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MANIPULACIÓN DE GENES. ANÁLISIS DE ÁC. NUCLEÍCOS: PCR, BLOT Y ELISA Flashcards

1
Q

De que depende la extracción de un ácido nucléico?

A

El tipo de ac que se va a extraer, el organismo de origen, la fuente y la técnica

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2
Q

ALGUNAS FUENTES DE ÁCIDO NUCLEICO

A

sangre
suero
plasma
biopsia
orina
heces
liq cefalorraquídeo, amniótico o sinovial
semen
raspado bucal

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3
Q

Pasos para la extracción

A
  • Lisis de la célula
  • Separación
  • Purificación
  • Precipitación
  • Lavado
  • Disolución
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4
Q

Método más común

A

Fenol-cloroformo

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5
Q

Espectrofotometría

A

Moleculas suspendidas que permiten el paso de luz, la cantdad de luz que pasa es inversamente proporcional a la cantidad de moléculas

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6
Q

Fluorometria

A

Unión específica de colorantes fluorescentes al ácido
nucleico

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7
Q

Que significa PCR

A

Reacción en cadena de la polimerasa

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8
Q

Que se requiere para una PCR

A
  • Secuencia de DNA
  • Enzima DNA polimerasa
  • Desoxiribonucleotidos (dNTP)
  • Primers
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9
Q

Proceso de una PCR

A

DESNATURALIZACIÓN
HIBRIDACIÓN
EXTENSIÓN

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10
Q

Que se hace al final de una PCR?

A

Un gel de electroforesis

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11
Q

Tipos de PCR

A

Estandar o punto final, multiple, RFLP, RT (transcriptasa reversa) y TR o qPCR (real time)

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12
Q

Aplicación de la PCR múltiple

A

Detectar varios segmentos de ADN en una sola prueba - cualitativa

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13
Q

Aplicación de la PCR RFLP

A

Polimorfismos

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14
Q

Aplicación de la PCR tiempo real

A

Es la más especifica, no necesita electroforesis y muestra cargas cuantitativas de ADN

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15
Q

Que PCR se utiliza si quieres hacer una prueba de paternidad o asegurarte de que dos organismos sean compatibles

A

PCR RFLP

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16
Q

Que PCR se usa para el COVID 19

A

Multiple, RT (transcriptasa reversa) y TR o qPCR (real time)

17
Q

Componentes de la PCR en tiempo real (qPCR)

A
  • Templado (DNA)
  • Enzima (Taq DNA polimerasa)
  • Desoxirribonucleotidos
    trifosfatados
  • Primers (oligonucleotidos)
  • Magnesio
  • Buffer
  • Agua
18
Q

Colorantes para PCR en tiempo real (qPCR)

A
  • Especificos
    Sondas fluorescentes de
    oligonucleótidos con un reportero
    fluorescente
  • No especificos
    Moléculas intercalantes que tienen
    afinidad por el dsDNA
    SYBER Green
19
Q

tipos de cuantificación qPCR

A

Absoluta - numero exacto
Relativa - cambios en la
expresión de genes en distintos
estados fisiológicos

20
Q

TIPOS DE SISTEMA INMUNE

A

INNATO (Rápida e innespecífica) Y ADAPTATIVO (Lenta y especifica)

21
Q

SISTEMA INMUNE ADAPTATIVO

A

Lento y especifico
Linfocitos B - Diferenciación - Anticuerpos

22
Q

Que es un ELISA

A

Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. permite detectar la presencia de anticuerpos o antígenos específicos en una muestra de sangre, suero o líquido biológico.

23
Q

Tipos de ELISAs

A

Directo, indirecto y tipo sandwich

24
Q

ELISA DIRECTO

A

Suero -> anticuerpo -> Tinte

25
Q

ELISA INDIRECTO

A

Suero del px -> 1º Anticuerpo -> 2º Anticuerpo con tinte para marcar anticuerpo

26
Q

ELISA SANDWICH

A

1º Anticuerpo -> Suero px -> 2º Anticuerpo

27
Q

Que es la citometría de Flujo

A

Método rápido objetivo y cuantitativo de análisis de células, núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras partículas en suspensión.

28
Q

Clúster de Diferenciación

A
  • Proteínas que se encuentran en la
    superficie celular.
  • Cada molécula CD pueden ser
    especificas para una célula o para
    un linaje celular.
  • Más de 400 marcadores celulares
29
Q

Para que se puede utilizar la citometria de flujo

A
  • Diagnóstico de leucemias, linfomas
  • Seguimiento de enfermedades : VIH
  • Estudio de cáncer
  • Cuantificación de concentraciones de moléculas solubles
  • Eficacia de tratamientos antitumorales e inmunosupresores
30
Q

Para que se utiliza el southern blot?

A

Para detectar una secuencia específica de DNA

31
Q

Para que se utiliza el northernn blot?

A

Para detectar una secuencia específica de RNA

32
Q

Para que se utiliza el western blot?

A

Para detectar una proteína específica

33
Q

Pasos para el southern blot

A
  1. Aísla DNA
  2. Enzimas de restricción
  3. Electroforesis
  4. Se desnaturaliza DNA
  5. Papel filtro de nitrocelulosa
  6. Hibridación
34
Q

Aplicación de la Transcriptasa reversa

A

Detecta virus y su carga viral

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