métodos de detección de virus Flashcards
tipos de diagnóstico virológico
clínico (permite sospechar) y de laboratorio (confirmación de la sospecha diagnóstica)
tipo de muestra de una infección respiratoria
células de nasofaringe
tipo de muestra de una infección gastrointestinal
deposiciones o biopsia intestinal
tipo de muestra de una infección sistémica
sangre
tipo de muestra en una hepatitis
sangre y deposiciones
tipo de muestra en un exantema
células basales, biopsia, sangre
donde se obtiene la mejor muestra de virus?
donde el virus está replicando
como se transporta un virus?
a 4 grados en transporte adecuado respetando las normas de bioseguridad, sin congelar y descongelar pq arruina las proteínas que estamos buscando
cuales son los dos componentes principales del virus que tenemos que identificar?
acido nucleico: adn o arn
antígenos: estructurales o no estructurales
que busco en una enfermedad viral de corto tiempo de incubación?
particulas virales o antigenos
que busco en una enfermedad viral de largo tiempo de incubación?
IgM, si encuentro igG es pq ya la tuvo
con que estudio de identifican los agentes virales completos en una infección
microscopía electrónica y aislamiento viral
con que estudio de identifican los componentes virales en una infección
antígenos: inmunoanálisis
genoma: métodos moleculares
con que estudio de identifica la respuesta inmune en una infección
serología
características microscopía electrónica
se ve directamente el virus
requiere de una gran cantidad de partículas
limitada sensibilidad
características aislamiento viral
agarrai la muestra y la metes en un tipo de linea celular susceptible al virus que se sospecha, luego se espera a que las celulas muestren efectos citopáticos
ventaja del aislamiento viral
se confirma la presencia de virus
desventajas del aislamiento viral
- se puede demorar
- pueden haber coinfecciones con efectos citopáticos parecidos que no podamos diferenciar
- no hay lineas celulares para todos los virus
- es caro
tipos de técnicas de inmunoanálisis para componentes virales
inmunofluorescencia, ELISA, mono cromatografía, aglutinación, etc.
características generales del inmunoanálisis
dos métodos: directo e indirecto
- método directo: se le mete a la muestra un anticuerpo marcado para el antígeno del virus que estoy buscando y miro si se produce la interacción
- método indirecto: le meto un anticuerpo a la muestra y un anti anticuerpo marcado que se une al anticuerpo
características de la inmunofluorescencia directa
se toma la muestra, se le mete el anticuerpo y luego un anti anticuerpo que es un cromófobo
se busca si brilla en un microscópio de fluoresencia
características del ELISA directo
- se tiene un pocillo con anticuerpo de captura para el antígeno que estoy buscando
- meto la muestra al pocillo
- le meto el anticuerpo enzimático (pq este método se basa en enzimas)
- le meto un sustrato para la enzima
- el complejo sustrato enzima genera un color
características del ELISA indirecto
pocillo con anticuerpo de captura -> muestra -> anticuerpo primario -> anticuerpo secundario con enzima -> sustrato -> interacción -> color
características de la inumocromatografía
pocillo con anticuerpos en una membrana de nitrocelulosa
se pone la muestra y los antigenos migran, si se encuentran con un anticuerpo se activa una señal visible
necesita de un control
se demora 10-15%
util en contextos de alta prevalencia
características del ensayo de VIH ags-acs
ensayo de test rápido que permite identificar tanto antígenos de un virus como anticuerpos en contra de el
técnicas de detección de genoma viral
amplificación en blanco
ENAC
amplificación de la señal
tipos de amplificación del blanco
para amplificación de DNA:
- PCR
- trascripción inversa PCR (RNA se convierte en DNA y luego se hace un pcr)
par amplificación de RNA:
- TMA
que amplificación del genoma necesita cambios de temperatura?
la PCR
que amplificación del genoma no necesita cambios de temperatura?
TMA, LAMP, etc
que permite hacer una PCR?
amplificación exponencial de una secuencia específica de DNA
cuales son los tres procesos de la PCR
denaturación
apareamiento
elongación
*se repite en muchos ciclos
que es la denaturación de la PCR
desnaturación por temperatura alta donde se separan las hebras de dna
que es el apareamiento de la PCR
donde los partidores (secuencias específicas que se unen solo a la parte del dna que nos interesa multiplicar) se unen a la parte del genoma de interés
que es la elongación de la PCR
amplificación de las copias de dna mediante los partidores
características PCR en tiempo real
PCR donde se ve de forma exponencial el producto amplificado
características TMA
proceso donde se pasa el RNA de lo que estamos buscando a un DNA por una trascriptasa reversa, para luego hacer una transcripción y aumentar la cantidad de RNA
