Metodos

Question 1

ESPECTROFOTOMETRIA

Answer 1

Mede a luz que passa de acordo com a [] amostra
Calibração Fator de calibração = [] / absorvância
Leitura valor da amostra x FC

Question 2

ESPECTROFOTOMETRIA tipos

Answer 2

Colorimétrico - Intensidade de cor da reagente+amostra comparada com o branco

Cinético - o analito é uma enzima. Sua conversão e o produto é gerado, gera mudança de cor, medido

Cinético Enzimático (maior especificidade, elimina interferência) - O analito sofrerá ação da enzima 1 e depois da 2, gera um produto que muda a cor

Question 3

FOTOMETRIA DE REFLECTÂNCIA

Answer 3

Luz refletida por uma substância colorida

Reagente em multicamada > quando passa ocorre reações que incide luz > luz vira voltagem

Química seca - IDEAL

Question 4

ESPECTROMETRIA DE EMISSÃO ATÔMICA

Answer 4

Radiação emitida por átomo excitados

Intensidade da cor é proporcional a []

Usado para Li, Na e K

Question 5

ESPECTROMETRIA DE ABSORÇÃO ATÔMICA

Answer 5

Temperatura muito alta
Radiação UV liberada com salto quântico > emite luz ao voltar
Mede comprimento de onda

• Mede a Absorção da radiação por átomos livres no estado gasoso
• Al, Ca, Pb, Mg, Mn e outros metais

Question 6

TÉCNICAS ELETROQUÍMICAS

Answer 6

• Íon seletivo
• potenciometria,
• Voltametria
• Amperometria
• Conductometria
• Coulometria
• biosensores

Question 7

POTENCIOMETRIA E ÍON-SELETIVO

Answer 7

Converte ativ de íon em potencial

Medir pH, pCO2 e eletrólitos

Eletrodo de referencia e o indicador

Question 8

VOLTAMETRIA E AMPEROMETRIA

Answer 8

Medem a diferença de potencial elétrico , usando uma célula eletroquímica que determina voltagem é aplicada.

Medida de Po2, íons

Question 9

TÉCNICAS FÍSICAS/MECÂNICAS

Answer 9

• Eletroforese
• Cromatografia
• Espectrometria de massas

Question 10

ELETROFORESE

Answer 10

Migração dentro de um líquido sob a influência de um campo elétrico.

Se movem em direção ao cátodo ou anodo.

As partículas são coradas com corante proteína específico

Zonas são quantificadas por densitometria

Zonal – migração em um suporte poroso de gel de agarose produzem zonas de proteínas, que são heterogêneas e fisicamente separadas uma das outras

Question 11

ELETROFORESE CAPILAR

Answer 11

Amostra muito pequena (1 a 50nl)
Mais rápido
Mais caro
Escolha do tampão é critica
Tubo de sílica

Question 12

CROMATOGRAFIA

Answer 12

Mais cara
Bomba leva a uma coluna que separa análitos e computador transforma em valores
Separa moléculas grande (meio liquido) de pequena (meio gasoso)

Question 13

ESPECTROMETRIA DE MASSAS

Answer 13

Mede a razão massa-carga
Emergente na proteômica

Question 14

TESTES SOROLÓGICOS

Answer 14

Objetivo: pesquisa de antígenos ou anticorpos
em sangue (soro), saliva, líquidos corpóreos

• Afinidade: Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac
• Avidez: Força de interações total univalente ou multivalente

A Pesquisa sorológica Reagente nem sempre significa doença&raquo_space; reações cruzadas: falso-positivos

Question 15

MÉTODOS DE DETECÇÃO DAS LIGAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

Answer 15

• Aglutinação
• Precipitação
• Imunoensaios marcados + sensíveis
- Imunofluorescência
- Imunoensaios enzimáticos: ELISA, MEIA, ELFA
- Quimiluminescência
- Western blot
- Testes rápidos

Question 16

AGLUTINAÇÃO

Answer 16

•Direta: O Antígeno é adsorvido a superfície da partícula
•Indireta: pesquisa o Ac circulante

•Qualitativas ou semi-quantitativas (Previne pré e pós zona)
•Imunocomplexos vistos a olho nu
•Não diferencia Imunoglobulinas

