Kolokvij rastlinski del Flashcards
Vakuola
- rast celice
- shranjevanje (sekundarni metaboliti) in transport
- odgovor na ranitev (substrat + encim)
- plazmoliza > osmotsko sranje
- plazmodezme > povezave med sosednjimi celicami (transport po simplastu)
Plastidi
- proplastid
- etioplast
- kloroplast
- kromoplast
- gerontoplast
- levkoplast
- amiloplast (škrobna zrna)
- elaioplast
- proteinoplast (semena)
Celična stena
- primarna
- sekundarna in terciarna (nastajanje v opornih tkivih)
- nalaganje stene od znotraj (krčenje in odmiranje protoplasta)
- celulozno sintetazni kompleks
Parenhimske celice
- najpomembnejši in vsestranski tip celic
- fotosinteza (klorenhim), shranjevanje hranil in vode (vodni parenhim), prezračevanje (aerenhim) in opora (stelatni parenhim)
Sklerenhimske celice
- specializirane za zagotavljanje toge podpore in zaščite
- močno odebeljene in olesenele celične stene
- ob zrelosti mrtve
- vlakna > dolga in vitka
- skleride > krajše in nepravilne oblike
- lupine oreškov, pulpa hruške, semenska lupina stročnic
Kolenhimske celice
- podolgovate z neenakomerno odebeljenimi celičnimi stenami (odebeljene stene v vogalih)
- prilagodljiva podpora rastočim delom (mlada stebla in listi)
- tik pod povrhnjico
- celice ostanejo žive
Ksilemske celice
- transport vode in mineralov od korenin do preostale rastline
- traheide (golosemenke)
- traheje (kritosemenke)
- parenhimske celice
Floemske celice
- transport produktov fotosinteze iz listov v druge dele
- elementi sitastih cevi in spremljevalne celice
Celice spremljevalke
specializirane celice v povrhnjici listov in stebel, odpiranje in zapiranje listnih rež
Koreninski laski
specializirani za absorpcijo vode in mineralnih hranil, podaljšane celice rizodermisa
Trihomi
- površina listov, stebel in drugih delov
- zaščita pred obiranjem, zmanjševanje izgube vode, izločanje snovi
- enocelični, večcelični, žlezni
Meristemske celice
- meristemi
- nediferencirane celice
- razvijejo v različne specializirane vrste celic
Jedro
- celične genske informacije
- središče regulatornih dejavnosti
- zapisi plastidnih genov
- genotoksičnost > delovanje agensov na potek celičnega cikla (poškodovanje dednine)
Barvanje po Feulgnu
- identifikacija kromosomskega materiala in DNA
- kislinska hidroliza z HCl > odcepitev dušikovih baz in nastanek aldehidov
- spiranje z vodo
- Shiffov reagent > vezi z aldehidi
- spiranje z SO2
- nastanek rdeče vijoličnega produkta, ki proporcialen količini DNA > mečkanec
Določanje integritete in poškodb membran
- intaktne membrane > vzdrževanje homeostaze, toleranca na razmere v okolju
- stres > poškodbe membrane, celična smrt (abiotski in biotski)
- oksidativni stres (ROS) > direktni in indirektni (poškodbe antioksidativne mašinerije)
- iztekanje elektrolitov
- penetracija barvil v celice s poškodovanimi membranami > Evans modro, Tripan modro
Evans modro
- barvanje celic s poškodovano membrano in mrtve celice
- izključuje se iz živih celic
- pH reakcija kisla
Tripan modro
- barvanje prehodnih elementov ksilema, mrtvih celic in gliv
- selektivno veže na hitin
Primarni metaboliti
- direktno vključeni v procese izgradnje in razgradnje
- univerzalno prisotni pri vseh rastlinah
- sladkorji, AK, NK, MK, klorofil, …
Sekundarni metaboliti
- produkti z ekološko vlogo
- vrstno specifični
- obramba pred herbivori, patogeni, privabljanje opraševalcev in raznašalcev plodov
- terpeni, fenoli, alkaloidi, glukozidiT
Terpeni
- nenasičeni ogljikovodiki, sintetizirajo iglavci
- osnovna enota izopren
- monoterpeni, seskviterpeni, diterpeni, politerpeni
- hlapni, dobra gorljivost
- preprečevanje okužb
- smole
Polifenoli
- vodotopni
- shranjevanje v vakuoli in celični steni
- šikimatna in fenilpropanoidna pot sinteze
- zaščita pred UV sevanjem
- obramba pred patogeni in herbivori
- privabljanje opraševalcev in raznašalcev plodov
Alkaloidi
- Dušikov atom v heterocikličnem obroču
- sinteza v plastidih, mitohondrijih in citosolu
- skladiščenje v vakuolah listov, cvetov in semen
- lateks
- tropanski, piridinski, opiatni
Sekrecija
- proces ločevanje učinkovin od protoplasta > odvečni ioni v obliki soli, sladkorji, pektini, sekundarni metaboliti
- sekretorne strukture > žlezna tkiva (žleze in trihomi) in laticiferno tkivo (smolni in mlečni kanali)
- intracelularna > iz membransko vezanih komponent v celico (kopičenje v vakuoli)
- ekstracelularna > iz celice v okolje
- sekretorne žleze > hidrofilne in hidrofobne učinkovine
Sekretorne strukture
Zunanje:
- trihomi in žleze
- nektariji
- ozmofore (opraševanje)
- hidatode
Notranje:
- sekretorne celice
- sekretorne votline in kanali
SEM - vrstična mikroskopija
- površinska informacija
- sipanje > odboj elektrona, glede na vhodno energijo
- 3D slika
