet d'observer l'axe de division cellulaire corps d'inclusion cytoplasmique
Nommer un avantage et un inconvénient de la coloration
permet de bien voir la morphologie et l’arrangement, mais souvent la fixation est exigée ce qui tue le microorganisme
De quelle type est la coloration de gram?
coloration différentielle
Nommer un avantage majeur du microscope à fond noir
Visualisation des structures sans coloration ni fixation ainsi les cellules sont vivantes.
Expliquer le principe de l’éclairage oblique du microscope à fond noir
Permet d’observer des structure claire sur fond noir. De l’extérieur, il est similaire au microscope à fond clair.
Où est situé le condensateur d’un microscope à fond noir et quel est son fonctionnement?
Il est situé entre la source lumineuse et l’échantillon. Les faisceaux arrivent de façon oblique, il y a donc visualisation des rayons déviés. (cône de Abbe + miroirs)
Quel est le principe du microscope à contraste de phase?
Mise en phase de la lumière incidente. Réfraction de la lumière par les structures cellulaires vivantes. Changement de phase et d’intensité de la lumière, c’est la lumière qui s’ajuste.
Je possède des anneaux de phase dans mon objectif, qui suis-je?
Microscope à contraste de phase
Expliquer le principe des anneaux de phase
Les rayons non déviés ne passent pas par l’anneau mais en son centre. Le fond est formé par de la lumière non dévié.
Mon principe est basé sur la polarisation variable de la lumière incidente, qui suis-je?
Microscope à contraste d’interférence différentielle
Trouver l’erreur concernant le microscope à contraste de phase différentielle:
1- les préparations sont transparentes
2- les cellules sont mortes
3- il y a absence de halo de diffraction
2, les cellules sont vivantes
Qu’elles sont les différences majeures concernant les condensateurs des microscopes à contraste d’int. diff. ?
Le système de lentilles polarisantes est contrôlé par informatique
V ou F: La coloration est vive et il y a effet de relief 3D pour le microscope à contraste d’int. diff?
Vrai
Nommer une similitude entre le microscope à fond noir et le microscope à contraste d’interférence différentielle
Pas besoin de coloration ni fixation
Quel microscope utilise une lumière UV comme source excitatrice qui permet des observations dans le visible?
Microscope à fluorescence
Nommer deux utilités des fluorochromes vitaux
- Pour la coloration des organismes
- Pour déterminer la proportion de cellules vivantes versus mortes, par analyse informatique
Expliquer le principe de détection par fluorescence (anticorps couplés à un fluorochrome)
Quand l’anticorps reconnaît la protéine, il s’attache et émet de la fluorescence. Sinon, il est éliminé par lavage
Je suis utilisé comme diagnostique pour la détection des pathogènes par sensibilité des anticorps, qui suis-je?
Immunofluorescence
Lors de l’utilisation des fluorochromes vitaux, comment savoir si une cellule est morte ou vivante?
Si morte: membrane cytoplasmique perméable
Si vivante: exclusion par la membrane cytoplasmique
Nommer un autre microscope que lui à fluorescence qui utilise les fluorochromes
Microscope confocal à balayage laser
Chez le microscope confocal à balayage laser où se fait la détection de la fluorescence?
Exclusivement dans le plan foyer
Compléter: L’_____ du contraste _______ l’interférence par fluorescence.
L’augmentation du contraste diminue l’interférence par fluorescence.
Pour le microscope confocal à balayage laser, l’illumination ce fait par….?
laser (UV)
(Microscope confocal à balayage laser) Le laser balaye dans les plans (3) ?
Horizontaux, verticaux et temporel. Reconstitution 4D, grâce à la dimension temporelle
Quels sont les 2 sortes de microscopes électroniques?
à transmission
à balayage
Nommer une différence dans la composition de l’oculaire pour le microscope électronique
Il est constitué d’électroaimants (lentille magnétique)
Quels sont les limites des microscopes électroniques ? (4)
- les électrons voyagent dans le vide
- les échantillons sont du matériel non-vivant
- les électrons sont non pénétrants
- le matériel vivant est non électro-dense
Pourquoi le matériel est non vivant pour les microscope électronique?
Les échantillons ne sont pas compatible avec la pression si basse du vide
L’image des microscope à fond noir est…
un écran fluorescent, une plaque photographique ou un détecteur numérique
Qu’est-ce qui permet d’avoir une si haute résolution chez les microscopes électroniques?
la longueur d’onde des électrons
Quels sont les techniques de coloration/préparation employées pour augmenter le contraste chez les microscopes électroniques? (4)
- technique de l’ombrage (shadow casting)
- coloration négative
- cryodécapage (freezing etching)
- immunolocalisation cellulaire
Ma limite de résolution est très petite, mes images sont obtenus par transparence, mon détecteur est placé sous l’échantillon et les structures observées doivent être très fines, qui suis-je?
Microscope électronique à transmission
Quel est le principe du microscope électronique à balayage?
Les électrons sont réfléchis par la surface de l’échantillon. Le balayage de la surface de l’échantillon s’effectue à l’aide d’un faisceau d’électrons.
V ou F: La limite de résolution est très élevée et il y a effet 3D de la surface pour le microscope électronique à balayage
Vrai
Je suis muni d’un détecteur latéral qui capte les électrons secondaire pour les transformés en courant électrique et ensuite en image, qui suis-je?
Microscope électronique à balayage
Je suis obtenu par congélation rapide (-135 degrés celsius) par éthane et N2 liquide, qui suis-je?
Cryo-électromicroscopie
La cryotomographie électronique permet une reconstitution 3D de l’échantillon à l’aide d’images par strates, V ou F?
Vrai
Nommer une différence entre le microscope à effet tunnel et le microscope à force atomique
Le microscope à force atomique peut servir à l’étude des surfaces qui ne conduisent pas bien l’électricité
Les observations se font en milieux aqueux, le grossissement est de 10 à la 8, il est possible d’observer les liens intermoléculaires, je suis le microscope …..
à effet tunnel
Quel est le principe du microscope à effet tunnel?
Une sonde balaie la surface et mesure le déplacement vertical/horizontal ainsi que le courant entre les nuages électroniques
Quel est le principe du microscope à force atomique?
Une sonde se déplace à la surface de l’échantillon tout en maintenant une distance constante entre la pointe de la sonde et la surface
