MANIPULACIÓN DE GENES. ANÁLISIS DE ÁC. NUCLEÍCOS: PCR, BLOT Y ELISA Flashcards
De que depende la extracción de un ácido nucléico?
El tipo de ac que se va a extraer, el organismo de origen, la fuente y la técnica
ALGUNAS FUENTES DE ÁCIDO NUCLEICO
sangre
suero
plasma
biopsia
orina
heces
liq cefalorraquídeo, amniótico o sinovial
semen
raspado bucal
Pasos para la extracción
- Lisis de la célula
- Separación
- Purificación
- Precipitación
- Lavado
- Disolución
Método más común
Fenol-cloroformo
Espectrofotometría
Moleculas suspendidas que permiten el paso de luz, la cantdad de luz que pasa es inversamente proporcional a la cantidad de moléculas
Fluorometria
Unión específica de colorantes fluorescentes al ácido
nucleico
Que significa PCR
Reacción en cadena de la polimerasa
Que se requiere para una PCR
- Secuencia de DNA
- Enzima DNA polimerasa
- Desoxiribonucleotidos (dNTP)
- Primers
Proceso de una PCR
DESNATURALIZACIÓN
HIBRIDACIÓN
EXTENSIÓN
Que se hace al final de una PCR?
Un gel de electroforesis
Tipos de PCR
Estandar o punto final, multiple, RFLP, RT (transcriptasa reversa) y TR o qPCR (real time)
Aplicación de la PCR múltiple
Detectar varios segmentos de ADN en una sola prueba - cualitativa
Aplicación de la PCR RFLP
Polimorfismos
Aplicación de la PCR tiempo real
Es la más especifica, no necesita electroforesis y muestra cargas cuantitativas de ADN
Que PCR se utiliza si quieres hacer una prueba de paternidad o asegurarte de que dos organismos sean compatibles
PCR RFLP
Que PCR se usa para el COVID 19
Multiple, RT (transcriptasa reversa) y TR o qPCR (real time)
Componentes de la PCR en tiempo real (qPCR)
- Templado (DNA)
- Enzima (Taq DNA polimerasa)
- Desoxirribonucleotidos
trifosfatados - Primers (oligonucleotidos)
- Magnesio
- Buffer
- Agua
Colorantes para PCR en tiempo real (qPCR)
- Especificos
Sondas fluorescentes de
oligonucleótidos con un reportero
fluorescente - No especificos
Moléculas intercalantes que tienen
afinidad por el dsDNA
SYBER Green
tipos de cuantificación qPCR
Absoluta - numero exacto
Relativa - cambios en la
expresión de genes en distintos
estados fisiológicos
TIPOS DE SISTEMA INMUNE
INNATO (Rápida e innespecífica) Y ADAPTATIVO (Lenta y especifica)
SISTEMA INMUNE ADAPTATIVO
Lento y especifico
Linfocitos B - Diferenciación - Anticuerpos
Que es un ELISA
Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. permite detectar la presencia de anticuerpos o antígenos específicos en una muestra de sangre, suero o líquido biológico.
Tipos de ELISAs
Directo, indirecto y tipo sandwich
ELISA DIRECTO
Suero -> anticuerpo -> Tinte
ELISA INDIRECTO
Suero del px -> 1º Anticuerpo -> 2º Anticuerpo con tinte para marcar anticuerpo
ELISA SANDWICH
1º Anticuerpo -> Suero px -> 2º Anticuerpo
Que es la citometría de Flujo
Método rápido objetivo y cuantitativo de análisis de células, núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras partículas en suspensión.
Clúster de Diferenciación
- Proteínas que se encuentran en la
superficie celular. - Cada molécula CD pueden ser
especificas para una célula o para
un linaje celular. - Más de 400 marcadores celulares
Para que se puede utilizar la citometria de flujo
- Diagnóstico de leucemias, linfomas
- Seguimiento de enfermedades : VIH
- Estudio de cáncer
- Cuantificación de concentraciones de moléculas solubles
- Eficacia de tratamientos antitumorales e inmunosupresores
Para que se utiliza el southern blot?
Para detectar una secuencia específica de DNA
Para que se utiliza el northernn blot?
Para detectar una secuencia específica de RNA
Para que se utiliza el western blot?
Para detectar una proteína específica
Pasos para el southern blot
- Aísla DNA
- Enzimas de restricción
- Electroforesis
- Se desnaturaliza DNA
- Papel filtro de nitrocelulosa
- Hibridación
Aplicación de la Transcriptasa reversa
Detecta virus y su carga viral
