MANIPULACIÓN DE GENES. ANÁLISIS DE ÁC. NUCLEÍCOS: PCR, BLOT Y ELISA

Question 1

Pasos de extracción de DNA por técnica de fenol-cloroformo

Answer 1

Lisis de células y liberación de DNA
Extracción de proteínas y lípidos con solventes orgánicos
Precipitación de DNA
Lavado de DNA

Question 2

Lisis de eritrocitos se realiza con

Answer 2

Cloruro de amonio

Question 3

Lisis de membranas celulares y nucleares se realiza con

Answer 3

SDS (dodecilsufato sódico)

Question 4

La extracción de proteínas y lipidos se realiza con

Answer 4

Febol:cloroformo:alcohol isoamilico 25:24:1

Question 5

Fases de la extracción de proteínas y lipidos con solventes orgánicos

Answer 5

Fase orgánica: Fenol: lipidos, proteínas y de risa celulares.
Fase acuosa: ácidos nucléicos

Question 6

Precipitación de DNA se realiza con

Answer 6

Sol salina saturada
Etanol 100%

Question 7

Lavado de DNA se realiza con

Answer 7

Etanol 70%
Agua

Question 8

Cuantificación de DNA se hace con

Answer 8

Espectrofotometría o fluorometria.

Question 9

Espectrofotometría

Answer 9

Cualquier solución con moléculas suspendidas permite el paso de un haz de luz a través de ella en proporción inversa a la cantidad de moléculas que contiene.
Mientras más luz absorba mayor concentración.

Question 10

Absorción de RNA y DNA

Answer 10

260 nm

Question 11

Absorción de proteínas

Answer 11

280 nm

Question 12

Absorción de fenol

Answer 12

270 nm

Question 13

Fluorometría

Answer 13

Unión especifica de colorantes fluorescentes al ácido nucleico.
Absorbe la luz a una determinada longitud de onda y emite una longitud de onda superior.
La concentración es proporcional a la intensidad de emisión fluorescente.

Question 14

Para una PCR se requiere:

Answer 14

Secuencia de DNA
Enzima DNA polimerasa
Desoxiribonucleotidos (dNTP)
Primers
Buffer/cofactores (amortiguadores)

Question 15

Enzima que polimeriza una cadena de DNA tomando como molde una preexistente.

Answer 15

DNA polimerasa
Thermus aquaticus (Taq)
Soporte 95°C

Question 16

Desoxiribonucleótidos

Answer 16

dATP, dCTP, cGTP, dTTP

Question 17

Amortiguador de DNA polimerasa debe tener

Answer 17

pH adecuado (8.4)

Question 18

Cofactor de la Taq polimerasa

Answer 18

Magnesio

Question 19

Iniciadores de PCR (primers)

Answer 19

Lo que determina el inicio y el término de la región que se va amplificar.
Se diseñan y utilizan para reconocer secuencias blanco en el DNA molde.
Son cortos de 18 a 24 nt.
No debe de ser autocomplementario.
No debe de formar estructuras secundarias.

Question 20

Los iniciadores de PCR proporcionan

Answer 20

Un extremo 3’
Forward 5’ a 3’

Question 21

Los iniciadores de PCR tienen alto contenido en

Answer 21

GC

Question 22

Fases de la reacción en cadena de la polimerasa

Answer 22

Desnaturalización
Hibridación
Extensión

Question 23

En una PCR. ¿Qué sucede en la desnaturalización?

Answer 23

Se separan las cadenas de DNA

Question 24

Temperatura necesaria para la desnaturalización en PCR

Answer 24

95°C (20 a 30 seg)

Question 25

En una PCR. ¿Qué sucede en la hibridación?

Answer 25

Los primers se alinean al extremo 3’ e hibridan con su secuencia complementaria.

Question 26

Temperatura necesaria para la hibridación en PCR.

Answer 26

50 a 60°C

Tm = ((4G + C) + ( 2A +T))

Question 27

En una PCR. ¿Qué sucede en la extensión?

Answer 27

La Taq polimerasa actúa sobre el complejo templado de primers. Agrega dNTP’s complementarios para crear cadenas completas de ADN.

Question 28

Temperatura necesaria para la extensión en una PCr

Answer 28

72°C

Question 29

Al final de la PCR se realiza un

Answer 29

gel de electroforesis.

Question 30

Es una técnica utilizada para separar el ADN, el ARN, o moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica.

Answer 30

Electroforesis

Question 31

Genera campo eléctrico alrededor de un gel, cuenta con dos polos que se conectan a una fuente de energía.

Answer 31

Cámara de electroforesis

Question 32

¿Qué es el gel de agarosa y qué hace?

Answer 32

Polisacárido extraído de algas marinas.
Separa fragmentos de ácido desoxirribonucleico que van de 100 pb a 25 kb.

Question 33

La concentración de agarosa se escoge según

Answer 33

El tamaño del ácido nucleico que se vaya a analizar.

Question 34

El tamaño de los poros de la matriz del gel de agarosa depende de

Answer 34

la concentración de agarosa utilizada

Question 35

La concentración de agarosa es inversamente proporcional al

Answer 35

Tamaño del poro obtenido

Question 36

Son una mezcla de moléculas de DNA o de proteínas que permite determinar por comparación del tamaño de las moléculas contenidos en las muestras sometidas a electroforesis.

Answer 36

Marcador de peso molecular

Question 37

¿Los pasos de la PCR se repiten?

Answer 37

Si, la amplificación de una secuencia de DNA se realiza de manera exponencial.
Se repiten las fases de 20- 30 veces (ciclos)

Question 38

Donde se realiza la reacción en cadena de la polimerasa.

Answer 38

Termociclador
(Establece un sistema homogéneo, donde la temperatura y tiempo no se modifique en cada ciclo)

Question 39

¿Cómo funciona la electroforesis?

Answer 39

Se utiliza una corriente eléctrica para mover las moléculas y que se separen a través de un gel.
Los poros en el gel actúan como un colador, permitiendo que las moléculas más pequeñas se muevan más rápido que las grandes.

Question 40

Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia específica de ADN en una muestra de sangre o tejido.

Answer 40

Southern Blot

Question 41

Técnica de laboratorio que se utiliza para detectar una secuencia de ARN específica en una muestra de sangre o de tejido.

Answer 41

Northern Blot

Question 42

Técnica de laboratorio utilizado para detectar una proteína específica en una muestra de sangre o tejido.

Answer 42

Western Blot

Question 43

¿Para qué sirve una PCR?

Answer 43

Para amplificar/identificar secuencias de DNA

Question 44

Sirve para estudiar la expresión de muchos genes al mismo tiempo. Se colocan secuencias génicas en un portaobjetos de vidrio, llamado chip.

Answer 44

Microarreglos