Méthodes d'étude

Question 1

def tissus et les nommer

Answer 1

ensemble coopératif de cellules + MEC (SF + fibres)
il y a 5 tissus fondamentaux:
1) épithéliums de revêtement et glandulaires
2) tissus conjonctifs et squelettiques
3) cellules sanguines et hématopoïétiques
4) tissus musculaires
5) tissus nerveux

Question 2

organes

Answer 2

organe = ensemble de tissus
regroupement des organes en appareils et en systèmes:
-appareil cardio-vasculaire
-système immunitaire
-appareil respiratoire
-appareil digestif
-système nerveux
-système endocrinien
-appareil urinaire
-appareil tégumentaire
-organes des sens

Question 3

taille cellule

Answer 3

5 à 20μm

Question 4

pouvoir séparateur

Answer 4

distance la plus petite entre 2 points vus séparément
-oeil: 0,2mm
-MO: 0,2μm
-ME : 0,2nm

Question 5

quelle technique pour description morphologique des structures biologiques?

Answer 5

-MO : source lumineuse = faisceau de photons
-ME : source lumineause = faisceau d’électrons

Question 6

étapes de la préparation des échantillons pour examen en MO

Answer 6

1) fixation
2) inclusion
3) coupe = microtomie
4) coloration
5) montage

Question 7

fixation en MO
! donner les fixateurs

Answer 7

-pour préserver les structures biologiques
-le + rapidement après EXERESE
-petits blocs d’organes immergés dans un grand volume de liquide fixateur
–> fixateurs: acide acétique - méthanol/paraformaldéhyde/liquide de Bouin (formol + acide acétique) (! fluorescence)

Question 8

inclusion en MO

Answer 8

-pour durcir l’échantillon pr qu’on le coupe
-après DESHYDRATATION dans des BAINS D’ALCOOL DE DEGRE CROISSANT ou de TOLUENE
-dans de la RESINE FOUDUE A 56° (parfois résines plastiques ou congélation dans N2L)

Question 9

coupe

Answer 9

=microtomie
-coupes fines : 2 à 3 μm
-avec un MICROTOME (avance mécanique et couteau en acier)
-déposées et collées sur des lames de verre
-coupes en congélation avec un CRYOSTAT

Question 10

coloration en MO

Answer 10

-pour augmenter les contrastes et faire apparître les différents composants
-après DEPARAFFINAGE (par la CHALEUR et des BAINS DE TOLUENE)
-et REHYDRATATION (BAIN D’ALCOOL DE DEGRE CROISSANT et EAU DISTILLEE)

Question 11

montage

Answer 11

-après coloration puis DESHYDRATATION (BAIN D’ALCOOL DE DEGRE CROISSANT puis de TOLUENE)
-coupes montées entre lame et lamelles
-avec milieu de montage (RESINE SYNTHETIQUE) (indice de réfraction voisin de celui du verre)

Question 12

colorants en phase aqueuse les + utilisés

Answer 12

-colorants acides ou basiques
-Hématéine-Eosine (HE)
-Hématéine-Eosine-Safren (HES)
-Trichrome de Masson
-May Grünwald Giemsa

Question 13

colorants acide et basique

Answer 13

fixation des colorants quite à la reconnaissance de structures particulières
-colorant basique acidophile: fixation au niveau des noyaux où se trouve l’ADN
-colorant acide basophile: fixation au nv du cytoplasme où se trouve des strcutures plutôt basiques

Question 14

hématéine-éosine-safran

Answer 14

hématéine: colorant basique qui colore noyaux en violet
éosine: colorant acide qui colore cytoplasme en rose
safran: colore fibre de collagène en jaune

Question 15

trichrome de masson

Answer 15

-HEMATOXYLINE: noyaux en brun
-FUCHSINE ACIDE: cytoplasme en rouge
-VERT LUMIERE : fibres de collagène en vert

Question 16

quelle coloration pour les cellules sanguines?

