metodos estudos histologia Flashcards
etapas preparação da célula E SUBSTANCIAS USADAS
1- fixação (preserva o tecido, evita ação de enzimas)
2- inclusão = desidratação + clareamento + infiltração parafina (consistência)
3- cortar
4- coloração (basófilos e acidófilos)
tipos de fixação
FISICA (congelamento) E QUIMICA (formaldeído ou glutaraldeído)
fixação dupla: glutaraldeído tamponado + peróxido de ósmio. Serve para dar mais contraste aos lipídeos e proteínas
substancias utilizadas na inclusão
parafina (mic. luz)
**TB PODE USAR RESINA PLASTICA
resinas (eletonico e luz)
***MAS NO ELETRONICO É SÓ REINA EPÓXI
como se faz a incluisão e suas fases
desidratação - etanol (CRESCENTE)
clareamento - xilol
infiltração - parafina quente
DEPOIS QUE A PARAFINA ESFRIA, ELA SOLIDIFICA E SE TORNA RÍGIDA.
ENTÃO PODE SER CORTADA.
APÓS SER CORTADA, OS CORTES SÃO COLOCADOS PARA FLUTUAR EM AGUA QUENTE ANTES DE SEREM COLOCADOS NA LÂMINA, ONDE SERÃO CORADOS
quando se usa fixação por congelamento?
QUAIS COMPONENTES ELA PRESERVA?
COMO É CHAMADO SEU MICRÓTOMO?
estudo de enz, prot, pois não as inativa como na fixação química
estudo de lipideos tb, pq o xilol os dissolve na fixaçao química
CRIOSTATO
cor da hematoxilina e da eosina e qual parte da cél é corada por elas
hemato = nucleo e outras partes acidas
eosina = citoplasma e colágeno
impregnação metálica
muito usada em tecidos nervosos
parte óptica do microscópio
QUAL A FUNÇÃO DE CADA UMA
lente ocular
lente objetiva
condensador
CONDENSADOR = CONCENTRA A LUZ DA LAMPADA E PROJETA UM FEIXE DE LUZ SOBRE O ESPÉCIME. ESSE FEIXA DE LUZ IRÁ ATRAVESSA-LO
OBJETIVA = RECEBE A LUZ QUE ATRAVESSOU O ESPÉCIME E PROJETA UMA IMAGEM AUMENTADA DO OBJETO EM DIREÇÃO À OCULAR
OCULAR = AMPLIA A IMAGEM NOVAMENTE E A PROJETA, SEJA NA RETINA, OU EM UMA TELA
fluorescencia qual o corante e pra que tipo de molécula
laranjado de acridina
DNA, RNA, e outras
imunohistoquimica
A imuno-histoquímica (IHQ) é um método de localização de antígenos (e.g. proteínas) em tecidos, explorando o princípio da ligação específica de anticorpos a antígenos no tecido biológico.[1] O nome da técnica provém das raízes “imuno”, em referência aos anticorpos utilizados no procedimento, e “histo”, significando tecido (compare com imunocitoquímica). A coloração imuno histoquímica é amplamente utilizada no diagnóstico de células anormais, tais como aquelas encontradas em neoplasias.
microscopia eletrônica de transmissão, varredura para que serve e dierenças
O microscópio eletrônico possui dois tipos de transmissão e de varredura, a diferença entre os dois é que o de transmissão serve para estudar as estruturas cortadas em fatias muito finas, em contrapartida, os microscópios de varredura são utilizados para analisar a superfície do corpo de seres vivos, de células
Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET): Neste microscópio o feixe de elétrons atravessa a célula e forma a imagem em uma tela fluorescente, dando detalhes de moléculas, organelas e estruturas intracelulares, tendo capacidade de produzir imagens de alta resolução e ampliação (até 300 mil vezes).
Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV): A formação de imagem deste microscópio é feita com os elétrons que varrem a superfície das estruturas biológicas. Deste modo, este microscópio nos fornece uma imagem da superfície, com noções de profundidade e tridimensionalidade e seu limite de resolução é cerca de 0.3nm.
eletromicrografia
Eletromicrografia ou micrografia eletrônica é uma imagem obtida pela fotografia da imagem da tela de um microscópio eletrônico de varredura, ou pela incidência de elétrons em um filme fotográfico no microscópio eletrônico de transmissão.
resina plasticas
resinas plásticas, como o glicol metacrilato
criofratura
[Bio.] Método de microscopia eletrônica no qual as amostras são congeladas em nitrogênio líquido e então fraturadas para separar a camada bilateral de lipídios, expondo a face interior das membranas celulares.
A criofratura é um método de microscopia eletrônica.
Tricrômico de Masson o que é e quais os constituintes
Corante ou coloração tricromo ou tricrômica de Masson é uma combinação de corantes usados em um protocolo de coloração de três cores em histologia.
hematoxilina
fsuscina acida
ponceau de xilidina
verde liz
aparece colageno em verde, mm em rosa, etc
fucsina resorcina de weigert o que é e serve para qual tecido
cora as fibras elasticas de marrom
impregnação argentica - golgi qual o material usado
sais de prata
coloração de wright quais os corantes usados e para que serve
eosina + azul de metileno
mto util em cel do sangue
É usado principalmente para a coloração de esfregaço de sangue periférico, amostras de urina e medula óssea, biópsia por aspiração por agulha, que são examinadas sob um microscópio ótico. Em citogenética, é usado para colorir cromossomos para facilitar o diagnóstico de síndromes e doenças
As amostras de urina coradas com a coloração Wright identificarão eosinófilos os quais podem indicar nefrite túbulo-intersticial ou infecção do trato urinário [4]
Glóbulos brancos corados com coloração de Wright
QUANDO DE USA O MÉTODO FÍSICO DE CONGELAMENTO
GERALMENTE EM HOSPITAIS, QUANDO QUERO ESTUDAR PROT, ENZIMAS, LIPIDEOS
QUANDO SE USA A FIXAÇÃO DUPLA
PARA MICROSCOPIA ELETRONICA
A DESIDRATAÇÃO COM ETANOL É EM SOLUÇÃO CRESCENTE OU DECRESCENTE?
CRESCENTE
DETALHE O PROCESSO DE COLORAÇÃO COM TODAS AS SUAS ETAPAS
1 - REMOVER PARAFINA COM XILOL E TOLUOL 2-REHIDRATAR COM ALCOOL DECRESCENTE 3-CORAR COM HEMATOX 4-DESIDRATAR 5-CORAR COM EOSINA 6-REIDRATAR
ACABAR DE PREENCHER
QUAIS AS ORGANELAS BASOFILAS?
AC. NUCLEICOS
GLICOSAMINOGLICANOS
GLICOPROT ÁCIDAS
QUAIS AS ORGANELAS ACIDOFILAS
MIT
GRANULOS SECREÇÃO
PROT. CITOPLASM.
COLAGENO (FIBRAS)
TRICONIDE DE MALLORY E MASSAN CORA O QUE?
COLÁGENO DO M. LISO DE VERDE
PICOSIRIUS CORA O QUE?
COLAGENO EM VERMELHO
METAIS PRATA E OURO CORA O QUE?
TEC. NERVOSO
CONTRACORANTE EM QUAL MÉTODO USAR E PORQUE
PARA VER OS CONTORNOS DA CÉLULA COMO O NÚCLEO E OS LIMITES DA CÉLULA
É USADO NA IMUNOHISTOQÚIMICA PORQUE ESSA TÉCNICA USA PRECIPTADOS OU CORANTES FLUORESCENTES, QUE NÃO EVIDENCIAM TANTO OS CONTORNOS DA CÉLULA E OS NÚCLEOS.
DE QUAL COMPONENTE DO MIC. LUZ DEPENDE A RESOLUÇÃO?
