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metodos estudos histologia Flashcards

1
Q

etapas preparação da célula E SUBSTANCIAS USADAS

A

1- fixação (preserva o tecido, evita ação de enzimas)

2- inclusão = desidratação + clareamento + infiltração parafina (consistência)

3- cortar

4- coloração (basófilos e acidófilos)

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2
Q

tipos de fixação

A

FISICA (congelamento) E QUIMICA (formaldeído ou glutaraldeído)

fixação dupla: glutaraldeído tamponado + peróxido de ósmio. Serve para dar mais contraste aos lipídeos e proteínas

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3
Q

substancias utilizadas na inclusão

A

parafina (mic. luz)
**TB PODE USAR RESINA PLASTICA

resinas (eletonico e luz)
***MAS NO ELETRONICO É SÓ REINA EPÓXI

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4
Q

como se faz a incluisão e suas fases

A

desidratação - etanol (CRESCENTE)
clareamento - xilol
infiltração - parafina quente

DEPOIS QUE A PARAFINA ESFRIA, ELA SOLIDIFICA E SE TORNA RÍGIDA.

ENTÃO PODE SER CORTADA.

APÓS SER CORTADA, OS CORTES SÃO COLOCADOS PARA FLUTUAR EM AGUA QUENTE ANTES DE SEREM COLOCADOS NA LÂMINA, ONDE SERÃO CORADOS

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5
Q

quando se usa fixação por congelamento?

QUAIS COMPONENTES ELA PRESERVA?

COMO É CHAMADO SEU MICRÓTOMO?

A

estudo de enz, prot, pois não as inativa como na fixação química

estudo de lipideos tb, pq o xilol os dissolve na fixaçao química

CRIOSTATO

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6
Q

cor da hematoxilina e da eosina e qual parte da cél é corada por elas

A

hemato = nucleo e outras partes acidas

eosina = citoplasma e colágeno

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7
Q

impregnação metálica

A

muito usada em tecidos nervosos

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8
Q

parte óptica do microscópio

QUAL A FUNÇÃO DE CADA UMA

A

lente ocular
lente objetiva
condensador

CONDENSADOR = CONCENTRA A LUZ DA LAMPADA E PROJETA UM FEIXE DE LUZ SOBRE O ESPÉCIME. ESSE FEIXA DE LUZ IRÁ ATRAVESSA-LO

OBJETIVA = RECEBE A LUZ QUE ATRAVESSOU O ESPÉCIME E PROJETA UMA IMAGEM AUMENTADA DO OBJETO EM DIREÇÃO À OCULAR

OCULAR = AMPLIA A IMAGEM NOVAMENTE E A PROJETA, SEJA NA RETINA, OU EM UMA TELA

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9
Q

fluorescencia qual o corante e pra que tipo de molécula

A

laranjado de acridina

DNA, RNA, e outras

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10
Q

imunohistoquimica

A

A imuno-histoquímica (IHQ) é um método de localização de antígenos (e.g. proteínas) em tecidos, explorando o princípio da ligação específica de anticorpos a antígenos no tecido biológico.[1] O nome da técnica provém das raízes “imuno”, em referência aos anticorpos utilizados no procedimento, e “histo”, significando tecido (compare com imunocitoquímica). A coloração imuno histoquímica é amplamente utilizada no diagnóstico de células anormais, tais como aquelas encontradas em neoplasias.

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11
Q

microscopia eletrônica de transmissão, varredura para que serve e dierenças

A

O microscópio eletrônico possui dois tipos de transmissão e de varredura, a diferença entre os dois é que o de transmissão serve para estudar as estruturas cortadas em fatias muito finas, em contrapartida, os microscópios de varredura são utilizados para analisar a superfície do corpo de seres vivos, de células

Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET): Neste microscópio o feixe de elétrons atravessa a célula e forma a imagem em uma tela fluorescente, dando detalhes de moléculas, organelas e estruturas intracelulares, tendo capacidade de produzir imagens de alta resolução e ampliação (até 300 mil vezes).

Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV): A formação de imagem deste microscópio é feita com os elétrons que varrem a superfície das estruturas biológicas. Deste modo, este microscópio nos fornece uma imagem da superfície, com noções de profundidade e tridimensionalidade e seu limite de resolução é cerca de 0.3nm.

