Matériel biologique et techniques générales

Question 1

A partir de quoi peut on faire une extraction/purification ADN ?

Answer 1

• tissus
• cellules

Question 2

Comment se déroule l’extraction/purification ADN?

Answer 2

• lyse+ dénaturation
• extraction phénolique (recup phase dessus)
• traitements RNases/ DNases
• précipitation alcool
• purification spécifique (chromatographie)
• dosage spectrophotométrie

Question 3

Quelles machines pour verification pureter des AN?

Answer 3

• nanodrop
• qubit

Question 4

Quelle type de chromatographie peut-on faire pour la purification?

Answer 4

• chromatographie échangeuse d’ion
• chromatographie en gel d’agarose en présence de bromure d’ethidium

Question 5

Quel concentration d’agarose pour grands fragments? petits fragments?

Answer 5

• 0.7%
• 1.5%

Question 6

Quel est la différence en un gel d’agarose et d’acrylamide?

Answer 6

résolution plus important pour acrylamide et sépare de plus petite molécules

Question 7

Quelles types d’électrophorèse existe il ?

Answer 7

• gel d’agarose ou acrylamide
• champ pulsé
• analytique

Question 8

Sur quelle méthode est basé le séquencage de Sanger?

Answer 8

sur la synthèse d’ADN complémentaire d’une matrice à séquencer en présence de dNTP et d’une petite quantité de ddNTP

Question 9

Suite au séquencage Sanger que permet le séquencage automatique?

Answer 9

observation de la séquence nucléotidique grâce au marquage des amorces

Question 10

Quel est le nom de PCR?

Answer 10

polymerase chain reaction

Question 11

Combien y’a-t-il de cylce dans une PCR?

Answer 11

30 cycles à 35

Question 12

Comment choisir ses amorces?

Answer 12

• 20 nt
• Tm =
• 60% G
• pas de complémentarité
• distance entre les deux amorces compatible avec polymérase

Question 13

Qu’est ce que l’hybridation?

Answer 13

Basé sur le principe de complémentarité des bases nt entre ADN cible et un brin de séquence complémentaire (marqué par une sonde radioactive ou froide)

Question 14

QU’est ce que le Tm?

Answer 14

témpérature a laquelle la moitié de la molécule est dénaturée

Question 15

Quelles sont le stechniques d’hybridation ?

Answer 15

• southern blot
• dot blot

Question 16

qu’ets ce que la stringence ?

Answer 16

capacité à s’hybrider sur une séquence parfaitement complémentaire ou non

Question 17

Quels sont les types de marquages ?

Answer 17

• marquage par amorcage aléatoire
• marquage en 5’ par la T4 kinase
• marquage par déplacement de brèche

Question 18

Quel est le programme du thermocycleur pour PCR?

Answer 18

5 min 95°C dénaturation initiale
x30
- 1 min 95°C dénaturation
- 1 min 58°C hybridation
- 30 secondes 72°C élongation
5 minutes 72°C
infini 4°C