OBJETIVA
PORQUE A OCULAR SOMENTE AUMENTA A IMAGEM PROJETADA NELA PELA OBJETIVA
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE QUANDO USAR
PARA QUE SERVE
QUAL SEU MECANISMO DE GERAR IMAGENS
UTILIDADE
PARA VER CELULAS E CORTES NAO CORADAS (TRANSPARENTES), EX CEL VIVAS
EM CÉLULAS TRANSPARENTES, QUASE TODAS AS PARTES DO ESPÉCIME TEM A MESMA DENSIDADE ÓPTICA, POR ISSO SÃO DIFÍCEIS DE SE OBSERVAR
ASSIM, POR ESSE MÉTODO, AS IMAGENS SÃO GERADAS ATRAVÉS DA MUDANÇA DE VELOCIDADE DA LUZ (índice de refração) AO ATRAVESSAR ESTRUTURAS COM DIFERENTES INDICES DE REFRAÇÃO
ISSO FAZ COM QUE ALGUMAS ESTRUTURAS APAREÇAM MAIS CLARAS, E OUTRAS + ESCURAS
ÓTIMO PARA CÉLULAS VIVAS!!!
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DIFERENCIAL - NORMANSKI QUANDO USAR
PARA QUE SERVE
IDÉM MIC DE CONTRASTE DE FASE, SERVE PARA VER CÉLULAS NÃO CORADAS (TRANSPARENTES)
PORÉM AO INVÉS DE FOCAR NO CONTRASTE CLARO/ESCURO, FORMA UMA IMAGEM PSEUDO 3D.
PERMITE AVALIAR A SUPERFICIE DAS CÉL
MICROSCOPIA CONFOCAL OU VARREDURA CONNFOCAL
QUANDO USAR
PARA QUE SERVE
MÉTODO DE AÇÃO
USADO PARA ESTUDAR UM PLANO ESPECÍFICO DO OBJETO (SECÇÃO ÓPTICA)
PORQUE EM OUTROS MICROSCÓPIOS, OCORRE A SUPERPOSIÇÃO DE VÁRIOS PLANOS DO OBJETO
ASSIM, LOCALIZA COMPONENTES COM MUITA PRECISÃO
SE MARCA O COMPONENTE QUE QUER LOCALIZAR COM FLUORESCENCIA, E O FEIXE UTILIZADO É DE LASER
DEPOIS, PODE-SE REUNIR OS VÁRIOS PLANOS OBTIDOS EM UMA IMAGEM 3D ATRAVÉS DE COMPUTAÇÃO
3D
USA FEIXE DE LASER
FOCALIZA UM PLANO DA CEL COM MOLECULA FLUORESCENTE
MICROSCOPIA FLUORESCENCIA
QUANDO USAR
PARA QUE SERVE
MÉTODO DE AÇÃO
FLUORESCENCIA = SUBST IRRADIADA POR UM COMPR. DE ONDA EMITE LUZ COM COMPRIMENTO DE ONDA + LONGO
NESSE MÉTODO, OS TECIDOS SÃO IRRADIADOS COM LUZ UV
NESSE MÉTODO, LARANJADO DE ACRIDINA SE COMBINA COM DNA E RNA
DNA EMITE FLUORESCENCIA VERDE-AMARELADO
RNA EMITE FLUORESCENCIA VERMELHO-LARANJADO
FONTE DE LUZ É MERCURIO
COMO É A IMAGEM DO MICROSC. ELETRONICO
MÉTODO DE AÇÃO: EXPLIQUE COMO FUNCIONA A FORMAÇÃO DE UMAGENS
VANTAGENS
CORTE (QUAL MATERIAL É USADO PARA CORTAR E TIPO DE GRADE)
PRETO (REGIÃO ELETRODENSA) E BRANCA (ELETRO-TRANSP OU LUCENTE)
- ELÉTRONS SÃO LIBERADOS PELO AQUECIMENTO DO CÁTODO E VÃO ATÉ O ÂNODO EM ALTA VELOCIDADE, ESSA MIGRAÇÃO DE ELÉTRONS SE DEVE À DIFERENÇA DE VOLTAGEM
O TRAJETO SE DÁ DE CIMA PARA BAIXO E EM ALTA VEL
A PRIMEITA LENTE EM QUE OS ELETRONS PASSA É A CONDENSADORA, E DEPOIS POR VÁRIAS OUTRAS, QUE VÃO AMPLIANDO A IMAGEM
O CORTE PRECISA SER MUITO FINO, SÃO USADAS NAVALHAS DE VIDRO OU DE DIAMANTE, E O ESPÉCIME É COLOCADO EM GRADES METÁLICAS
ME USA LUZ?
