inactivación insercional vector Flashcards
el vector plasmídico pUC18/19 posee un gen de resistencia a ampicilina y gen LacZ. el MCS (sitio multiple de clonación) interrumpe el gen
Lac Z
cual es el papel q juega X-gal y por qué?
es el SUSTRATO de la B-galactosidasa-LacZ (5-bromo-4-cloro-3-indolil-B-D-galactopiranósido). es hidrolizado a galactosa 5-bromo-4-cloro-3-hidroxindol. este último es oxidado a 5,5´-dibromo-4,4´-dicloro-índigo, un COMPUESTO AZUL SOLUBLE
el color azul confirma la actividad de:
la B-galactosidasa
cual es el papel q juega el IPTG y por q?
es un INDUCTOR de la B-galactosidasa (isopropil-B-D-1-tiogalactopiranósido)
analogo no hidrolizable de la alolactosa q es un metabolito isómero de la lactosa, q dispara la transcripcion de operón lac
IPTG
cual es el papel q juega ampicilina y por q?
no permite el crecimiento de las colonias bacterianas q no portan el gen de resistencia q posee el vector uPC18
componentes q son disueltos en el medio de agar de una placa de cultivo
ampicilina, IPTG y X-gal
cual es el papel q juega el gen LacZ y por q?
codifica para la B-galactosidasa q hidroliza a X-gal y generan colonias azul. si se inserta un fragmento de adn en el MCS, se inactiva este gen y se vuelve incapaz de sintetizar la enzima B-galactosidasa funcional y da lugar a las colonias de color blanco
q características tienen las colonias de color azul?
su crecimiento indica q fueron transformadas con el uPC18 y poseen el gen de resistencia a ampicilina, Lac Z es activo porque el vector está vacio, no posee el inserto deseado
q caracteristicas tienen las colonias de color blanco natural?
su crecimiento indica q fueron transformadas con el uPC18 y poseen el gen de resistencia a ampicilina. El gen LacZ ha sido interrumpido por el inserto en el MCS. el producto génico (B-galactosidasa) es inactivo y no puede hidrolizar X-gal al ser inducida su producción por el IPTG. las colonias no presentan coloración azul