- vzorec ne rabi biti tanek
- manjša resolucija kot TEM
- manjša povečava kot TEM
- kemijska fiksacija vzorcev, sušenje in napraševanje
- hitro zamrzovanje, liofilizacija
- Krio-SEM > analiza zamrznjenega vzorca
TEM- transmisijska elektronska mikroskopija
- projekcija absorpcije ionov > kontrast
- osmijev tertaoksid
- odvisno od sestave vzorca
- večja resolucija in povečava
- zelo tanke rezine
- 2D slika
- površinske reakcije elektronov z vzorcem
- študije ultrastrukture
- kemijska fiksacija, dehidracija v seriji alkoholov, vklapljanje v parafin, rezanje na ultramikrotom
EDX
- kemična oz. elementna analiza vzorcev
- slaba občutljivost
- možnost sledenja makroelementov, ne elementov v sledeh, ki pod mejo detekcije
- Energy Dispersive X-ray Spectrometry
micro-PIXE
- atomska ionizacija vzorca
- vzbujanje s pospešenimi delci, protoni in težkimi ioni
- boljše razlikovanje med vzorcem in ozadjem
- Proton induced X ray emission
- detektiranje širokega nabora elementov
- velika občutljivost na elemente
- lateralna ločljivost 1um > raziskave na tkivnem in celičnem nivoji
mikro-XRF
- vzbujanje s fotoni rentgenskih žarkov
- več šuma
- subcelični nivo
LAICPMS
- slikanje porazdelitve elementov na osnovi laserskega žarka
- na osnovi laserske svetlobe
- visoka občutljivost
- izotopska sestava
- destruktivna
MeV-SIMS
- sekundarna ionska masa spektrometrija
- nižja stopnja fragmentacije molekul
Kemična fiksacija
- fiksativi PFA, glutaraldehid, etanol in metanol
- dehidracija
- vklapljanje v parafin, smole
- rezanje ultratankih rezin
- prerazporeditev elementov
- spiranje in kontaminacija
Kriofiksacija
- zamrzovanje
- rezanje
- direktne meritve ali liofilizacija (ohrani flourescenca klorofila) > sušenje zmrznjenih rezin pri nizki temperaturi in v vakumu (sublimacija ledu)
- ohrani se struktura in porazdelitev elementov in biomolekul
- tvorba kristalov, ki poškodujejo strukture > vitrifikacija
- krčenje vzorca med liofilizacijo
- zamrzovanje v kriogenu hlajenem s tekočim dušikom
Tehnike zamrzovanja:
- v kriogenu
- z ohlajeno kovinsko površino
- pod visokim tlakom
Histološke metode
- študije ultrastrukture in funkcije na tkivni in celični ravni
- vzorčenje, biopsija in nekropsija
- fiksacija
- vklaplanje
- rezanje
- barvanje in kontrastiranje
- vizualizacija
Fiksacija
Fizikalne metode:
- hitro zamrzovanje v kriogenu (krioprotektanti)
- liofilizacija
- segrevanje
Kemične metode:
- mreža med posameznimi molekulami v tkivu
- imerzija > vzorec namočimo v fiksativ
- perfuzija > fiksativ uvedemo v krvožilni sistem
- koagulacija ali zamrežitev struktur
- ohranjanje strukture in funkcije
- porušenje ionske sestave in poškodovanje biomolekul
Enokomponentni fiksativi
- etanol, metanol, aceton > dehidracija in koagulacija proteinov v citosolu, odstranjevanje lipidov, otrditev tkiva
- formaldehid > ohranjanje strukture in lipidov
- glutaraldehid > zamreženje proteinov, ohranjanje ultrastrukture, fiksacija tkiv za TEM
- osmijev tertaoksid > vezava na membranske sisteme, kontrastiranje za TEM
Večkomponentni fiksativi
- Bouin > vklaplanje v parafin
- Clarke > etanol in ocetna kislina
- Carnoy > etanol, kloroform in ocetna kislina
- raztopine formaldehida > imunolokalizacija, mRNA in situ hibridizacija
- glutaraldehid-osmijev tertaoksid > fiksacija in kontrastiranje
Vklapljanje
- infiltracija tkiva v tekoče snovi, ki se kasneje strdijo
- parafin (ohlajanje)
- epoksi (polimerizacija)
- zamrzovanje
- vklapljanje v agarozo
Rezanje
- ultratanke rezine 50-100 nm (stekleni nož)
- semitanke rezine 0,5-2 um
- tanke rezine 3-10 um
- debele rezine nad 10 um
Splošno barvanje
- molekula barvila z dvema domenama > kromogen (daje barvo) in auksokrom (ionizira kromogen in se veže na določene molekule v tkivih)
- kromogeni > nitro barvila, azo barvila, derivati antokinona, …
- auksokromi > bazična barvila, kisla barvila, nevtralna barvila in hidrofobna barvila
Histokemija
- med barvili in molekulami v tkivu potečejo kemijske reakcije
- detekcija posameznih molekul v tkivih in lokalizacija
- kemijske reakcije > modifikacije molekul v tkivih (barvanje jedra)
- encimske reakcije > nekateri encimi aktivni po fiksaciji
- lektini > proteini z molekularno domeno, ki prepoznava terminalne OH v oligosaharidnih domenah
Imunohistokemija
- lokalizacija izbranih molekul v tkivih z vezavo protiteles
- imunoglobulini G
- vezava flourescentnih barvil in težkih kovin na protitelesa
In situ hibridizacija
Obarvanje tkiv, ki izražajo določeno mRNA
Vitalna barvila
- kompatibilna z živim materialom
- flourescin diacetat, evans in tripan modro
- neutral red > kisle celične komponente
- aciridine orange > jedro
- metilensko modro > jedro in ostale strukture
- safranin O > jedro
- škrobna zrna > jodovica