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L3 - Immunologie Appliquée > Méthodes > Flashcards

Méthodes Flashcards

1
Q

Comment choisit-on les animaux dans lesquels nous allons produire les anticorps ?

A

L’animal doit être jeune, en bonne santé, d’une espèce différente de l’antigène. On fait aussi attention à la facilité d’entretien.

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2
Q

Avec quels espèces est-ce qu’on a une formation améliorés d’hybrides pour les anticorps monoclonaux ?

A

Pour les rats et les souris.

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3
Q

Quelle est la fréquence des injections visant à produire des anticorps ?

A

Pour la primo infection c’est de l’ordre d’une par jour. Pour le rappel c’est au minimum un mois plus tard.

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4
Q

Plus la taille de l’antigène est grosse, plus…

A

L’immunogénicité est forte

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5
Q

Plus la dose est extrême, plus…

A

L’immunogénicité est faible

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6
Q

Si le mode d’administration est sous cutané, …

A

L’immunogénicité est forte

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7
Q

Plus l’antigène est complexe…

A

Plus l’immunogénicité est forte.

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8
Q

Plus la forme de l’antigène est particulaire ou dénaturée, plus…

A

L’immunogénicité est forte.

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9
Q

Si on a un relarguage lent de l’antigène et une présence de PAMP, alors plus…

A

L’immunogénicité est forte.

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10
Q

Comment sont produits les anticorps onoclonaux ?

A

On fusionne des cellules spléniques de souris immunisées contre l’antigène avec un myélome non sécrétant. Sélection des hybrides par milieu HAT puis clonage.

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11
Q

Quels avantages des anticorps monoclonaux ?

A

Les anticorps sont identiques, donc reproductibilité et standardisation.

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12
Q

Quel avantage des anticorps polyclonaux ?

A

C’est un mélange de molécules d’affinité et spécificité diverses donc les conditions sous lesquelles il y a activité seront plus flexibles.

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13
Q

Donner deux méthodes pour purifier des anticorps.

A

Chromato d’affinité ou billes couplées à des protéines A ou G.

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14
Q

Quelles sont les trois zones définies par les quantités respectives d’anticorps et d’antigènes?

A

La zone d’équivalence, la zone d’excès d’Ag et celle d’excès d’Ac.

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15
Q

Que nécessite la zone d’équivlaence ?

A

L’Ac et l’Ag doivent être bivalents, donc avoir plusieurs épitopes.

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16
Q

Quelle est la différence de concept entre Ouchterlony et Mancini ?

A

Ouchterlony est un test qualitatif alors que Mancini est quantitatif.

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17
Q

Qu’est-ce que l’héglutination ?

A

Un test d’agglutination des globules rouges pour détecter ou doser des anticorps.

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18
Q

Quels sont les deux types d’hémagluttination ?

A

Directe et indirecte (2 anticorps).

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19
Q

Qu’est-ce que le test de coombs ?

A

C’est un test permettant de mettre en évidence la présence d’un Ac lié sur les globules rouges à l’aide d’une antiglobine. Permet de détecter certaines maladies.

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20
Q

Comment est-ce que l’hémagluttination arrive à mettre en évidence certaines infections ?

A

Certains virus se lient directement aux globules rouges et les agglutinent : si on balance des Ac Antiviraux on a une désagluttination.

21
Q

Quelles sont les trois zones sur une colonnes d’immunochromato ?

A

Zone du dépôt de l’Ag, ou on ajoute un Ac spécifique soluble
Zone test, ou l’Ag est retenu par un anticorps spécifique fixé sur al membrane.
Zone témoin : capture l’excédent par un Ac secondaire anti Ac-soluble.

22
Q

Rappeler les 4 étapes d’un Western.

A

Séparation des protéines sur un champ électrique.
Transfert sur une membrane inerte.
Mise en contact avec un anticorps marqué.
Utilisation d’un substrat chromogène.

23
Q

Quelle solution est utilisées couramment pour séparer les cellules de différentes densités (en partiulier monocytes et lymphocytes)

A

Le Ficoll

24
Q

Qu’est-ce que le tri magnétique ?

A

Des billes couplées à des anticorps spécifiques, magnétiques, sont balancés dans la solution de cellules : ces cellules peuvent ensuite être isolées

25
Q

Rappel : c’est quoi la prolif clonale ?

A

un LT CD4 est activé par une CD, puis fait expansion clonale et se différencie ou en Th ou en CD4 mémoire.

26
Q

Quels techniques permettent de mesurer la prolifération clonale ?

