Fusion/Fluorescence

Question 1

Quels sont les processus impliquant fusion mbneR ?

Answer 1

• Exocytose
• Transport cellulaire (bourgeonnement de l’app de Golgi)
• Infection virale (virus a pr but se reproduire)
• Fertilisation

Question 2

Conditions de fusion mbneR ?

Answer 2

• 2 étapes minimales nécessaires
• Interactions spécifiques
• Détection expérimentale de la fusion
• Agents fusogènes
• Ex : SNARES, hémaglutinine du virus de grippe

Question 3

Quelles sont les détections expérimentales de fusion ?

Answer 3

• par fluorescence
• par μscope électronique

Question 4

Relation d’ordre entre lambda exc/abs (longueurs d’onde d’absorption ou d’excitation) et lambda em (longueur d’onde d’émission) ?

Answer 4

Les longueurs d’ondes d’émission seront tjs + grandes que celles d’absorption/d’excitation.

Note : pr voir lequel = + grand, regarde l’axe de lambda

Question 5

Principe du FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer)

Answer 5

Qd on 2 mlc (la 1re déjà excitée) : transfert d’E résonance entre état des mlcs i.e. au lieu d’1 désexcitation, l’E de la 1re mlc sera transféré à la 2e mlc & la désexcitation se fera par l’accepteur (2e mlc).

Question 6

Conditions de FRET

Answer 6

• Recouvrement des longueurs d’ondes
• Proximité spatiale (R < 10nm), si SUP, pas de transfert de fluorescence

Avec R = longueur critique. Elle n’est pas la même pr toutes les mlcs

Question 7

Hypothèse des pédoncules (“stalk”)

Answer 7

Mise en contact locale des feuillets externes → former couche particulière fortement courbée (négativement)

Ds région à forte courbure négative → forme de cône inversé fortement favorisée

Question 8

LysoPC ?

Answer 8

Lipide de paramètre de forme < ⅓. → défavorise courbure négative donc favorise courbure positive.
→ bloque fusion mbneR

Question 9

Pr 1 agrégat de type micelle, paramètre de forme est…?

Answer 9

Paramètre de forme ≤ ⅓.

Question 10

Comment BSA agit sur fusion ?

Answer 10

L’ajout de BSA en présence de lysoPC permet d’extraire lysoPC à mbne (car lysoPC se colle à BSA) → la fusion peut donc continuer.

Question 11

Fusion ?

Answer 11

→ Processus SPÉCIFIQUE & rapide (ex synapse) donc extrêmement bien contrôlé

Question 12

F° SNARE ?

Answer 12

• Assiste fusion mbneR
• Permettent contrôle & spécificité ds es événements de fusion

Question 13

Que porte les virus pr pouvoir se fusionner aux mbnes ?

Answer 13

Peptide de fusion (enfuit ds coeur protéique car hydrophobe)

Si prot = repliée, peptide non exposé puis changement de l’envt de prot → changement conformationnel de prot → peptide exposé → ppté hydrophobe permet de s’enfuir ds mbne hôte

Question 14

Détergent ? Que permet détergent ?

Answer 14

Amphiphiles qui ont 1 f° solubilisante

Question 15

Ds 1 événement de fusion, accepteur & donneur ?

Answer 15

• Popu accepteur : celle qui porte complexe t - SNARE
• Popu donneur : celle qui porte v - SNARE

Question 16

Auto-extinction ?

Answer 16

Lors d’1 très forte [fluorophore], on excite fluorophore par ex à 500nm → il émet de 500 nm a 650 nm mais cela se confond avec spectre d’absorption donc il va s’auto-absorber ce qu’il a émis.

=> fluorescence observée < fluorescence attendue.

Question 17

Comment vérifier s’il n’y a pas auto-extinction ?

Answer 17

On va diluer l’échantillon en divisant la [C] par 2 (en rajoutant même volume de tampon qu’au départ). Puis on fait des mesures.

Il faut diluer jusqu’à atteindre qqchose linéaire avec courbe.