Isolamento transtirretina recombinante Flashcards
A expressão em E. coli é o sistema apropriado para isolamento de proteínas sempre que é possível obter estas na forma solúvel ou insolúvel?
Solúvel
V ou F. A expressão em E. coli é adquada para proteínas que sofreram modificações pós-traducionais.
Falso
O que é que se utiliza para crescer a E. coli transformada quando se pretende ter a produção de uma grande quantidade de proteína?
Fermentador
O vetor de expressão é normalmente um … no qual deve ser clonado o … do gene eucariota que se pretende expressar.
Plasmídeo, cDNA
Um dos sistemas de expressão mais comuns envolve que promotor nas bactérias? O gene da polimerase é controlado pelo promotor … que é induzível pelo …
T7 RNA polimerase, lac, IPTG
A sobre-expressão da proteína alvo no citoplasma pode conduzir à formação de agregados insolúveis, os …
Corpos de inclusão (inclusion bodies)
A proteína alvo em corpos de inclusão (agregados) é fácil ou difícil de purificar? Porquê?
Fácil, por ser maioritária nestas partículas e por estas serem isoladas por centrifugação
Qual é a técnica laboratorial que visa separar a proteína de interesse das proteínas bacterianas?
Cromatografia
A separação por cromatografia baseia-se na distribiução das substâncias a analisar por duas fases, quais?
Fase estacionária e fase móvel
Na cromatografia, as moléculas com tendência a ficarem na fase estacionária movem-se a uma velocidade maior/menor do que as que têm maior afinidade para a fase móvel.
Menor
A cromatografia que separa as proteínas por forma e tamanho é a…
Filtração em gel
A cromatografia que separa as proteínas por carga é a…
Troca iónica
A cromatografia que separa as proteínas de acordo com o grau de hidrofobicidade é a…
Cromatografia de fase inversa
A cromatografia que separa as proteínas por ligação a metais é a…
Cromatografia de iões metálicos imobilizados
A cromatografia que separa as proteínas através de grupos tiol expostos é a…
Cromatografia covalente
A cromatografia que separa as proteínas através da afinidade a ligandos/inibidores/receptores/anticorpos é a…
Cromatografia de afinidade
V ou F. O trocador iónico tem carga oposta às proteínas que passam pela coluna
Verdadeiro
Em que consiste a cromatografia de troca iónica?
A separação dá-se por competição da ligação entre diferentes iões (proteínas ou iões salinos) com a mesma carga e um meio cromatográfico com carga oposta, o trocador iónico.
Os trocadores aniónicos têm carga…
Positiva
V ou F. Os trocadores catiónicos têm carga positiva
Falso
V ou F. Os trocadores aniónicos atraem cargas negativas
Verdadeiro
V ou F. Na cromatografia de troca iónica o pH não é relevante
Falso
O pH ao qual o numero de cargas positivas é igual ao de cargas negativas numa proteína é designado…
Ponto isoelétrico (PI)
A pH superior ao pI a proteína encontra-se carregada positivamente ou negativamente?
Negativamente