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12
Q

eletromicrografia

A

Eletromicrografia ou micrografia eletrônica é uma imagem obtida pela fotografia da imagem da tela de um microscópio eletrônico de varredura, ou pela incidência de elétrons em um filme fotográfico no microscópio eletrônico de transmissão.

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13
Q

resina plasticas

A

resinas plásticas, como o glicol metacrilato

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14
Q

criofratura

A

[Bio.] Método de microscopia eletrônica no qual as amostras são congeladas em nitrogênio líquido e então fraturadas para separar a camada bilateral de lipídios, expondo a face interior das membranas celulares.

A criofratura é um método de microscopia eletrônica.

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15
Q

Tricrômico de Masson o que é e quais os constituintes

A

Corante ou coloração tricromo ou tricrômica de Masson é uma combinação de corantes usados em um protocolo de coloração de três cores em histologia.

hematoxilina
fsuscina acida
ponceau de xilidina
verde liz

aparece colageno em verde, mm em rosa, etc

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16
Q

fucsina resorcina de weigert o que é e serve para qual tecido

A

cora as fibras elasticas de marrom

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17
Q

impregnação argentica - golgi qual o material usado

A

sais de prata

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18
Q

coloração de wright quais os corantes usados e para que serve

A

eosina + azul de metileno

mto util em cel do sangue

É usado principalmente para a coloração de esfregaço de sangue periférico, amostras de urina e medula óssea, biópsia por aspiração por agulha, que são examinadas sob um microscópio ótico. Em citogenética, é usado para colorir cromossomos para facilitar o diagnóstico de síndromes e doenças

As amostras de urina coradas com a coloração Wright identificarão eosinófilos os quais podem indicar nefrite túbulo-intersticial ou infecção do trato urinário [4]

Glóbulos brancos corados com coloração de Wright

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19
Q

QUANDO DE USA O MÉTODO FÍSICO DE CONGELAMENTO

A

GERALMENTE EM HOSPITAIS, QUANDO QUERO ESTUDAR PROT, ENZIMAS, LIPIDEOS

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20
Q

QUANDO SE USA A FIXAÇÃO DUPLA

A

PARA MICROSCOPIA ELETRONICA

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21
Q

A DESIDRATAÇÃO COM ETANOL É EM SOLUÇÃO CRESCENTE OU DECRESCENTE?

A

CRESCENTE

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22
Q

DETALHE O PROCESSO DE COLORAÇÃO COM TODAS AS SUAS ETAPAS

A 
1 - REMOVER PARAFINA COM XILOL E TOLUOL
2-REHIDRATAR COM ALCOOL DECRESCENTE
3-CORAR COM HEMATOX
4-DESIDRATAR
5-CORAR COM EOSINA
6-REIDRATAR

ACABAR DE PREENCHER

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23
Q

QUAIS AS ORGANELAS BASOFILAS?

A

AC. NUCLEICOS
GLICOSAMINOGLICANOS
GLICOPROT ÁCIDAS

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24
Q

QUAIS AS ORGANELAS ACIDOFILAS

A

MIT
GRANULOS SECREÇÃO
PROT. CITOPLASM.
COLAGENO (FIBRAS)