A

Mesure de l’incorporation de thymidine tritiée (radioactif), ou de nucléosides synthétiques analogues de la thymidines.

27
Q

Comment mesure-on la cytotoxicité ?

A

On marque les cellules par différents produites (chrome radioactif par exemple) et ensuite quand les cellules se font défoncer par les LT Cytotox, le produit radioactif se répand dans le milieu cellulaire et on peut le mesure.

28
Q

Quels produits sont utilisés pour marquer les cellules dans le but de faire une mesure de la cytotoxicité ?

A

Chrome radioactif
Calcéine
Beta Galactosidase
GAPDH endogène + luciférase.

29
Q

qu’est-ce qu’un ELISpot ?

A

Il s’agit d’un ELISA en deux dimensions permettant de quantifier les cellules produisant une cytokine particulières (en utilisant des plaques coatées avec la cytokine).
Permet aussi de quantifier les cellules spécifiques d’un antigène.

30
Q

Comment sont marquées les cellules lors des immunospots ?

A

Marquées par un point lumineux autour des cellules actives, peuvent avoir plusieurs couleurs différentes pour mieux différencier.

31
Q

Quel intérêt d’immunofluorescence par immuno-PCR ?

A

On arrive à détecter des éléments plus rares (100x plu s sensible que ELISA) par fluorescence.

32
Q

Rappeler le principe de la cytométrie de flux ?

A

Il s’agit d’une technique en faisant passer des cellules dans un laser en les comptant ou les caractérisant. On classe les cellules selon la lumière qu’elles réémettent. On peut ensuite éventuellement les trier.

33
Q

Quelles sont les trois caractéristiques mesurables par une cytométrie de flux ?

A

Taille, granulosité ou encore fluorescence.

34
Q

Quelle différence peut on remarquer entre une cytométrie en flux classique et capillaire ?

A

Classique : un liquide de gaine subit une accélération ce qui aligne les cellules. En capillaire y’a pas de liquidem, c’est moins couteux et plus rapide MAIS se bouche facilement.

35
Q

Par le biais de quel phénomène physique est-ce que la cytométrie donne des infos sur la morphologie des cellules ?

A

Grâce à la diffraction.

36
Q

Que fait un filtre Long Pass ?

A

•Le filtre Long Pass ne laisse passer que les longueurs d’onde supérieures à une longueur d’onde donnée

37
Q

Que fait un filtre Short Pass ?

A

Le filtre Short Pass ne laisse passer que les longueurs d’onde inférieures à une longueur d’onde donnée

38
Q

Que fait un filtre Band Pass ?

A

BLoque les longueurs d’ondes situées autour d’une certaine longueur d’onde

39
Q

Que fait un miroir dichroique ?

A

Réfléchit une partie de la lumière et transmet l’autre vers l’axe.

40
Q

Pour une cytométrie qu’indique la largeur d’un pic ?

A

Une idée de la dispersion

41
Q

Qu’est-ce que la fuite de fluorescence ?

A

C’est la part aspécifique du signal PE due à la fluorescence de FITC.

42
Q

Comment peut-on mesurer l’apoptose ?

A

Pendant l’apoptose les cellules présentent des phosphatidylsérines qui peuvent être reconnues pas l’Annexine 5 : on marque à l’annexine 5 et on analyse par cyto.

43
Q

Comment faire rentrer des fluorochromes DANS les cellules ?

A

On les neutralise pour les faire rentrer dans la membrane

44
Q

Quelle particularité a un marquage de CSFE?

A

Forme des liaisons très stable permettant un séjour très très prolongé dans les cellules marquées

45
Q

qu’est-ce que le marquage par CMH ?

A

On détecte des LT spécifique d’un CMH particulier en le marquant directement avec un complexe de 4 unités de CMH chargées de l’épitope d’intérêt. Très sensible

46
Q

Comment fonctionne le marquage cytométrique par billes (CBA) ?

A

On recouvre des billes de latex ou polystyrène d’Ac pour quantifier simultanément plusieurs protéines solubles. Les billes peuvent être dotées d’un fluorochrome interne.

47
Q

Quelle particularité à le système FlowCytoMix ?

A

Après l’incubation initiale des billes, on ajoute un Ac conjugué à de la biotine sur les billes et on quantifie avec de la streptavidin-PE.

48
Q

C’est quoi le système Luminex ?

A

un panel de 100 billes avec 2 lasers, plusieurs sondes pour détecter peptides, allèles ou anticorps.

L3 - Immunologie Appliquée (5 decks)

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