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Tests Biochimiques D'identification Des Bactéries > Métabolisme Des Glucides > Flashcards

Métabolisme Des Glucides Flashcards

1
Q

Nommer les 6 tests p/r au métabolisme des glucides

A
  1. O-F
  2. Dégradation des sucres complexes
  3. Production de gaz
  4. Kligler ou TSI
  5. MR-VP
  6. ONPG
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Q

But du test O-F

A

Vérifier la capacité d’une bactérie à dégrader le glucose dans des conditions d’aérobie ou d’anaérobie.

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Q

O-F
Caractéristiques du milieu

A
  • Glucose
  • indicateur de pH : bleu de bromothymol
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4
Q

O-F
Interprétation des résultats

A

I : deux tubes verts
O : oxy est jaune
F : deux tubes jaunes

Jaune = acide

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Q

Dégradation des sucres complexes
But?

A

Vérifier la capacité d’une bactérie à dégrader un glucide complexe.

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6
Q

Dégradation des sucres complexes
Milieu

A
  • glucide à tester ( glucose, lactose, sucrose, maltose, etc.)
  • indicateur de pH : bromocrésol pourpre
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7
Q

Dégradation des glucides complexes
Interprétation des résultats

A

Pourpre : pas de dégradation des glucides
Jaune (acide) : dégradation des glucides

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8
Q

Dégradation des glucides
Que faire pour bactéries plus exigeantes ( Neisseria, Streptocoque. Pneum. )?

A

Milieu plus nutritif : CTAC cystine, Trypticase Agar
Indicateur de pH : rouge de phénol

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9
Q

Dégradation des glucides
Principe

A
  • dépend du bagage enzymatique de la bactérie
  • PERMÉASES, situés dans la membrane cytoplasmique, qui agissent comme transporteurs des divers glucides vers l’intérieur de la bactérie
  • EXOENZYMES dégradent les molécules trop grosses (disacc, trisacc et polysacc) pour être transportées dans la bactérie telles qu’elles.
  • enzymes internes de la bactérie qui assurent la dégradation des glucides
  • le glucose est ensuite métabolisé par la glycolyse, puis le cycle de Krebs ou le processus de fermentation
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10
Q

Production de gaz
Méthode la plus sensible

A

Tube de Durham

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11
Q

Production de gaz par la dégradation du glucose avec tube Durham
Principe

A

-gaz produit reste emprisonnée dans la partie supérieure du tube inversée

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12
Q

Tests de dégradation de plusieurs glucides simultanément
Différence entre Kligler / TSI

A

Kligler : dégradation du glucose, lactose, production H2S et de gaz
TSI : dégradation du glucose, lactose et sucrose, production H2S et de gaz

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13
Q

TSI / Kligler (sans sucrose)
Milieu

A

Composition :
Lactose 1%
Sucrose 1%
Glucose 0.1%
Peptones
Indicateur de pH : rouge de phénol
Thiosulfate de Na

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14
Q

TSI / Kligler
Dégradation du glucose, du lactose et du sucrose
Interprétation des résultats

A

Rouge orangé : alcalin
Jaune : acide
a/n culot : glucose
a/n pente : lactose

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15
Q

TSI / Kligler
Production d’H2S
Principe et interprétation des résultats

A

Le soufre (S) est utilisé comme accepteur terminal d’H pour former du H2S.
Pour détecter la production d’H2S, le milieu doit contenir un substrat tels des a.a (cystine, cystéine, méthionine) ou sel organique (thiosulfate de Na). La substance qui met en évidence le H2S (fer dans citrate ferrique)
Les b ont besoin que le milieu soit acide pour produire H2S, donc si complètement noirci = milieu acidifié aussi

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16
Q

TSI / Kligler
Production de gaz
Interprétation des résultats

A

présence d’une simple bulle
production de fissure dans le milieu
déplacement d’une partie du milieu du fond vers le haut

17
Q

MR-VP
But

A

Vérifier jusqu’à quel point la fermentation se rend : produits acides ou neutres

18
Q

MR-VP
Principe

A

Les b capables de fermenter le glucose le dégrade d’abord en acide pyruvique. L’acide pyruvique en acides organiques (A lactique, acétique…), donc en produits acides.
Si b possède l’enzyme pour dégrader les acides organiques, l’acide acétique est converti en acétoine, donc en produits neutres.

