Imunoensayos Flashcards
O que são imunoensaios ou teste sorológicos?
Técnicas laboratoriais para identificar anticorpos (IgG - cronico/IgM - aguda) ou antígenos.
Técnicas laboratoriais para identificar anticorpos (IgG - crônico/IgM - aguda) ou antígenos.
Quando busco um antígeno devo usar o que como base da análise? (e vice versa)
Quando busco antigeno: Uso anticorpo como base da analise
Quando busco o anticorpo: Uso o antigeno como base da analise
Qual é a janela de soroconversão?
15 a 30 dias = tempo que o corpo demora para encontrar o microorganismo e produzir anticorpos.
Tempo que o corpo demora para encontrar o microorganismo e produzir anticorpos.
Antes de 15 dias devo buscar o _____________.
Depois de 15 dias devo buscar o _____________.
Antígeno
Anticorpo
Quando busco o anticorpo, uso o antígeno como base da análise.
Epítopo
É o sítio onde o antígeno se liga ao anticorpo.
Antisoro
É um soro com diferentes anticorpos.
Avidez
Conjunto de múltiplas forças de ligação entre antígeno - anticorpo.
Defina sorologia
Análise de anticorpos (IgM e IgG) no soro ou outros fluidos.
O que são reações cruzadas?
Sítio combinatório do anticorpo capaz de reagir a diferentes antígenos ao mesmo tempo.
Exemplo de reações cruzadas:
VDRL teste treponemico não específico: Sífilis x virose:
Alto = Sífilis
Baixo = outra virose.
Sensibilidade em testes sorológicos
% de pacientes doentes com teste positivo detectados em uma população sabidamente infectada.
Especificidade em testes sorológicos
% de indivíduos não doentes com teste negativo em uma população sabidamente não infectada.
Janela imunológica
Tempo em que o indivíduo exposto ao antígeno leva até a produção de anticorpos - aprox. 30 dias.
Quais são os tipos de testes sorológicos-imunoensaios? (5)
- Reação de precipitação
- Teste de aglutinação
- Ensaios líticos
- Teste de imunofluorescência
- Teste de imunoenzimas/imunotestes
REAÇÃO DE PRECIPITAÇÃO OU IMUNOPRECIPITAÇÃO
Reação antígeno-anticorpo (que são solúveis) que se difundem em um meio semi-sólido (ágar ou agarose).
Quando há interação entre-os (vão em direcção um ao outro) forma-se os precipitados que é malha/trama de anticorpo-antigeno (linha visível, por que produz imunocomplexos insolúveis)
Efeito prozona X Efeito pós-zona
EFEITO PROZONA: É o excesso de anticorpo no material e pouco antigenos, não forma imunocomplexos visíveis. (RESULTADOS FALSOS NEGATIVOS).
PÓS-ZONA: Excesso de antígeno.
Imunodifusão radial dupla (Ouchterlony)?
- Exame qualitativo.
- Antígeno-anticorpo no gel de ágar, formando um arco/linha de precipitação visível ao olho nu.
- Tempo: 18-24hs
- Baixa sensibilidade.
- Se busca a especificidade do antígeno ao anticorpo & AUTO-ANTICORPOS.
Imunodifusão radial simples (MANCINI)
- Exame quantitativo.
- Anticorpo especifico esta incorporado ao ágar, adiciona o antígeno (busca a reação com o antígeno).
- Tempo: 48-72hrs.
- Halo é proporcional a quantidade de antígeno.
- Se busca imunoglobulinas séricos & proteínas de complemento.
Imunoeletroforese
Separa-se as proteínas séricas do sangue de acordo com o peso molecular.
TESTES DE AGLUTINAÇÃO
Reação antígeno-anticorpo especifico (avalio a presença do anticorpo quando adiciono o antígeno) forma-se um “agregado” ou “grumos” ou “floculações” que é visível ao olho nu.
Vantagens e desvantagens dos testes de aglutinação.
- Vantagens: + sensível / muito disponível / rápido.
- Desvantagen: - especifico por reações cruzadas
Aglutinação direta
BUSCA-SE O ANTÍGENO!
Nesta reação utilizam-se partículas antigênicas insolúveis em sua forma íntegra ou fragmentada: hemácias, bactérias, fungos e protozoários podem ser aglutinados diretamente por anticorpo.
Exemplo de hemoaglutinação direta.
Tipificação sanguínea (ABO ou Rh, antígeno D)
Aglutinação indireta
BUSCA-SE ANTICORPOS (IgM/IgG)
Isto pode ser feito através de contato direto com antígenos solúveis.
Exemplos de testes de aglutinação indireta (titulação dos anticorpos)
Exames para sifilis, doença de chagas, toxoplasmose, auto-anticorpos de doenças reumáticas…
O que é o teste de aglutinação do látex?
Esferas de poliestireno utilizadas como suporte para adsorção de proteínas e antígenos polissacarídeos.
Exemplos de teste de aglutinação do latex (5)
- Fator reumatoideo (FAN)
- Beta-hcg sanguíneo.
- Anti-estreptolisila O (ASLO)
- Proteína C reativa (PCR)
- Antígenos polissacarídeos bacterianos
Teste de inhibição da aglutinação do látex.
As reações de inibição da aglutinação são baseadas na competição entre antígenos particulados e solúveis por um número limitado de sítios combinatórios em moléculas de anticorpos. A inibição da aglutinação é um indicador de reação positiva.
Exemplo: BHCG na urina.
Teste de aglutinação de cristais de colesterol
O teste do VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) emprega cristais de colesterol que são sensibilizados com lecitina e cardiolipina para a pesquisa de anticorpos cardiolipídicos da sífilis ou na presença de auto-anticorpos da síndrome anti-fosfolípide primária ou secundária, neste caso em geral associada ao lupus eritematoso sistêmico
Coaglutinação
Busca reação antígeno-anticorpo para Staphylococcus aureus.