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25
TRICONIDE DE MALLORY E MASSAN CORA O QUE?
COLÁGENO DO M. LISO DE VERDE
26
PICOSIRIUS CORA O QUE?
COLAGENO EM VERMELHO
27
METAIS PRATA E OURO CORA O QUE?
TEC. NERVOSO
28
CONTRACORANTE EM QUAL MÉTODO USAR E PORQUE
PARA VER OS CONTORNOS DA CÉLULA COMO O NÚCLEO E OS LIMITES DA CÉLULA É USADO NA IMUNOHISTOQÚIMICA PORQUE ESSA TÉCNICA USA PRECIPTADOS OU CORANTES FLUORESCENTES, QUE NÃO EVIDENCIAM TANTO OS CONTORNOS DA CÉLULA E OS NÚCLEOS.
29
DE QUAL COMPONENTE DO MIC. LUZ DEPENDE A RESOLUÇÃO?
OBJETIVA PORQUE A OCULAR SOMENTE AUMENTA A IMAGEM PROJETADA NELA PELA OBJETIVA
30
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE QUANDO USAR PARA QUE SERVE QUAL SEU MECANISMO DE GERAR IMAGENS UTILIDADE
PARA VER CELULAS E CORTES NAO CORADAS (TRANSPARENTES), EX CEL VIVAS EM CÉLULAS TRANSPARENTES, QUASE TODAS AS PARTES DO ESPÉCIME TEM A MESMA DENSIDADE ÓPTICA, POR ISSO SÃO DIFÍCEIS DE SE OBSERVAR ASSIM, POR ESSE MÉTODO, AS IMAGENS SÃO GERADAS ATRAVÉS DA MUDANÇA DE VELOCIDADE DA LUZ (índice de refração) AO ATRAVESSAR ESTRUTURAS COM DIFERENTES INDICES DE REFRAÇÃO ISSO FAZ COM QUE ALGUMAS ESTRUTURAS APAREÇAM MAIS CLARAS, E OUTRAS + ESCURAS ÓTIMO PARA CÉLULAS VIVAS!!!
31
MICROSCOPIA DE CONTRASTE DIFERENCIAL - NORMANSKI QUANDO USAR PARA QUE SERVE
IDÉM MIC DE CONTRASTE DE FASE, SERVE PARA VER CÉLULAS NÃO CORADAS (TRANSPARENTES) PORÉM AO INVÉS DE FOCAR NO CONTRASTE CLARO/ESCURO, FORMA UMA IMAGEM PSEUDO 3D. PERMITE AVALIAR A SUPERFICIE DAS CÉL
32
MICROSCOPIA CONFOCAL OU VARREDURA CONNFOCAL QUANDO USAR PARA QUE SERVE MÉTODO DE AÇÃO
USADO PARA ESTUDAR UM PLANO ESPECÍFICO DO OBJETO (SECÇÃO ÓPTICA) PORQUE EM OUTROS MICROSCÓPIOS, OCORRE A SUPERPOSIÇÃO DE VÁRIOS PLANOS DO OBJETO ASSIM, LOCALIZA COMPONENTES COM MUITA PRECISÃO SE MARCA O COMPONENTE QUE QUER LOCALIZAR COM FLUORESCENCIA, E O FEIXE UTILIZADO É DE LASER DEPOIS, PODE-SE REUNIR OS VÁRIOS PLANOS OBTIDOS EM UMA IMAGEM 3D ATRAVÉS DE COMPUTAÇÃO ---------------------------------------------------------- 3D USA FEIXE DE LASER FOCALIZA UM PLANO DA CEL COM MOLECULA FLUORESCENTE
33
MICROSCOPIA FLUORESCENCIA QUANDO USAR PARA QUE SERVE MÉTODO DE AÇÃO
FLUORESCENCIA = SUBST IRRADIADA POR UM COMPR. DE ONDA EMITE LUZ COM COMPRIMENTO DE ONDA + LONGO NESSE MÉTODO, OS TECIDOS SÃO IRRADIADOS COM LUZ UV NESSE MÉTODO, LARANJADO DE ACRIDINA SE COMBINA COM DNA E RNA DNA EMITE FLUORESCENCIA VERDE-AMARELADO RNA EMITE FLUORESCENCIA VERMELHO-LARANJADO ASSIM, É POSSÍVEL LOCALIZAR OS AC NUCLEICOS NAS CÉL ----------------------------------------------- FONTE DE LUZ É MERCURIO
34
