La microscopie Flashcards
Définition du microscope ?
Instrument d’optique qui utilise la lumière visible pour obtenir des images agrandies d’objets minuscules dont les détails échappent à l’œil nu
Qui a travailler sur l(‘invention du microscope ?
- Invention (1595) : Hans & Janssen
- Amélioration (1668-70) : van Leeuwenwenhoek & Hooke
- Amélioration : Zeiss
De quoi est composée la lumière ?
De photons
Définition d’un photon ?
- Particule élémentaire
- Possède une masse nulle
- N’a pas de charge électrique
- Se déplace en permanence à la vitesse de la lumière
Relation entre un rayon lumineux et les photons ?
- Intensité : proportionnelle au nombre de photons
- “Couleur” : selon la longueur d’onde des photons
De quoi est composée la lumière blanche ?
Photon de toutes les longueurs d’ondes du visible sont représentées en proportion égales
Quelles sont les interactions possibles entre la lumière et la matière ?
- Absorption des photons par la matière traversée
- Déviation et réflexion de la lumière
- Diffraction de la lumière : interférence
Qu’indiquent les modifications de la matière ?
Elle contiennent des informations spécifiques et caractéristiques de l’échantillon
Fonctionnement du microscope ?
=> Système de lentille
* Lentilles de l’objectif : élargissent l’image → image réelle renversée et agrandie → projection vers le système de lentilles de l’oculaire (qui agrandit encore plus)
Résolution de l’œil humain ?
Jusqu’à 100 µm
Résolution de la microscopie optique ?
- 100 µm → 0,5 µm
Cellules nuclées, globules rouges, bactéries
Résolution de la microscopie électronique ?
- 100 µm → 1 nm
Virus, macromolécules des cellules (protéine, Acides nucléiques…)
Quels sont les différent type de MO ?
- A contraste de phase : cellules vivantes non colorées
- A fluorescence
- Confocal (obtention d’une image en 3D par superposition d’images
Différence entre le MO et le ME ?
MO : Faisceau de photons
ME : Faisceau d’e-, lentilles magnétiques, prélèvement sous vide
Quels sont les différents type de microscopes ?
- Monoculaires
- Binoculaires
- Inversés (cultures cellulaires)
Caractéristiques d’un objectif de microscope ?
- Lentille convergente : côté de l’objet
- Système avec faible distance focale (mm) → grossissement
- Sur une tourelle/révolver
Quels sont les différents types d’objectifs ?
- Plan-achromatique => Plan
- Pour contraste de phase => Ph
Comment calculer le grossissement du µscope ?
= grandissement de l’objectif x grossissement de l’oculaire
Utilité du diaphragme du microscope ?
Ouverture (diamètre variable) permettant de restreindre la partie de l’échantillon qui est éclairé
Comment réaliser une bonne mise au point ?
L’objet doit ê dans le plan focal de
l’objectif
Utilisation de l’huile en microscopie ?
Grossissement x100 :
* Sans huile : réfraction de la lumière
* Avec huile → Augmentation du pouvoir de résolution d’un objectif
Relation entre la résolution et l’agrandissement ?
+ la résolution est élevée + l’agrandissement est élevé
Qu’est-ce que l’immunohistochime (ICH) ?
Méthode de détection d’antigènes cellulaires/tissulaires par des anticorps spécifiques marqués:
- par une réaction colorée enzymatique
- OU par des fluorochromes
Condition pour une ImmunoHistochimie réussite ?
- Tenir compte de la dilution de l ’AC
- Coloration stable
- Avoir des contrôles positif et négatif
Impératif des produits de détection en ImmunoHistochime ?
Doivent être détectables et stables
Principe de l’Immunofluorescence ?
Anticorps 2 couplé à une molécule Fluorescente
Utilisation d’un microscope à fluorescence ?
Adéquation entre le fluorochrome et le filtre utilisé nécessaire
Qu’utilise-t-on pour le comptage cellulaire ?
- Des Hématimètre : cellule hématimètre en verre, simple ou double
- Réalisation de numération globulaire de liquide biologique
