Méthodes d'étude Flashcards
def tissus et les nommer
ensemble coopératif de cellules + MEC (SF + fibres)
il y a 5 tissus fondamentaux:
1) épithéliums de revêtement et glandulaires
2) tissus conjonctifs et squelettiques
3) cellules sanguines et hématopoïétiques
4) tissus musculaires
5) tissus nerveux
organes
organe = ensemble de tissus
regroupement des organes en appareils et en systèmes:
-appareil cardio-vasculaire
-système immunitaire
-appareil respiratoire
-appareil digestif
-système nerveux
-système endocrinien
-appareil urinaire
-appareil tégumentaire
-organes des sens
taille cellule
5 à 20μm
pouvoir séparateur
distance la plus petite entre 2 points vus séparément
-oeil: 0,2mm
-MO: 0,2μm
-ME : 0,2nm
quelle technique pour description morphologique des structures biologiques?
-MO : source lumineuse = faisceau de photons
-ME : source lumineause = faisceau d’électrons
étapes de la préparation des échantillons pour examen en MO
1) fixation
2) inclusion
3) coupe = microtomie
4) coloration
5) montage
fixation en MO
! donner les fixateurs
-pour préserver les structures biologiques
-le + rapidement après EXERESE
-petits blocs d’organes immergés dans un grand volume de liquide fixateur
–> fixateurs: acide acétique - méthanol/paraformaldéhyde/liquide de Bouin (formol + acide acétique) (! fluorescence)
inclusion en MO
-pour durcir l’échantillon pr qu’on le coupe
-après DESHYDRATATION dans des BAINS D’ALCOOL DE DEGRE CROISSANT ou de TOLUENE
-dans de la RESINE FOUDUE A 56° (parfois résines plastiques ou congélation dans N2L)
coupe
=microtomie
-coupes fines : 2 à 3 μm
-avec un MICROTOME (avance mécanique et couteau en acier)
-déposées et collées sur des lames de verre
-coupes en congélation avec un CRYOSTAT
coloration en MO
-pour augmenter les contrastes et faire apparître les différents composants
-après DEPARAFFINAGE (par la CHALEUR et des BAINS DE TOLUENE)
-et REHYDRATATION (BAIN D’ALCOOL DE DEGRE CROISSANT et EAU DISTILLEE)
montage
-après coloration puis DESHYDRATATION (BAIN D’ALCOOL DE DEGRE CROISSANT puis de TOLUENE)
-coupes montées entre lame et lamelles
-avec milieu de montage (RESINE SYNTHETIQUE) (indice de réfraction voisin de celui du verre)
colorants en phase aqueuse les + utilisés
-colorants acides ou basiques
-Hématéine-Eosine (HE)
-Hématéine-Eosine-Safren (HES)
-Trichrome de Masson
-May Grünwald Giemsa
colorants acide et basique
fixation des colorants quite à la reconnaissance de structures particulières
-colorant basique acidophile: fixation au niveau des noyaux où se trouve l’ADN
-colorant acide basophile: fixation au nv du cytoplasme où se trouve des strcutures plutôt basiques
hématéine-éosine-safran
hématéine: colorant basique qui colore noyaux en violet
éosine: colorant acide qui colore cytoplasme en rose
safran: colore fibre de collagène en jaune
trichrome de masson
-HEMATOXYLINE: noyaux en brun
-FUCHSINE ACIDE: cytoplasme en rouge
-VERT LUMIERE : fibres de collagène en vert
quelle coloration pour les cellules sanguines?
May Grünwald Giemsa
fibres de collagène en jaune
safran
noyaux en brun
hématoxyline (trichrome de masson)
cytoplasme en rouge
fuchsine acide (trichrome de Masson)
fibres de collagène en vert
vert lumière (trichrome de Masson)
noyaux en violet
hématéine (colorant basique)
cytoplasme en rose
éosine (colorant acide)
composés du MO standard
__partie mécanique avec
-potence
-tube optique
-platine
__source de lumière photonique
__partie optique avec
-oculaire
-objectif
-condenseur
les 2 types de MO et leur diff
-à contraste de phase:
met en évidence les différents indices de réfraction
en révélant des différences de phases de la lumière
cellules vivantes même non colorées
-à flurorescence:
source lumineuse avec une sélection de la longueur d’onde d’excitation
et filtres pour sélection de la longueur d’onde d’émission
étapes de la préparation des échantillons du MET
-fixation
-inclusion
-coupe
-contraste
fixation MET
fixation: glutaraldéhyde dans du tampon cacodylate (ou phosphate)
post-fixation: acide osmique (tétroxyde d’osmium = OsO4
inclusion MET
-après déshydratation (bains d’alcool de degré croissant puis d’oxyde de propylène)
-dans des résins synthétiques (Epon ou Araldite)
coupe MET
-coupes ultrafines (50 à 80 nm)
-avec un ultramicrotome (avance thermique, couteau en diamant)
-déposées sur des grilles de cuivre
contraste MET
-acétate d’uranyle (pour noyau, nucléole et ribosomes)
-citrate de plomb (pour les mb)
fonctionnement MEB
-source de rayonnement = filament qui génère des électrons
-lentilles = solénoïdes générant un champ électrique
-receuil des électrons réfléchis par le préparation
-fonctionne sous vide
-résolution supérieure car l des électrons inférieure
étapes préparation echantillons MEB
fixation
déshydratation
métallisation de toutes les surfaces de l’échantillon
fixation MEB
-fixation: glutaraldéhyde dans du tampon cacodylate ou phosphate
-pas de post-fixation
déshydratation MEB
-par des bains d’alcool de degré croissant puis de CO2 liquide
-et par passage au point critique du CO2 (température: 32°C); pression : 73 atm)
–> dessication par lyophilisation
métallisation de toutes les surfaces de l’échantillon
dépôt d’une couche fine (10nm) d’or-palladium
études in situ des constituants biochimiques
-histochimie
-histoenzymologie
histochimie
déceler et localiser sur préparations histologiques les constituants biochimiques, à partir de réactions chimiques mettant en évidence des fonctions ou des groupements
les 2 exemples histochimie
1) glucides et l’acide périodique de Schiff
1 er temps: oxydation gpt glycol par acide périodique –> formation d’aldéhydes
2 eme temps: révélation des aldéhydes par le réactif de Schiff = coloration ROUGE POURPRE
2) ADN et réaction de Feulgen-Rossenbeck
1: hydrolyse de l’ADN –> mise en évidence des aldéhydes du désoxyribose
2: révélation des aldéhydes par le récatif de Schiff = coloration ROUGE POURPRE
principe histoenzymologie
appliquée à la cellule vivante OU COUPE A LA CONGELATION
1e temps: incubation des cell vivantes/ coupes à la congélation en présence du substrat
2e temps: révélation du produit de la réaction enzymatique sur le substrat
exemples histoenzymologie
1) activité estérases
-la calcéine AM, substrat non fluorescent, traverse le mb cell
-ds cytoplame des cell vivantes elle est estérifiée en calcéine
-la calcéine est fluorescente et ne traverse pas les membranes cellulaires
2) activité des péroxydases (marquage granulocyte éosinophile)
-la péroxydase en présence d’eau oxygénée oxyde la diaminobenzidine (DAB) –> précipité brun noir
3) activité ATPasique (caractérisation du type contractile des CMStSq) (sur coupes à congélation)
…
Les CMstSq lentes = noires et les rapides = beige