ENSAIOS LÍTICOS
Testes qualitativo que detecta a presença de anticorpo específico no soro do paciente utilizando antígeno, complemento e eritrócitos.
Passos da reação de fixação de complemento
- A presença de anticorpo específico no soro do paciente é detectada através da utilização de antígeno, complemento e eritrócitos.
- Se o anticorpo está presente, este irá se ligar ao antígeno específico e o imunocomplexo formado ativa a cascata do complemento pela via clássica e haverá consumo de complemento. 3. Na etapa seguinte, adiciona-se o sistema indicador da reação que consiste de hemácias de carneiro sensibilizadas com hemolisina (anticorpo anti-hemácias de carneiro obtido em coelhos).
- A medida da atividade hemolítica do complemento no sistema indicador permite determinar a presença ou não de antígeno ou anticorpo na mistura inicial e sua quantidade.
Na imunofluorescência o que é um conjugado?
Anticorpo ou Antígeno + Ligante
Na imunofluorescência, quais são os tipos de ligantes?
- Radioisotopo (Radioimunoensaio: Iodo - 125 )
- Fluorocromo (Imunofluorescência)
- Enzima (Imunoenzimaticos)
A ligação que une o Ag ou Ac ao ligante é uma ligação ______________.
Covalente.
TESTE DE IMUNOFLUORECÊNCIA:
Ligação de anticorpo ou antígeno a um ligante que emite fluorescência quando excitado.
Qual é a diferença entre imunofluorescência direta e indireta?
Direta identifica antígeno
Indireta identifica anticorpo.
Principais usos da imunofluorescência direta (4)
Busca antígenos para:
1. Influenza
2. Parainfluenza
3. Vírus sincicial respiratório
4. Adenovírus
Principais usos da imunofluorescência indireta (8)
Autoanticorpos para:
1. Vasculites sistêmicas (ANCA)
2. Treponema pallidum (FTA-Abs)
3. Tripanosoma cruzi
4. Chlamydia
5. EBV
6. Doença de Chagas
7. Leishamiois
8. Rubéola
Citometria de Fluxo
É a aplicação das técnicas de imunofluorescênica na identificação de determinadas células em suspensão, ou seja, na identificação de antígenos em células vivas.
TESTES IMUNOENZIMÁTICOS
Testes que usam a mudança de cor da interação da enzima com seu substrato para medir a reação entre antígeno e anticorpo.
Quando pedir um ELISA?
- Diagnóstico de infecções: presença de anticorpos específicos (HIV, Hep. B e C).
- Rastreamento de doenças: sífilis para gestantes.
- Acompanhamento de tratamento: carga viral do HIV.
- Detecção de alergias: presença de anticorpos IgE no sangue para alergias específicas (amendoim, pólen, mofo…)
ELISA Indireto
Busca-se o ANTICORPO.
Anticorpo secundário (é o anti-anticorpo!!!) marcado específicamente para o anticorpo primário. + Especifico.
O ELISA Indireto utiliza um anticorpo secundário marcado para detectar o anticorpo primário.
Qual é o procedimento básico do ELISA Indireto?
1.Antígeno sólido no fundo do poço + Lavagem de bloqueio
2.Adiciona-se o soro líquido do paciente (com anticorpos primários)
3.Adiciona o conjugado (anti-anticorpo ligado á enzima)
4.Adiciona o substrato cromogenico para a leitura no espectofotrometro
O teste busca o anticorpo no soro do paciente.
ELISA Direto
BUSCA ANTIGENO.
Identifica se o indivíduo foi exposto a uma doença.
Não tem antianticorpo (anticorpo secundário). A enzima está no anticorpo primário.
O antígeno é fixado a um suporte sólido e o anticorpo primário, ligado a uma enzima, é utilizado.
O que é o ELISA Sanduíche?
Observa-se o antígeno entre o anticorpo de detecção (anticorpo primário) & o anticorpo de captura (anti- anticorpo ou anticorpo secundário).
Busca-se o ANTIGENO que reaciona com o anticorpo 1° e o anticorpo 2°.
É possível fazer a detecção simultânea de imunoglobulinas de diferentes classes.
É o mais sensível para detectar doenças na fase aguda.
Qual é a melhor abordagem ELISA para detectar a fase aguda da doença?
ELISA Sanduíche (infecção recente de IgM)
É ideal para infecções recentes, como a detecção de IgM.
O que caracteriza o ELISA por Competição?
A presença de antígenos é revelada pela competição com um antígeno marcado.
Esse método é utilizado principalmente quando o antígeno testado possui poucos epítopos de ligação ou é muito pequeno.
Este método é utilizado quando o antígeno testado possui poucos epítopos de ligação ou é muito pequeno.
Quais são as vantagens da Imunocromatografia?
Não necessita de ambiente laboratorial e fornece resultados rápidos
Busca-se antígenos e anticorpos (IgG ou IgM).
O que se busca da imunocromatografia?
Busca-se ANTIGENOS & ANTICORPOS (IgG ou IgM).
Western-Blot
Método para identificar proteínas e glicoproteínas reconhecidas por anticorpos.
Eletroforese em gel (separa proteínas conforme o seu peso molecular) + Imunotranferência para o leitor (papel de nitrocelulose).
Utiliza eletroforese em gel e imunotransferência para confirmação de infecções como HIV.
Qual é o método utilizado para confirmar infecções por HIV?
Western-Blot
Este método é considerado um teste confirmatório após resultados positivos de outros testes.
