Métodos De Estudo Da Histologia Flashcards
Definir o que é histologia e qual o seu objetivo.
É a ciência que estuda os tecidos do corpo (formados por células e matriz extracelular - MEC) objetivando entender como estas estruturas se organizam para construir os órgãos e os sistemas.
Porque a histologia é dependente do uso de microscópio?
Devido ao tamanho reduzido das células e dos componentes da MEC, impossibilitando a observação a olho nu.
O que é um microscópio?
É um equipamento que permite a ampliação das amostras analisadas possibilitando observar detalhes impossíveis de serem vistos a olho desarmado.
Defina poder de resolução. Diferencie de poder de aumento.
Menor distância entre duas partículas ou entre duas linhas a qual permite que elas sejam vistas como dois objetos separados. O poder de aumento é a capacidade de aproximação da imagem analisada
Como um plano de corte deve ser interpretado a partir de suas dimensões?
Quando um plano de corte é observado ao microscópio, sempre se deve imaginar que algo pode
estar faltando à frente ou atrás daquele corte, uma vez que muitas estruturas são mais espessas
que o corte. Os componentes de um tecido ou órgão são geralmente seccionados ao acaso,
fazendo necessária a visualização espacial que aquele corte ocupa na organização do
tecido/órgão.
Como a imagem se forma na microscopia de luz/óptica? Porque a necessidade do corte delgado do micrótomo? Como é calculado o poder de aumento de um microscópio de luz?
Imagem é formada a partir de iluminação que atravessa o espécime de baixo para cima, daí a importância de que a amostra seja o mais fina possível. O poder de aumento é o produto entre o aumento da lente objetiva utilizada e da lente ocular.
Quais e quantas são as partes mecânicas de um microscópio de luz?
7 partes
1. Base
2. Micro/Macrométrico
3. Charriot
4. Platina ou Bandeja
5. Revólver
6. Braço
7. Tubo
Quais e quantas são as partes ópticas do microscópio de luz?
Lente ocular
Lente objetiva
Lente condensadora
O que é processamento histológico?
É o conjunto de procedimentos técnicos divididos em etapas sequenciais no preparo da amostra de um tecido
a
ser analisada em um microscópio.
Cite e explique as etapas de preparação e seus respectivos materiais utilizados em uma amostra a ser examinada por microscopia de luz.
Etapa 1: Fixação - Responsável por preservar a morfologia e a composição dos tecidos, evitar autólise e endurecer as amostras por meio do paraformaldeido e do glutaraldeído.
Etapa 2: Desidratação - Remove a água dos tecidos por meio do álcool ou acetona.
Etapa 3: Clarificação - responsável por remover o álcool utilizado anteriormente dos tecidos, feita por meio do xilol.
Etapa 4: Infiltração - penetração da parafina líquida
Etapa 5: Inclusão - parafina proporciona consistência rígida para a amostra : obtenção do BLOCO
Etapa 6: Microtomia - utilização de lâminas de aço para o corte delgado das peças infiltradas.
Etapa 7: Hidratação - adicionar água aos tecidos
Etapa 8 : Coloração - faz uso de diferentes corantes para evidenciar os componentes dos tecidos
Etapa 9: Desidratação - remoção da água dos tecidos por meio de álcool ou acetona.
Etapa 10: Montagem - torna a lâmina permanente por meio de entelan, permount ou bálsamo do Canadá
Porque se faz necessária a etapa de clarificação durante a preparação de amostras? Como funciona essa etapa?
Após o processo de desidratação, é necessário substituir o álcool contido no tecido, para isso, é utilizado um solvente geralmente orgânico, como o xilol e o toluol (anfifílicos), que são miscíveis tanto em etanol como no meio de inclusão (parafina).
Quando os fragmentos de tecido são embebidos no solvente eles se tornam translúcidos e depois, quando mergulhados na parafina derretida, o solvente evapora e dá lugar para a parafina.
Diferencie a coloração histológica da histoquímica.
Na coloração histológica, faz- se uso dos corantes para se evidenciar a morfologia da amostra, já na coloração histoquímica o corante evidencia as estruturas por meio da caracterização química dos componentes da amostra.
Dê um exemplo de coloração histoquímica.
Utilização do PAS (ácido periódico-schiff) para identificar o glicogênio presente no fígado. A combinação do PAS e estruturas ricas em açúcar gera uma reação quimica cujo produto possui coloração magenta/roxo.
Qual a principal técnica de coloração histologica? Explique seu funcionamento.
Coloração HE que utiliza a combinação hematoxilina e eosina. A hematoxilina (corante básico) identifica estruturas de caráter ácido (basófilas) como o núcleo, acidos nucleicos e o RER. Já a eosina (corante ácido) identifica estruturas de caráter básico (acidófilas/eosinófilas) como o citoplasma e as fibras de colágeno.
O que são artefatos técnicos? Exemplifique.
São alterações das imagens quando as amostras são observadas ao microscópio. Exemplos são as dobras, os fios, a autólise, a separação, o rasgo e a presença de bolhas.
Quais são as causas dos artefatos técnicos?
Acontecimentos na manipulação física ou química durante as etapas da técnica histologica, como dentes na navalha de corte, talco na luva, precipitado de corantes, retração ou entumescimento tecidual.
Quais os dois tipos de microscopia eletrônica? Explique seu funcionamento
O microscópio eletrônico de transmissão (MET) é composto por uma fonte geradora de elétrons que caminha por um sistema de lentes eletromagnéticas dispostas em coluna. Os elétrons têm que interagir com o objeto para formar a imagem em uma tela fluorescente, para isso, o objeto deve ser extremamente fino para permitir a passagem dos elétrons. O poder de resolução do MET é bem maior que o do microscópio óptico (maior 2000 vezes), o que permite maior profundidade de foco (só é possível visualizar organelas com MET).
O microscópio eletrônico de varredura (MEV) é um aparelho mais simples, menor e mais barato, que permite a obtenção de imagens tridimensionais dos materiais em estudo. Os feixes de elétrons atuam sobre a superfície do material. A amostra é muitas vezes recoberta com metais pesados (como urânio e chumbo) para aumentar o poder dispersante das estruturas e com isso a resolução.
O que são as regiões elétron densas e elétron lucentes visualizadas na microscopia eletrônica de transmissão?
As regiões elétron-densas trata-se das estruturas que desviam os elétrons, aparecendo escuras na
imagem, já que os elétrons não chegam até a tela fluorescente. Já as regiões elétron-lucentes
trata-se das estruturas que são atravessadas pelos elétrons, aparecendo claras na imagem, pois os
elétrons que incidiram sobre a estrutura conseguem excitar a tela fluorescente ou o filme
fotográfico que fica abaixo do corte.
Sobre a microscopia de luz, defina: campo claro, contraste em fase e fluorescência.
MICROSCOPIA DE LUZ:
*Campo claro: permite visualizar tecidos que foram fixados e corados(distinção de estruturas)
*Contraste de fase: visualização de células e tecidos vivos que não foram corados (pequenas diferenças de difração de luz)
*Fluorescência: utiliza-se de anticorpos conjugados com compostos fluorescentes. Baseia-se na reação antígeno-anticorpo.