Question 17

Precipitação

Answer 17

Formação de imunocomplexos
• insolúveis

Precipitado insolúvel
• turbidimetria • nefelometria

Question 18

Turbidimetria

Answer 18

mede a diminuição da intensidade da luz transmitida quando passa pela reação. O sensor de medida encontra-se na mesma linha 180 graus

excesso de antígeno e os efeitos da matriz são limitações

Question 19

Nefelometria

Answer 19

mede a luz dispersa. Sensores entre 30 a 90 graus em relação a reação. Mais sensível, fonte de luz mais intensa (laser monocromático).

excesso de antígeno e os efeitos da matriz são limitações

Question 20

IMUNODIFUSÃO RADIAL

Question 21

IMUNOENSAIOS MARCADOS

Answer 21

Ac monoclonal (marcado) e permite quantificar a reação

FASE SÓLIDA: PORÇÃO FIXA DOS MÉTODOS, QUE PODE SER: VIDRO, CELULOSE, PLÁSTICO, ETC ONDE OS AG OU AC SÃO FIXADOS

Question 22

MÉTODOS: ELISA, MEIA, ELFA, QUIMIOLUMINESCÊNCIA

Answer 22

• - Detecta IgG ou IgM; hormônios, vitaminas, marcadores tumorais
• - Qualitativa ou quantitativa
• - Sensibilidade com melhora progressiva
• - Automatizado

Question 23

QUIMIOLUMINESCÊNCIA

Answer 23

Os elétrons de um átomo emitem luz após receberem energia e saltar

Utilizam-se de anticorpos ligados a um marcador luminescente (cromógeno)
• Ex.: São ensaios ultrassensíveis

Question 24

ELETROQUIMIOLUMINESCÊNCIA

Answer 24

• Aplicação de voltagem na presença de um luminóforo em presença da TPA que induz a emissão de quimioluminescencia , medida por um fotomultiplicador.
• Reagente mais estável e preparação mais simples

Question 25

Imunofluorescência direta (IFD):

Answer 25

localização de antígenos em células ou tecidos.Anticorpo específico, marcado com fluorocromo

Aplicações:
- Detecção direta de microrganismos (secreções, urina, cortes de tecidos);
- Identificação de subpopulações de linfócitos;
- Fenotipagem de células tumorais

Question 26

IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)

Answer 26

LOCALIZAÇÃO DE ANTICORPOS EM SORO. ANTI IMUNOGLOBULINA HUMANA MARCADO COM FLUOROCROMO

Não automatizada
Exige pessoal treinado para leitura da reação.
Necessita microscópio apropriado, de fluorescência
Título: expresso como o inverso da última diluição de soro que apresentou reação positiva

Question 27

DOT-ELISA

Answer 27

• Qualitativo
• Detecção de IgG ou IgM
• Não exige aparelhagem
• Usa como fase sólida nitrocelulose
• Onde a leitura é feita visualmente

Question 28

Western blot

Answer 28

•Detecta anticorpos
•É muito específico
•Variações da técnica são: imunoblot (RIBA- recombinant immunoblot assay)

•membrana de nitrocelulose (“blotting”)
•Permite identificar as frações do antígeno que é reconhecida pelo anticorpo do paciente revelado com anti-Ig humana marcada com enzima

Não reagente: ausência de bandas;
Reagente: presença de no mínimo duas bandas gp160/120, gp41 e p24; Amostra indeterminada: qualquer outro padrão

Question 29

Citometria de fluxo

Answer 29

• Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo específico
• As células são então analisadas no citômetro de fluxo

Question 30

TESTE ÁCIDO NUCLEICO – NAT

Question 31

BIOSSENSORES

Answer 31

Sensorquímico específico que tem elemento de reconhecimento biológico, que detecta presença, atividade ou concentração de um determinado analito (covid teste rápido, glicosimetro, bafômetro, oximetria, )

• PROBLEMA: O controle externo de qualidade não bem sistematizado. Ex.: pesquise a concordância de saturímetro de pulso com gasometria arterial

mede pH, gases sanguíneos e eletrólitos pela passagem da luz