Les outils d'étude des structures et des fonctions cellulaires

Question 1

Quel est le domaine d’étude du microscope photonique?

Answer 1

de quelques mm a 250/300 nm

au dessus du mm on peut plus faire passer les photons à travers le système étudier

Question 2

quel est la plus petite taille visible a l’oeil nu

Answer 2

environ 250 microm

Question 3

quel est le domaine d’étude du microscope électronique?

Answer 3

de quelques mm à 1 Angström

Question 4

Quel type de lumière utilise le microscope photonique?

Answer 4

la lumière blanche

Question 5

Quels sont le 4 outils d’étude des structures et des fonctions cellulaires

Answer 5

• les microscopies et techniques associées
• La cytométrie en flux
• Les techniques de culture et de fractionnement cellulaire
• les techniques d’analyse biochimique

Question 6

Qu’est ce que: la résolution du système d’un microscope?

comment la calculer?

Answer 6

capacité à distinguer les détails ( 2 objets très proches et non pas 1 seul objet)
δ= 0,61λ/nsinθ
λ= longueur d’onde de la lumière utilisée
n= indice de réfraction (propriété de l’échantillon)
θ= angle d’observation (propriété de l’objectif)

Question 7

Comment fonctionne le microscope photonique a fluorescence?

Answer 7

1) le MP à fluorescence sélectionne une longueur d’onde grâce a un filtre d’arrêt d’excitation.
2) la lumière atteint l’objet, l’objet émet de nouvelles longueurs d’onde qui passe à travers le miroir dichroïque
3) le filtre d’arrêt d’émission ne laisse passer qu’une bande de longueur d’onde qui atteint ensuite notre oeil

Question 8

Quels sont les différent fluorochromes utilisés et leur propriété spectrale?

Answer 8

• DAPI: excitation par une lumière UV; émission dans le bleu ( souvent le noyau)
• Fluorescéine: excitation par une lumière bleue; émission dans le vert ( protéine virale)
• Rhodamine: excitation par une lumière verte; émission dans le rouge ( microfilaments)

Question 9

quels sont les différents marqueurs utilisés en immunocytochimie?

Answer 9

• marqueurs vitaux ( hématoxyline/érosine)
• anticorps spécifiques (immunoglobine IgG) (immunofluorescence)
• protéines fluorescentes (GFP)

Question 10

Comment fonctionne l’immunoflurescence?

Answer 10

• a partir de cellules mortes
• on fait des trous grâce a des détergents dans les membranes des cellules mortes pour que les anticorps puissent entrer
• on injecte des anticorps d’une espèce A dirigé contre monomère d’actine
• on introduit des anticorps secondaires (d’une espèce B marqué par un fluorochrome ) dirigé contre l’immunoglobuline de l’espèce A

Question 11

Comment étudier la dynamique cellulaire?

Answer 11

Introduction de molécules fluorescentes ou marquées dans les cellules
3 méthodes:
- micro injection ( micropipette)
- électroporation ( plaques électriques)
- transfection ( liposomes)
les cellules transformées sont ensuite analysées en vidéo-microscopie

Question 12

donner un exemple de drogue qui interfère avec la dynamique cellulaire

Answer 12

le nocadazole qui dépolimérise les microtubules

Question 13

Comment fonctionne le microscope confocale à balayage laser?

Answer 13

• un laser traverse un filtre
• rebondit sur le miroir dichroïque
• atteint l’objet 3D marqué a fluorescence
• l’objet rejette des longueurs d’ondes qui atteigne le détecteur en passant pas le diaphragme ( laisse passer que la fluorescence qui nous intéresse (celle du plan focal))

Question 14

le microscope confocale à balayage laser permet d’obtenir quel type de plan?

Answer 14

Plans de section optique ( haut, milieu haut, milieu bas et bas)

Question 15

quels sont les 2 types de microscope électroniques?

Answer 15

ME à transmission

ME à balayage

Question 16

comment fonctionne le ME à transmission

Answer 16

• pistolet à transmission envoie faisceau d’électrons à travers échantillon
• puis faisceau passe à travers lentilles magnétiques
• obtention d’une image

Question 17

comment fonctionne le ME à balayage

Answer 17

Les faisceaux d’électrons ne traversent pas l’échantillon mais rebondissent
cela permet de voir la forme extérieur du système étudier

Question 18

qu’est ce que la cytométrie en flux et trieur de cellule

Answer 18

système qui permet de séparer -les cellules fluorescentes ( chargées négativement par un signal de charge des goute)
- et les cellules non fluorescentes ( chargées positivement par un signal de de charge des goutes)

Question 19

quels sont les deux types de culture cellulaire?

Answer 19

• Culture primaire ( meurent vite) ou en lignée (immortelles) ( mise dans des boites )
• culture de cellules souches

Question 20

donner trois exemples de techniques d’analyse biochimiques:

Answer 20

• Western blotting ( électrophorèse)
• Chromatographies
• Spectrométrie de masse