ELETRONS
DIFERENÇA NA ATUAÇÃO DO FEIXE DE ELETRONS NO ME DE VARREDURA E TRANSMISSÃO
NO DE TRANSM. O FEIXE ATRAVESSA A CÉL, NO DE VARREDURA NÃO
EXPLIQUE O ME TRANSMISSÃO E VARREDURA
MICROSCOPIA DE TRANSMISSÃO:
Não se pode examinar células vivas, apenas fixadas e completamente
secas;
Os cortes histológicos precisam ser realmente finos, sendo necessária a
utilização de micrótomos com navalha de vidro fraturado ou diamante;
Os estudos de microscopia eletrônica transmissão são feitos
principalmente em ampliações em papel fotográfico, mais do que
diretamente no microscópio.
MET: seções ultrafinas do espécime são necessárias para que o feixe de elétrons
atravesse a amostra e uma imagem seja formada
MEV: amostras grossas podem ser utilizadas.
Neste caso, amostras fixadas quimicamente são desidratadas, secas no aparelho de ponto
crítico de secagem e cobertas como um metal condutor (Ex: ouro)
QUAL TECNICA GERA PRECIPTADOS INSOLUVEIS E ELETRODENSOS
IMUNOHISTOQ E CITOQUIMICA
QUAL TIPO DE PREPARAÇÃO É USADO EM TECIDOS PARA IMUNOHIST
CONGELADO PARA NAO INATIVAR AS ENZIMAS
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA AC NUCLEICOS
REAÇÃO DE FEULGEN
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA LIPUDEOS
SUDAN IV BLACK
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA GLICOGENIO
PAS
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA PROT
NAO É MTO INDICADO, MELHOR P ENZIMAS
EXPLIQUE A IMUNOHISTOQUIMICA
É SIMPLESMENTE PEGAR UM ANTICORPO E COLOCAR ELE PARA PROCURAR UMA PROTEÍNA QUE EU QUERO SABER SE ESTÁ ALI NA MINHA AMOSTRA.
eU COLOCO FLUORESCENAI NESSE ANTICORPO, E ASSIM VEJO SE ELE ACHA A PROTEÍNA
PODE SER USADO EM CUTL DE CEL
IMUNOHISTOQUIMICA DIRETA E INDIRETA
INDIRETA USA 2 ANTICORPOS, 1 SEM FLURESCENCIA E OUTRO COM.
ESSE SEGUNDO IRA SE LIGAR NO PRIMEIRO
É MELHOR PARA AMPLIFICAR SINAL, MAIS SENSIVEL
LIMITE OLHO HUMANO
MO
ME
2MM
200NM
0,2NM
CÉLULAS VIVAS PODEM SER VISTAS NO MO?
SIM, DESDE QUE SEJAM CAMADAS MUITO FINAS DE LÂMINAS OU TECIDOS
E TAMBÉM MEMBRANAS TRANSPARENTES COMO CAUDA DE GIRINO.
QUAIS OS 4 TIPOS DE TECIDOS HISTOLÓGICOS
CONJ
MUSC
NERVOSO
EPIT
PORQUE SE USA FIXAÇÃO DUPLA NO ME?
PARA PRESERVAR A ULTRA-ESTRUTURA, JÁ QUE O ME VE DETALHES DA ESTRUTURA
O TETRÓXIDO DE ÓSMIO PRESERVA E FORNECE CONTRASTE AOS LIPÍDEOS E PROTEÍNAS
QUAL SE CORA COM HEMATO E QUAL SE CORA COM EOSINA:
NUCLEO
PARTES DO CITOPLASMA EM RNA
MATRIZ CARTILAGEM HIALINA
CITOPLASMA
COLAGENO
NUCLEO - HEMATO
PARTES DO CITOPLASMA EM RNA - HEMATO
MATRIZ CARTILAGEM HIALINA - HEMATO
CITOPLASMA - EOSINA
COLAGENO - EOSINA
CORANTES OFERECEM INFORMAÇÕES SOBRE A NATUREZA QUIMICA DOS TECIDOS
NÃO, QUASE NADA
O QUE DETERMINA A RIQUEZA DE DETALHES NA IMAGEM DO MICROSCÓPIO
LIMITE DE RESOLUÇÃO
E NÃO O SEU PODER DE AUMENTO!!!!
