L’etalement Et Le Sechage Flashcards
Quel est le but de l’étalement ?
Aplanir le tissu avant de le mettre sur la lame
L’étalement étire le tissu: la coupe au microtome cause une compression sur le tissu.
Quelles sont les deux méthodes d’étalement ?
- Sur lame
- Sur eau chaude
La méthode sur eau chaude est la plus fréquente.
Quelles précautions doivent être prises lors de l’étalement sur eau chaude ?
- Limiter le contact coupe – eau
- Éviter trop d’alcool dans le bain
- Utiliser un bain à 37 °C pour tissus délicats
- Ne pas dépasser 40 °C pour immunohistochimie
Un contact prolongé peut entraîner l’extraction de composants tissulaires.
Si y a trop d’alcool dans le bain sa peu causer la coagulation de l’adhesif
Quand est-il nécessaire d’utiliser un adhésif lors de l’étalement ?
- Exposition aux enzymes
- Incubations longues
- Acides et alcali
- Séchage court (< 60 minutes)
- Fixateurs mercuriques
Les adhésifs protéiques peuvent contaminer les recherches de microorganismes.
Quel est l’effet d’un excès d’adhésif lors de l’étalement ?
Colorations d’apparence sale
Les solutions protéiques se contaminent facilement et ne sont pas idéales pour l’histochimie.
Quelles sont les méthodes de traitement des lames ?
- Poly-L-Lysine
- Sulfate de potassium chromique
- Albumine
- Celluloïdine
Chaque méthode a ses propres précautions et applications.
Quelles sont les précautions à prendre lors de l’étalement pour éviter l’artéfact de ‘terre desséchée’ ?
- Limiter le temps d’exposition avec l’eau du bain
- Éviter une température trop élevée
- Éviter une quantité excessive d’adhésif
*Ne pas trop étirer le ruban
Une circulation inadéquate peut également causer cet artéfact.
Quel est le but du séchage ?
Évaporer l’eau du bain d’étalement plus rapidement
Cela évite la contamination du tissu par des microorganismes si un adhésif de nature protéique est utilisé.
Quelles sont les trois méthodes principales de séchage ?
- Étuve à formaldéhyde
- Ventilateur à air chaud
- Plaque chauffante
Chacune a ses propres conditions de température et durée.
Quelle est la température et la durée recommandées pour le séchage à l’étuve à formaldéhyde ?
37 °C pendant 4 à 18 heures
Un séjour trop long ou à une température trop élevée peut fendiller les coupes.
Vrai ou Faux : Le séchage à température ambiante est la meilleure méthode pour préserver la morphologie.
Vrai
Le séchage à température ambiante peut prendre toute la nuit.
Quel est la méthode d’étalement sur lame ?
- Mettre la lame sur une plaque chauffante à 48 °C
- Mettre l’adhésif directement sur la lame chaude
- Mettre la coupe sur la lame
- Égoutter et sécher la lame
Quels est la méthode d’étalement sur au chaude ?
- Température bain d’eau chaude 5 à 10°C sous le point de fusion de la paraffine utilisé pour l’enrobage
- Ajouter solution adhésive (pas nécessaire pour H&E)
- Ajouter éthanol ou acétone pour diminuer tension de surface et augmenter l’expansion du tissu (étape facultative)
- Mettre coupe ou ruban de sections sur l’eau du bain, face luisante en premier
- Cueillir la ou les coupes avec une lame propre
Quel est le traitement de lames pour le Poly-L-Lysine ?
Traiter les lames par immersion dans la solution ou par application sur la lame.
Excellent pour coupes à la congélation
Quel est le traitement de lame par Sulfate de potassium chromatique ?
Contient de la gélatine.
Traiter les lames avant de les utiliser.
Attention à contamination du bain par bactéries
Quel est le traitement de lame par Albumine ?
Blanc d’œuf, glycérine, Poly-L-lysine
Lames chargées……
Lames déià traitées
Lames recouvertes d’un enduit qui augmente les charges positives à leur surface.
Favorise l’adhérence du tissu à la lame.
Coût plus éleve
Utilisées lorsqu’on ne peut pas mettre d’adhésif dans le bain à étalement.
Élimine toute possibilité de coloration de fond (bruit de fond)
Quel est le traitement de lame par Celluloïdine ?
Fait anciennement.
Peut toujours être utilisé si tissu trop déshydraté dans la circulation.
Gélatine, Agar, Elmer’s glue……
Ajouté au bain d’étalement
Adhésif: Attention…..
*Procédés histochimiques : digestion par des enzymes → pas d’adhésifs protéiques
*Procédés immunohistochimiques : recherche Ag (protéines) → pas d’adhésifs protéiques
*Pour recherche des glucides → pas d’adhésifs à base d’amidon
C quoi c qui space si la Temperature de l’eau lors de l’étalement est trop basse?
Aplanissement incomplet de la coupe
C quoi c qui space si le ruban est trop étiré ?
Artefact de terre desséchée
Separation des elements tissulaires
L’étalement est une manipulation délicate devant être faite avec le plus grand soin. Il arrive quelques fois que les coupes se décollent de la lame lors de la coloration. Cette situation peut être due à certains facteurs :
-Lames sales, grasses ou huileuses
-Bulles d’air emprisonnées sous le tissu
-Solutions colorantes alcalines (colorations argentiques) favorisent décollement
- Trop de kératine sur le tissu
-Tissu décalcifié est plus susceptible de se décoller
- Tissu est riche en sang ou en caillots
- Technique de coloration employée nécessite de nombreux lavages et incubations
- Circulation n’a pas été réalisée correctement
- Coupe trop épaisse
Dans l’etuve a formaldéhyde, la chaleur…..
Chaleur → provoque évaporation du formaldéhyde
- séchage des coupes
- vapeurs empêchent développement de bactéries
- vapeurs favorisent adhésion à lame (insolubilisation des adhésifs protéiques)