COMO É A IMAGEM DO MICROSC. ELETRONICO MÉTODO DE AÇÃO: EXPLIQUE COMO FUNCIONA A FORMAÇÃO DE UMAGENS VANTAGENS CORTE (QUAL MATERIAL É USADO PARA CORTAR E TIPO DE GRADE)
PRETO (REGIÃO ELETRODENSA) E BRANCA (ELETRO-TRANSP OU LUCENTE) - ELÉTRONS SÃO LIBERADOS PELO AQUECIMENTO DO CÁTODO E VÃO ATÉ O ÂNODO EM ALTA VELOCIDADE, ESSA MIGRAÇÃO DE ELÉTRONS SE DEVE À DIFERENÇA DE VOLTAGEM O TRAJETO SE DÁ DE CIMA PARA BAIXO E EM ALTA VEL A PRIMEITA LENTE EM QUE OS ELETRONS PASSA É A CONDENSADORA, E DEPOIS POR VÁRIAS OUTRAS, QUE VÃO AMPLIANDO A IMAGEM O CORTE PRECISA SER MUITO FINO, SÃO USADAS NAVALHAS DE VIDRO OU DE DIAMANTE, E O ESPÉCIME É COLOCADO EM GRADES METÁLICAS
35
ME USA LUZ?
ELETRONS
36
DIFERENÇA NA ATUAÇÃO DO FEIXE DE ELETRONS NO ME DE VARREDURA E TRANSMISSÃO
NO DE TRANSM. O FEIXE ATRAVESSA A CÉL, NO DE VARREDURA NÃO
37
EXPLIQUE O ME TRANSMISSÃO E VARREDURA
MICROSCOPIA DE TRANSMISSÃO:  Não se pode examinar células vivas, apenas fixadas e completamente secas;  Os cortes histológicos precisam ser realmente finos, sendo necessária a utilização de micrótomos com navalha de vidro fraturado ou diamante;  Os estudos de microscopia eletrônica transmissão são feitos principalmente em ampliações em papel fotográfico, mais do que diretamente no microscópio. MET: seções ultrafinas do espécime são necessárias para que o feixe de elétrons atravesse a amostra e uma imagem seja formada MEV: amostras grossas podem ser utilizadas. Neste caso, amostras fixadas quimicamente são desidratadas, secas no aparelho de ponto crítico de secagem e cobertas como um metal condutor (Ex: ouro)
38
QUAL TECNICA GERA PRECIPTADOS INSOLUVEIS E ELETRODENSOS
IMUNOHISTOQ E CITOQUIMICA
39
QUAL TIPO DE PREPARAÇÃO É USADO EM TECIDOS PARA IMUNOHIST
CONGELADO PARA NAO INATIVAR AS ENZIMAS
40
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA AC NUCLEICOS
REAÇÃO DE FEULGEN
41
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA LIPUDEOS
SUDAN IV BLACK
42
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA GLICOGENIO
PAS
43
NA HISTOQ, QUAL CORANTE USAMOS PARA PROT
NAO É MTO INDICADO, MELHOR P ENZIMAS
44
EXPLIQUE A IMUNOHISTOQUIMICA
É SIMPLESMENTE PEGAR UM ANTICORPO E COLOCAR ELE PARA PROCURAR UMA PROTEÍNA QUE EU QUERO SABER SE ESTÁ ALI NA MINHA AMOSTRA. eU COLOCO FLUORESCENAI NESSE ANTICORPO, E ASSIM VEJO SE ELE ACHA A PROTEÍNA PODE SER USADO EM CUTL DE CEL
45
IMUNOHISTOQUIMICA DIRETA E INDIRETA
INDIRETA USA 2 ANTICORPOS, 1 SEM FLURESCENCIA E OUTRO COM. ESSE SEGUNDO IRA SE LIGAR NO PRIMEIRO É MELHOR PARA AMPLIFICAR SINAL, MAIS SENSIVEL
46
LIMITE OLHO HUMANO MO ME
2MM 200NM 0,2NM
47
CÉLULAS VIVAS PODEM SER VISTAS NO MO?
SIM, DESDE QUE SEJAM CAMADAS MUITO FINAS DE LÂMINAS OU TECIDOS E TAMBÉM MEMBRANAS TRANSPARENTES COMO CAUDA DE GIRINO.