O QUE É PODER DE RESOLUÇÃO?
EXPLIQUE NA PRÁTICA O QUE SIGNIFICA
É A MENOR DISTANCIA ENTRE 2 PATÍCULAS QUE PERMITE QUE ELAS SEJAM VISTAS COMO OBJETOS SEPARADOS
EX: MO É 0,2UM
ISSO SIGNIFICA QUE OBJETOS MENORES OU MAIS FINOS QUE 0,2UM SERÃO VISTOS COMO UM SÓ OBJETO
SE UMA MITOCONDRIA E UM LISOSSOMO ESTIVEREM MENOS DISTANTES UM DO OUTRO QUE 0,2, SERÃO PERCEBIDOS COMO UM SÓ OBJ
O QUE É PODER DE RESOLUÇÃO?
EXPLIQUE NA PRÁTICA O QUE SIGNIFICA
É A MENOR DISTANCIA ENTRE 2 PATÍCULAS QUE PERMITE QUE ELAS SEJAM VISTAS COMO OBJETOS SEPARADOS
EX: MO É 0,2UM
ISSO SIGNIFICA QUE OBJETOS MENORES OU MAIS FINOS QUE 0,2UM SERÃO VISTOS COMO UM SÓ OBJETO
SE UMA MITOCONDRIA E UM LISOSSOMO ESTIVEREM MENOS DISTANTES UM DO OUTRO QUE 0,2, SERÃO PERCEBIDOS COMO UM SÓ OBJ
MICROSCOPIA DE POLARIZAÇÃO
O QUE É
PARA QUE SERVE
PALAVRA CHAVE: BIORREFRINGÊNCIA
USA FILTROS, EX NICOL OU POLAROID
E UM OUTRO SEGUNDO FILTRO
VE TECIDOS COM ALTO GRAU DE ORIENTAÇÃO (CELULOSE, COLÁGENO, CRISTAIS, MICROTÚBULOS)
RADIOAUTOGRAFIA
O QUE É
PARA QUE SERVE
A radioautografia é muito empregada para estudar os locais de síntese e o destino de macromoléculas. A radioautografia pode ser aplicada como uma técnica citoquímica para a detecção de isótopos radioativos. Baseia-se na sensibilidade das emulsões fotográficas às radiações ionizastes.
Possibilita o estudo funcional de processos biológicos em cortes de tecidos pelo uso de radioatividade que sensibilizam emulsões fotográficas.
CONCEITOS:
CULTURA PRIMÁRIA
LINHAGENS PERMAMNTES DE CÉLULA
TRANSFORMAÇÃO
- CÉLULAS TIRADAS DIRETAMENTE DO TECIDO E COLOCADAS EM MEIO ADEQUADO, FORMANDO CULTURAS
- SÃO AS CÉLULAS ORIGINAIS TIRADAS DO TECIDO E QUE AGORA ESTÃO CRESENDO IN VITRO, SENDO ENTÃO A LINHAGEM PERMANENTE
- É O PROCESSO QUE AS CÉL NORMAIS IN VITRO PRECISAM SOFRER PARA NÃO MORREREM NA CULTURA
FRACIONAMENTO CELULAR
SEPARA ORGANELAS/COMPONENTES ATRAVÉS DE CENTRIFUGAÇÃO POR COEFICIENTES DE SEDIMENTAÇÃO
O QUE PODE SER IDENTIFICADO PELA HISTOQUIMICA
ÍONS
DNA
PROT
POLISSACARÍDEOS (GLICOGENIO)
PROTEÍNAS NÃO!!S SOMENTE IMUNOHISTOQUIMICA
MELHOR FORMA DE OBSERVAR LIPIDEOS
CONGELAMENTO, DEPOIS USAR SUDAN IV E SUDAN BLACK
REAÇÃO DE PERLS
ALICAN BLUES
GAG
FERRO
SAO HISTOQUIMICA
IMUNOHISTOQUÍMICA
USAR ANTICORPOS MARCADOS PARA IDENTIFICAR MOLÉCULAS
HIBRIDIZAÇÃO
COMO É
PARA QUE SERVE
BUSCA IDENTIFICAR SE A CÉLULA CONTÉM DETERMINADA SEQUENCIA DE DNA OU GENE
PRIMEIRO SE AQUECE O DNA PARA SEPARAR SUAS DUAS CADEIAS
SE INSERE UMA SEQUENCIA SONDA, QUE É COMPLEMENTAR ÀQUEOA QUE ESTOU BUSCANDO ENCONTRAR
ARTEFATOS DE TECNICA
DISTORÇÕES CAUSADAS PELOS PROCEDIMENTOS DE PREPRAÇÃO DOS CORTES
QUAL MICROSCÓPIO PERMITE IDENTIFICAR NO MESMO CORTE TODAS AS ORGANELAS E SUAS MEBRANAS
ELETRONICO, NO DE LUZ NAO DA PORQUE SERIA PRECISO FAZER VARIOS PREPAROS COM DIFERENTES CORANTES
MFA
MICROSCÓPIO DE FORÇA ATOMICA
COMPARAVEL AO MET
COM QUEM AS SUBSTAMCIAS FIXADORAS REAGEM?