Answer 16

May Grünwald Giemsa

Question 17

fibres de collagène en jaune

Answer 17

safran

Question 18

noyaux en brun

Answer 18

hématoxyline (trichrome de masson)

Question 19

cytoplasme en rouge

Answer 19

fuchsine acide (trichrome de Masson)

Question 20

fibres de collagène en vert

Answer 20

vert lumière (trichrome de Masson)

Question 21

noyaux en violet

Answer 21

hématéine (colorant basique)

Question 22

cytoplasme en rose

Answer 22

éosine (colorant acide)

Question 23

composés du MO standard

Answer 23

__partie mécanique avec
-potence
-tube optique
-platine
__source de lumière photonique
__partie optique avec
-oculaire
-objectif
-condenseur

Question 24

les 2 types de MO et leur diff

Answer 24

-à contraste de phase:
met en évidence les différents indices de réfraction
en révélant des différences de phases de la lumière
cellules vivantes même non colorées

-à flurorescence:
source lumineuse avec une sélection de la longueur d’onde d’excitation
et filtres pour sélection de la longueur d’onde d’émission

Question 25

étapes de la préparation des échantillons du MET

Answer 25

-fixation
-inclusion
-coupe
-contraste

Question 26

fixation MET

Answer 26

fixation: glutaraldéhyde dans du tampon cacodylate (ou phosphate)
post-fixation: acide osmique (tétroxyde d’osmium = OsO4

Question 27

inclusion MET

Answer 27

-après déshydratation (bains d’alcool de degré croissant puis d’oxyde de propylène)
-dans des résins synthétiques (Epon ou Araldite)

Question 28

coupe MET

Answer 28

-coupes ultrafines (50 à 80 nm)
-avec un ultramicrotome (avance thermique, couteau en diamant)
-déposées sur des grilles de cuivre

Question 29

contraste MET

Answer 29

-acétate d’uranyle (pour noyau, nucléole et ribosomes)
-citrate de plomb (pour les mb)

Question 30

fonctionnement MEB

Answer 30

-source de rayonnement = filament qui génère des électrons
-lentilles = solénoïdes générant un champ électrique
-receuil des électrons réfléchis par le préparation
-fonctionne sous vide
-résolution supérieure car l des électrons inférieure

Question 31

étapes préparation echantillons MEB

Answer 31

fixation
déshydratation
métallisation de toutes les surfaces de l’échantillon

Question 32

fixation MEB

Answer 32

-fixation: glutaraldéhyde dans du tampon cacodylate ou phosphate
-pas de post-fixation

Question 33

déshydratation MEB

Answer 33

-par des bains d’alcool de degré croissant puis de CO2 liquide
-et par passage au point critique du CO2 (température: 32°C); pression : 73 atm)

–> dessication par lyophilisation

Question 34

métallisation de toutes les surfaces de l’échantillon

Answer 34

dépôt d’une couche fine (10nm) d’or-palladium

Question 35

études in situ des constituants biochimiques

Answer 35

-histochimie
-histoenzymologie

Question 36

histochimie

Answer 36

déceler et localiser sur préparations histologiques les constituants biochimiques, à partir de réactions chimiques mettant en évidence des fonctions ou des groupements

Question 37

les 2 exemples histochimie

Answer 37

1) glucides et l’acide périodique de Schiff
1 er temps: oxydation gpt glycol par acide périodique –> formation d’aldéhydes
2 eme temps: révélation des aldéhydes par le réactif de Schiff = coloration ROUGE POURPRE

2) ADN et réaction de Feulgen-Rossenbeck
1: hydrolyse de l’ADN –> mise en évidence des aldéhydes du désoxyribose
2: révélation des aldéhydes par le récatif de Schiff = coloration ROUGE POURPRE

Question 38

principe histoenzymologie

Answer 38

appliquée à la cellule vivante OU COUPE A LA CONGELATION
1e temps: incubation des cell vivantes/ coupes à la congélation en présence du substrat
2e temps: révélation du produit de la réaction enzymatique sur le substrat

Question 39

exemples histoenzymologie

Answer 39

1) activité estérases
-la calcéine AM, substrat non fluorescent, traverse le mb cell
-ds cytoplame des cell vivantes elle est estérifiée en calcéine
-la calcéine est fluorescente et ne traverse pas les membranes cellulaires

2) activité des péroxydases (marquage granulocyte éosinophile)
-la péroxydase en présence d’eau oxygénée oxyde la diaminobenzidine (DAB) –> précipité brun noir

3) activité ATPasique (caractérisation du type contractile des CMStSq) (sur coupes à congélation)
…
Les CMstSq lentes = noires et les rapides = beige