48
QUAIS OS 4 TIPOS DE TECIDOS HISTOLÓGICOS
CONJ MUSC NERVOSO EPIT
49
PORQUE SE USA FIXAÇÃO DUPLA NO ME?
PARA PRESERVAR A ULTRA-ESTRUTURA, JÁ QUE O ME VE DETALHES DA ESTRUTURA O TETRÓXIDO DE ÓSMIO PRESERVA E FORNECE CONTRASTE AOS LIPÍDEOS E PROTEÍNAS
50
QUAL SE CORA COM HEMATO E QUAL SE CORA COM EOSINA: NUCLEO PARTES DO CITOPLASMA EM RNA MATRIZ CARTILAGEM HIALINA CITOPLASMA COLAGENO
NUCLEO - HEMATO PARTES DO CITOPLASMA EM RNA - HEMATO MATRIZ CARTILAGEM HIALINA - HEMATO CITOPLASMA - EOSINA COLAGENO - EOSINA
51
CORANTES OFERECEM INFORMAÇÕES SOBRE A NATUREZA QUIMICA DOS TECIDOS
NÃO, QUASE NADA
52
O QUE DETERMINA A RIQUEZA DE DETALHES NA IMAGEM DO MICROSCÓPIO
LIMITE DE RESOLUÇÃO E NÃO O SEU PODER DE AUMENTO!!!!
53
O QUE É PODER DE RESOLUÇÃO? EXPLIQUE NA PRÁTICA O QUE SIGNIFICA
É A MENOR DISTANCIA ENTRE 2 PATÍCULAS QUE PERMITE QUE ELAS SEJAM VISTAS COMO OBJETOS SEPARADOS EX: MO É 0,2UM ISSO SIGNIFICA QUE OBJETOS MENORES OU MAIS FINOS QUE 0,2UM SERÃO VISTOS COMO UM SÓ OBJETO SE UMA MITOCONDRIA E UM LISOSSOMO ESTIVEREM MENOS DISTANTES UM DO OUTRO QUE 0,2, SERÃO PERCEBIDOS COMO UM SÓ OBJ
54
O QUE É PODER DE RESOLUÇÃO? EXPLIQUE NA PRÁTICA O QUE SIGNIFICA
É A MENOR DISTANCIA ENTRE 2 PATÍCULAS QUE PERMITE QUE ELAS SEJAM VISTAS COMO OBJETOS SEPARADOS EX: MO É 0,2UM ISSO SIGNIFICA QUE OBJETOS MENORES OU MAIS FINOS QUE 0,2UM SERÃO VISTOS COMO UM SÓ OBJETO SE UMA MITOCONDRIA E UM LISOSSOMO ESTIVEREM MENOS DISTANTES UM DO OUTRO QUE 0,2, SERÃO PERCEBIDOS COMO UM SÓ OBJ
55
MICROSCOPIA DE POLARIZAÇÃO O QUE É PARA QUE SERVE
PALAVRA CHAVE: BIORREFRINGÊNCIA USA FILTROS, EX NICOL OU POLAROID E UM OUTRO SEGUNDO FILTRO VE TECIDOS COM ALTO GRAU DE ORIENTAÇÃO (CELULOSE, COLÁGENO, CRISTAIS, MICROTÚBULOS)
56
RADIOAUTOGRAFIA O QUE É PARA QUE SERVE
A radioautografia é muito empregada para estudar os locais de síntese e o destino de macromoléculas. A radioautografia pode ser aplicada como uma técnica citoquímica para a detecção de isótopos radioativos. Baseia-se na sensibilidade das emulsões fotográficas às radiações ionizastes. Possibilita o estudo funcional de processos biológicos em cortes de tecidos pelo uso de radioatividade que sensibilizam emulsões fotográficas.
57
CONCEITOS: CULTURA PRIMÁRIA LINHAGENS PERMAMNTES DE CÉLULA TRANSFORMAÇÃO
- CÉLULAS TIRADAS DIRETAMENTE DO TECIDO E COLOCADAS EM MEIO ADEQUADO, FORMANDO CULTURAS - SÃO AS CÉLULAS ORIGINAIS TIRADAS DO TECIDO E QUE AGORA ESTÃO CRESENDO IN VITRO, SENDO ENTÃO A LINHAGEM PERMANENTE - É O PROCESSO QUE AS CÉL NORMAIS IN VITRO PRECISAM SOFRER PARA NÃO MORREREM NA CULTURA
58
FRACIONAMENTO CELULAR
SEPARA ORGANELAS/COMPONENTES ATRAVÉS DE CENTRIFUGAÇÃO POR COEFICIENTES DE SEDIMENTAÇÃO