COM O GRUPO AMINA DAS PROTEÍNAS
ESPECIALMENTE LISINA
PRINCIPAL A.A REL COM A FIXAÇÃO
LISINA
VDD OU FALSO:
FORMALDEIDO 37% É USADO NA FIXAÇÃP
VDD PARA ROSS
PARA JUNQ, 4%
DIF FORMALDEIDO E GLUTARALDEIDO
FORMALDEIDO É UM MONOALDEÍDO
GLUTARALDEIDO É DIALDEÍDO, FIXA +
DIAFANIZAÇÃO
É A CLARIFICAÇÃO (XILOL/TOLUOL)
FUNÇÃO DA CLARIFICAÇÃO
SUBSTITUI OS LOCAIS PREENCHIDOS PELO ETANOL NA DESIDRSTAÇÃO, PRA PARAFINA PODER ENTRAR NO TECIDO DEPOIS.
PQ A PARAFINA NAO É SOLUVEL EM ALCOOL
proteinas citoplasmaticas sao basicas ou acidas
BASICAS, SE CORAM COM EOSINA
QUAL O USO DA RESORCINAFUSCINA OU ORCEINA
MAT ELASTICO
O QUE SE USA PARA CORAR FIBRAS RETICULARES E MEMBRANA BASAL
IMPREG METAIS
citoquímica
IDENTIFICAÇÃO E LOCALIZAÇÃO DE CONSTITUINTES CELULARES
PODEM SER LOCALIZADOS PELA MO OU ME
CROMATOGRAFIA EM COUNA
DETERMINA A VEL DE MIGRAÇÃO DAS PROTEÍNAS
AS PROTEÍNAS SÃO MARCADAS EM CORES
ELETEROFOSFORESE EM GEL
DETERMINA TAMANHO E CARGA DAS PROTEINAS
SAEM DO POLO - PARA +
FRAGMENTOS MENORES MIGRAM MAIS RAPIDO
DDP (FONTE DE CORRENTE ELÉTRICA)
É UMA CORRIDA DAS PROTEINAS
RADIOAUTOGRAFIA
COLOCA COMPOSTO RADIOATIVO NAS CÉL
SERVE PARA LOCALIZAÇAO E DETECÇÃO
MO E ME
USA RADIAÇÃO BETA, BAIXA PENETRAÇÃO PARA NAO MATAR A CEL
CENTRIGUGAÇÃO
SERVE PARA FRACIONAMENTO DA CÉL
FAZ ISSO A PARTIR DO COEF DE SEDIMENTAÇÃO
LEMBRAR QUE PRIMEIROS QUEBRA AS MEMBRANAS PARA DEPOIS CENTRIFUGAR
CULTURA DE CÉL
DIRETA /PRIMARIA- TIRA DO CORPO E COLOCA NA CULTURA
INDIRETA-SECUNDARIA: VEIO DA PRIMARIA
M. DE CONTRASTE DE FASE (PQ SAO CEL VIVAS)
CORANTE VERDE JANO (PQ SAO CEL VIVAS)
