Les outils d'étude des structures et des fonctions cellulaires Flashcards
Quel est le domaine d’étude du microscope photonique?
de quelques mm a 250/300 nm
au dessus du mm on peut plus faire passer les photons à travers le système étudier
quel est la plus petite taille visible a l’oeil nu
environ 250 microm
quel est le domaine d’étude du microscope électronique?
de quelques mm à 1 Angström
Quel type de lumière utilise le microscope photonique?
la lumière blanche
Quels sont le 4 outils d’étude des structures et des fonctions cellulaires
- les microscopies et techniques associées
- La cytométrie en flux
- Les techniques de culture et de fractionnement cellulaire
- les techniques d’analyse biochimique
Qu’est ce que: la résolution du système d’un microscope?
comment la calculer?
capacité à distinguer les détails ( 2 objets très proches et non pas 1 seul objet)
δ= 0,61λ/nsinθ
λ= longueur d’onde de la lumière utilisée
n= indice de réfraction (propriété de l’échantillon)
θ= angle d’observation (propriété de l’objectif)
Comment fonctionne le microscope photonique a fluorescence?
1) le MP à fluorescence sélectionne une longueur d’onde grâce a un filtre d’arrêt d’excitation.
2) la lumière atteint l’objet, l’objet émet de nouvelles longueurs d’onde qui passe à travers le miroir dichroïque
3) le filtre d’arrêt d’émission ne laisse passer qu’une bande de longueur d’onde qui atteint ensuite notre oeil
Quels sont les différent fluorochromes utilisés et leur propriété spectrale?
- DAPI: excitation par une lumière UV; émission dans le bleu ( souvent le noyau)
- Fluorescéine: excitation par une lumière bleue; émission dans le vert ( protéine virale)
- Rhodamine: excitation par une lumière verte; émission dans le rouge ( microfilaments)
quels sont les différents marqueurs utilisés en immunocytochimie?
- marqueurs vitaux ( hématoxyline/érosine)
- anticorps spécifiques (immunoglobine IgG) (immunofluorescence)
- protéines fluorescentes (GFP)
Comment fonctionne l’immunoflurescence?
- a partir de cellules mortes
- on fait des trous grâce a des détergents dans les membranes des cellules mortes pour que les anticorps puissent entrer
- on injecte des anticorps d’une espèce A dirigé contre monomère d’actine
- on introduit des anticorps secondaires (d’une espèce B marqué par un fluorochrome ) dirigé contre l’immunoglobuline de l’espèce A
Comment étudier la dynamique cellulaire?
Introduction de molécules fluorescentes ou marquées dans les cellules
3 méthodes:
- micro injection ( micropipette)
- électroporation ( plaques électriques)
- transfection ( liposomes)
les cellules transformées sont ensuite analysées en vidéo-microscopie
donner un exemple de drogue qui interfère avec la dynamique cellulaire
le nocadazole qui dépolimérise les microtubules
Comment fonctionne le microscope confocale à balayage laser?
- un laser traverse un filtre
- rebondit sur le miroir dichroïque
- atteint l’objet 3D marqué a fluorescence
- l’objet rejette des longueurs d’ondes qui atteigne le détecteur en passant pas le diaphragme ( laisse passer que la fluorescence qui nous intéresse (celle du plan focal))
le microscope confocale à balayage laser permet d’obtenir quel type de plan?
Plans de section optique ( haut, milieu haut, milieu bas et bas)
quels sont les 2 types de microscope électroniques?
ME à transmission
ME à balayage