59
O QUE PODE SER IDENTIFICADO PELA HISTOQUIMICA
ÍONS DNA PROT POLISSACARÍDEOS (GLICOGENIO) PROTEÍNAS NÃO!!S SOMENTE IMUNOHISTOQUIMICA
60
MELHOR FORMA DE OBSERVAR LIPIDEOS
CONGELAMENTO, DEPOIS USAR SUDAN IV E SUDAN BLACK
61
REAÇÃO DE PERLS ALICAN BLUES
GAG FERRO SAO HISTOQUIMICA
62
IMUNOHISTOQUÍMICA
USAR ANTICORPOS MARCADOS PARA IDENTIFICAR MOLÉCULAS
63
HIBRIDIZAÇÃO COMO É PARA QUE SERVE
BUSCA IDENTIFICAR SE A CÉLULA CONTÉM DETERMINADA SEQUENCIA DE DNA OU GENE PRIMEIRO SE AQUECE O DNA PARA SEPARAR SUAS DUAS CADEIAS SE INSERE UMA SEQUENCIA SONDA, QUE É COMPLEMENTAR ÀQUEOA QUE ESTOU BUSCANDO ENCONTRAR
64
ARTEFATOS DE TECNICA
DISTORÇÕES CAUSADAS PELOS PROCEDIMENTOS DE PREPRAÇÃO DOS CORTES
65
QUAL MICROSCÓPIO PERMITE IDENTIFICAR NO MESMO CORTE TODAS AS ORGANELAS E SUAS MEBRANAS
ELETRONICO, NO DE LUZ NAO DA PORQUE SERIA PRECISO FAZER VARIOS PREPAROS COM DIFERENTES CORANTES
66
MFA
MICROSCÓPIO DE FORÇA ATOMICA COMPARAVEL AO MET
67
COM QUEM AS SUBSTAMCIAS FIXADORAS REAGEM?
COM O GRUPO AMINA DAS PROTEÍNAS ESPECIALMENTE LISINA
68
PRINCIPAL A.A REL COM A FIXAÇÃO
LISINA
69
VDD OU FALSO: FORMALDEIDO 37% É USADO NA FIXAÇÃP
VDD PARA ROSS PARA JUNQ, 4%
70
DIF FORMALDEIDO E GLUTARALDEIDO
FORMALDEIDO É UM MONOALDEÍDO GLUTARALDEIDO É DIALDEÍDO, FIXA +
71
DIAFANIZAÇÃO
É A CLARIFICAÇÃO (XILOL/TOLUOL)
72
FUNÇÃO DA CLARIFICAÇÃO
SUBSTITUI OS LOCAIS PREENCHIDOS PELO ETANOL NA DESIDRSTAÇÃO, PRA PARAFINA PODER ENTRAR NO TECIDO DEPOIS. PQ A PARAFINA NAO É SOLUVEL EM ALCOOL
73
proteinas citoplasmaticas sao basicas ou acidas
BASICAS, SE CORAM COM EOSINA
74
QUAL O USO DA RESORCINAFUSCINA OU ORCEINA
MAT ELASTICO
75
O QUE SE USA PARA CORAR FIBRAS RETICULARES E MEMBRANA BASAL
IMPREG METAIS
76
citoquímica
IDENTIFICAÇÃO E LOCALIZAÇÃO DE CONSTITUINTES CELULARES PODEM SER LOCALIZADOS PELA MO OU ME
77
CROMATOGRAFIA EM COUNA
DETERMINA A VEL DE MIGRAÇÃO DAS PROTEÍNAS AS PROTEÍNAS SÃO MARCADAS EM CORES
78
ELETEROFOSFORESE EM GEL
DETERMINA TAMANHO E CARGA DAS PROTEINAS SAEM DO POLO - PARA + FRAGMENTOS MENORES MIGRAM MAIS RAPIDO DDP (FONTE DE CORRENTE ELÉTRICA) É UMA CORRIDA DAS PROTEINAS
79
RADIOAUTOGRAFIA
COLOCA COMPOSTO RADIOATIVO NAS CÉL SERVE PARA LOCALIZAÇAO E DETECÇÃO MO E ME USA RADIAÇÃO BETA, BAIXA PENETRAÇÃO PARA NAO MATAR A CEL
80
CENTRIGUGAÇÃO
SERVE PARA FRACIONAMENTO DA CÉL FAZ ISSO A PARTIR DO COEF DE SEDIMENTAÇÃO LEMBRAR QUE PRIMEIROS QUEBRA AS MEMBRANAS PARA DEPOIS CENTRIFUGAR
81
CULTURA DE CÉL
DIRETA /PRIMARIA- TIRA DO CORPO E COLOCA NA CULTURA INDIRETA-SECUNDARIA: VEIO DA PRIMARIA M. DE CONTRASTE DE FASE (PQ SAO CEL VIVAS) CORANTE VERDE JANO (PQ SAO CEL VIVAS)

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