Lab. 9 Geles Flashcards
los amino acidos tienen estructura primaria, secundaria, terciaria o cuarternaria
los amino acidos tienen estructura primaria
menciona ejemplos de dos cosas que tengan estructura secundaria
helices alfa y hojas beta
el ADN del fago Lambda es digerido con que
el ADN del fago Lambda es digerido con la endonucleasa Hind III
del ADN del fago Lambda, el cual es digerido con la endonucleasa Hind III, se obtienen cuantos fragmentos discretos en pares de bases
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que es caracteristico de los fragmentos de 23.130kb y 4.361kb en el ADN del fago Lambda digerido con la endonucleasa Hind III
son cohesivos y pueden anillarse formando una banda adicional
que se debe hacer con el marcador del ADN del fago Lambda antes de usarse
se debe calentar a 65 grados C por 5 minutos
mediante su division en partes, que significa la palabra electroforesis
electro - la electricidad
foresis - del griego phoros, trasladar
electroforesis
el movimiento de particulas con carga, bajo la influencia de un campo electrico a traves de un medio semisolido
el medio semisolido utilizado en la electroforesis puede ser de
- agarosa
- poliacrilamida
el ADN es de carga _____, gracias a _____
negativa, su grupo fosfato
las particulas de ADN viajan del electrodo _____ al electrodo _____
negativo al positivo
el electrodo negativo se conoce como
catodo
el electrodo positivo se conoce como
anodo
la migracion de particulas de ADN es inversamente proporcional a
el peso molecular de las muestras
menciona los materiales necesarios para llevar a cabo una electroforesis
- gel de agarosa o poliacrilamida
- camara de electroforesis
- fuente de energia, o power supply
menciona los reactivos utilizados durante una electroforesis
- loading dye
- tinte (EtBr)
- ADN
- amortiguador/buffer
el gel de agarosa es utilizada para moleculas de que tamaño y de que tipo
de mayor tamaño (100pb-25kb)
ADN, ARN y proteinas
el gel de poliacrilamida es utilizado para moleculas de que tamaño y de que tipo
de menor tamaño (<1,500pb)
ADN, ARN y proteinas
cual tipo de gel provee un mayor poder de resolucion
poliacrilamida
de donde es extraida la agarosa
de algas rojas del genero Gellidium y Gracillaria
agarosa
polisacarido que en diluciones de baja concentracion (de 0.5 a 2%) puede mantenerse liquido en temperaturas mayores de 50 grados C y formar un gel semisolido a temperaturas menores
el gel es una matriz de fibras, polimeros entrelazados en abundante cantidad de diluyente que atrasa la migracion de las moleculas grandes
para pasar del estado solido al gel inicial de agarosa, cual es la temperatura que se requiere
aprox. 45 grados C
para pasar del gel inicial de agarosa al estado solido, cual es la temp. que se requiere
aprox. 100 grados C
para pasar de la estructura de gel final de agarosa al gel inicial, cual es la temp. que se requiere
aprox. 100 grados C
como es la matriz del gel de agarosa
porosa
una cantidad menor de agarosa en el gel es optimo para separar fragmentos lineales de ADN de que tamaño
de mayor tamaño
menciona los pasos para preparar un gel de agarosa
- mezclar la agarosa y el buffer
- echar la mezcla en el microondas hasta que este hierva
- sacar la mezcla del microondas y permitir que esta se enfrie hasta 65 grados C
- echar la mezcla en el molde
para los geles de agarosa, se hace una tincion con
bromuro de etidio (EtBr)
por sus siglas en ingles, que significa PFGE
pulsed field gel electrophoresis
electroforesis en gel de campo pulsado
que es PFGE
una tecnica de separacion de fragmentos de ADN desarrollada a partir de la electroforesis de gel de agarosa. aqui la direccion del campo electrico se cambia periodicamente
cual es la diferencia entre una electroforesis en un gel de agarosa y PFGE
en PFGE, la direccion del campo electrico se cambia periodicamente
en PFGE, la alternancia de la direccion del campo electrico permite separar fragmentos _____ de ADN de que tamano
grandes
10 kb hasta 10Mb
quienes fueron los primeros en separar ADN de alto peso molecular y en que ano lo lograron
1984
Schwartz, Cantor y colaboradores
cuales son las modificaciones que incorpora PFGE
- baja concentracion de agarosa (1%)
- cambios en la direccion del campo electrico
cuales son los parametros importantes en PFGE
- voltaje
- el angulo del campo electrico
- el tiempo de conmutacion - el tiempo en cada direccion de campo electrico
- tempertaura
gel de poliacrilamida
forma un gel transparente, es quimicamente inerte e insoluble en agua
cual es un beneficio del gel de poliacrilamida
se puede controlar el tamaño de los poros, con la concentracion del acrilamida
como se forma el gel de poliacrilamida
la polimerizacion de acrilamida por accion de un agente entrecruzador (bisacrilamida), un iniciador (TEMED) y un catalizador (S2O8-)
cual es la desventaja del gel de poliacrilamida
su neurotoxicidad
cual es la relacion entre el porcentaje de acrilamida y el diametro del poro
son inversamente proporcionales
que tipo de camara se usa para el gel de agarosa y para el gel de poliacrilamida
horizontal
agarosa
ADN y ARN
vertical o de secuenciacion
poliacrilamida
ADN, ARN y proteinas
SDS PAGE separa las proteinas por
masa
PAGE Nativo (no desnaturalizante) separa las proteinas de acuerdo a
su razon de masa:carga
la diferencia en su densidad de carga
cual es la tecnica de electroforesis mas ampliamente utilizada
SDS PAGE
estado nativo de una proteina
las proteinas se encuentran en el estado plegado apropiado, no desnaturalizado o sin plegar
Native PAGE se usa para saber
si algo es una enzima
funcion de SDS
desnaturaliza, o rompe, proteinas
funcion de 2-mercaptoethanol
reduce, o rompe, enlaces de disulfuro
hace proteinas lineales
las estructuras terciarias contienen
puentes de disulfuro
que es SDS PAGE
detergente/jabon anionico que separa las proteinas por su tamano
los microsatelites se pueden apreciar en que tipo de gel
poliacrilamida
en que tipo de gel las bandas no estan bien definidas
gel de agarosa
gel de agarosa vs gel de poliacrilamida
gel de agarosa:
- menos resolucion
- camara horizontal
- mas acidos nucleicos
gel de poliacrilamida
- camara vertical o de secuenciacion
- mayor resolucion
- mas proteinas
por sus siglas en ingles, que significa PAGE
poliacrilamida gel electroforesis
cual es la funcion del stacking gel en la electroforesis de poliacrilamida
asegura que todas las muestras bajen a la misma vez
ej. como un arbitro en una carrera de atletismo
menciona la desventaja de la electroforesis de poliacrilamida
luchas contra la gravedad
