Introduction 2 Flashcards
La microscope photonique
à l’origine l’imité par:
-__________________
-Le fait que l’échantillion est______________
Nécessite des méthode pour visualisé la cellule
-Contrsaste de phase
-______________
-______________
-Résolution
-transparent
-Colorants
-fluorescence, anticorps et GFP
Microscopie à fluorescence
-Permet de détecter des molécules spécifiques (______________) et de marquer des ______________
-Utilise la propriété de certaines molécules à______________ et ______________ des photons à des longueur d’onde spécifiques
-L’absoption d’un photton est suivie par l’émission d’un photon à une plus ____________________________
-(proteines, ions)
-organelles (organite)
-absorber et émettre
-grande longueur d’onde
**Il existe plusieurs molécules fluorescentes et elles peuvent être utilisé en combinaiseon
Décrire les étape de l’immunofluorescence résumé en deux points
1-Utilisation d’un anticorps spécifique pour une proteine cellulaire
2-Visualisation de se complexe (anticorps-proteines) à l’aide d’un anticorps secondaire couplé à une molécule fluorescente
Le microscope à fluorescence et le photonique standard sont semblable
-une lampe à haute énergie permet d’illuminer l’échantillon
-Des filtres permetten de sélectionner les longueurs d’onde ______________ et ______________ appropriées
-absorption et d’émission
La résolition du microscope optique est limitée par l’épaisseur du spécimen
2 techniques permettent d’obtenir des images claires à partir d’un spécimen épais:
-______________
-______________
-Déconvolution (traitment d’image d’un microscope optique) (à l’aide de mathématique)
-Microscope confocal (focalisé la lumière fluorescente en 1 point)
Les techniques d’immunofluorescence et de coloration nécessitent des cellules ______________
-On étudie un instant dans la vie des cellules
-Fixation risque de générer des artéfacts (_____________________)
-On de peut pas mesurer des ______________ ou des parametres comme ______________
Donc, Cela nécessite un developpement des techniques permettant d’étudier les cellules vivante
-Molécules pouvant entrer dans des _________________ et __________________ sous certaines condition
-Génération de cellules exprimant des ____________________________
-Fixées
-des éléments habituellement absent de la cellule
-Ions
-le potentiel membranaire
-cellules vivantes et fluorescentes
-proteines chimériques fluorescentes (GFP)
GFP (green Fluorescent Protein)
-Proteine fluorescente isolée de Aequoria victoria (meduse)
-Peut être fusionnée à ______________
-Permet de visualiser ____________________________
-Des variantes ont été créees apr mutagénèse (CFP, YFP)
-existence de d’autre proteines fluorescentes ( ____________________________)
-d’autres protéines
-des proteines dans des cellules vivantes
-Permet de visualiser plusieurs choses en meme temps
Microscopie électronique (voir les structures fines et l’intérieur des organites)
-Offre une résolution suppérioeure à la microscopie optique (____ vs_____)
-Utilise _______________________
-Deux types majeurs:
-M. élect. _____________
-M. élect. _____________
- 0,1 nm vs 200 nm
-des électrons plustôt que la lumière
-Transmission (TEM)
-balayage (SEM)
M. élect. à transmission (passe à travers) (TEM *tomographie)
- Processus complexe de préparation
-Chambre du microscope sous vide (sans air)
-Nécessite la ____________ et la ____________ de l’échantillon
-Faible pénétrance ____________ dans le _______ , donc il doit être _________.
-Échantillon déshydraté
- fixation et la coloration (pas de cellule vivante)
-des électrons dans le tissu , donc le tissu doit être mince
M. élect. à balayage (SEM)
-Similaire à TEM
-Permet d’obtenir une image 3D __________________
-Utilisé pôur analyser la surface de cellules or _______________ plutôt que de structures ______________
-de la surface de l’échantillon
-d’organismes
-intracellulaires
Tomographie (TEM)
-permet d’obtenir une image 3D
-Variation de l’angle de l’échantillion