19
Q

VP
Lecture du test

A

VP (après 24 h) : vérifier présence d’acétoine
Réactifs : a-naphtol et KOH
Jaune : négatif
Rouge : positif

20
Q

MR
Lecture test

A

MR (après 48 h) : Vérifier si la b est incapable de dégrader les acides organiques
Réactif : rouge de méthyle
Jaune (initiale) : négatif
Rouge : positif

21
Q

Test ONPG
But

A

Vérifier présence de l’activité enzymatique d la B-galactosidase

22
Q

Test ONPG
Principe
slm pour L-

A

2 enzymes requises
B-galactosidase perméase : permet l’entrée du lactose dans la cellule bactérienne
B-galactosidase : dégrade le lactose dans la cellule
L+ : 2 enzymes, dégrad rapide
L- : pas d’enzymes, donc pas dégrad
L- : pas de perméase, ce qui limite l’entrée du lactose et lente stimulaT de la B-galactosidase = LACTOSE LENT

Étapes
1. suspension b dans saline
2. lyse cellulaire avec xylène ou toluène
3. substrat chromogénique sur lequel b agit : ortho-nitrophényl-B-galactopyranoside (ONPG)

23
Q

ONPG
Interprétation des résultat

A

Incolore : négatif
Teinte jaune : positif

24
Q

Chaines respiratoires et voies alternatives
Oxydase (CR)
Catalase (VA)
Réduction des nitrates (VA)
BUTS

A

Oxydase : vérifier l’activité de la cytochrome c oxydase de la bactérie
Catalase : vérifier capacité de catalase (permet de débarrasser la cellule du H2O2 (toxique)
Réduction des nitrates : vérifier capacité de réducT nitrates afin d’utiliser l’oxygène qui est libéré, comme accepteur final d’électron et d’hydrogène (nitrates-nitrites-azote)

25
Q

Désaminase (TDA et PDA ou APP)
But

A

Vérifier la capacité de la b à produire des rx de désamination (enlever gr. amine d’une protéine)
La b doit être mis en présence d’un a.a puis cultivé

26
Q

Décarboxylases (ODC, LDC et ADH)
But

A

Vérifier la capacité de la b à produire rx décarboxylation
- ornithine décarboxylase
- lysine décarboxylase
- arginine décarboxylase

27
Q

Décarboxylases (ODC, LDC et ADH)
Conditions et milieu
Interprétation des résultats

A
  1. a.a dans le milieu
  2. milieu doit être acide (dégrad glucose)
  3. anaérobique (huile)
  4. tube témoin (sans a.a)
    Milieu
    - glucose
    - a.a à tester
    Résultats
    Pourpre (alcalin) : négatif
    Jaune (acide) : positif
    - indicateur de pH : bromocrésol pourpre
28
Q

Production d’indole
But

A

Vérifier la capacité de la b à produire de l’indole par l’action de tryptophanase sur le tryptophane

29
Q

Production d’indole
Principe

A

tryptophanase
Tryptophane - A pyruvique + indole + NH3
Milieu : bouillon à base de peptones, tryptophane, pH alcalin, pas glucose
Réactif : Kovac’s (alcool, HCl, paradimethylaminobenzaldéhyde)
HCl : scinde en deux la molécule d’indole et libère le noyau pyrrole
paradi… + noyau pyrrole = composé rouge
alcool : extrait et concentre le composé rouge à la surface du bouillon

30
Q

Production H2S
But

A

Vérifier la capacité de la b de produire du H2S en dégradant les a.a. contenant du soufre
Milieu : thiosulfate de Na et citrate ferrique
SS, XLD, Hecktoen et Kligler

31
Q

Uréase
But et milieu

A

Vérifier l’activité de l’uréase sur l’urée contenue dans un milieu de culture
Milieu :
- Urée
- indicateur de pH : rouge de phénol
Résultat : produits basiques = rose-rouge
Proteus dégrade rapdem° l’urée, d’autres plus lents
2 méthodes : Stuart (milieu + pauvre)
Christensen ( milieu + riche)

32
Q

Citrate de Na
But et milieu

A

Vérifier la capacité de la b à croitre sur un milieu contenant citrate de Na
Milieu :
- Simons Citrate agar : gélose inclinée
- Bleu de bromothymol (pH neutre = vert)
- Citrate de Na ( source de C)
- Phosphate d’ammonium
Principe
Test indirect : l’hydrolyse du phosphate produit du NH3 qui alcanlinise la pente.
b capable d’utiliser le citrate est capable d’utiliser le phosphate
Résultat
Vert : négatif
vert au bleu : positif

33
Q

Métabolisme des lipides
Lipase
But et milieu

A

Vérifier la capacité de la b d’hydrolyser des lipides en glycérol et acides gras
Résultat : gouttelettes autour des colonies

34
Q

Métabolisme des lipides
Lécithinase
But et milieu

A

Vérifier l’activité de la lécithinase sur la lécithine contenue dans un milieu gélosé
Milieu :
Lécithine (jaune d’oeuf), translucide
Si b produise de la lécithinase, la lécithine est dégradée et une zone opaque se forme autour de la colonie

35
Q

Mobilité
but et milieu TTC

A

Déterminer si une b est mobile
Milieu TTC (semi liquide avec 0.4% agar)
Ajout triphenyltetrazolium
sel incolore - réduit - pigment rouge insoluble
permet de voir déplacement de la b dans le milieu

36
Q

Mobilité
milieu tube de Craigie

A

Milieu (semi liquide avec 0.4% agar)
Résultat :
non mobile : b reste au point d’inoculaT à l’intérieur du petit tube
mobile : b migre et remonte à la surface de la gélose dans le grand tube

Tests Biochimiques D'identification Des Bactéries (8 decks)

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