F1 Méthode d'étude Flashcards
pouvoir séparateur ME
0,2 nm = 2 A°
pouvoir séparateur MO
0,2 µm à 200 nm
humain a combien de cellules ?
60 000 milliards pour 60 kg
MEB déshydratation
Bain alcool deg, puis bain CO2 liquide, par passage point critique CO2 à 32° et 73 ATM, puis dessication par lyophilisation
imagerie cellulaires
Microscopie, cytométrie
colorant pour cytoplasme
colorant acide
Hybridation in situ
avec sonde nucléique pour explorer ADN et ARN, utilisation sonde nucléique double brin marquée pour detecter et localisé séquence spécifique. dénaturation 95° ,hybridation, lecture, marquée avec Isotope radioactife, ou non, fluorochrome etc
MO Inclusion
durcir, après déshydratation bain alcool 100°, puis bain Toluène ou xylène. Ou paraffine fondue a 56°
MayGrunwaldGiemsa MGG
cellule sanguine sur frottis Neutrophile, Eosinophile, Basophile
Histoenzymologie
réaction enzymatique sur préparation histologique, déceler et localiser activité enzymatique, MAIS PAS LES ENZYMES ELLE MEME. peroxydase + eau = brun noir
Histochimie
réaction chimique sur préparation histologique, déceler et localiser sub organique et minérale . coloration glucide avec PAS rouge pourpre, Coloration ADN avec Feulgen Rossenbeck rouge p
MO montage
après coloration et re déshydratation bain alcool. possible avec de la résine
longueur max des cellules
neurones moteurs 1 m, fibre musculaires 40 cm
hématéine
noyaux violet
Hématoxyline
noyaux brun
MEB métallisation
dépot 10 nm d’or palladium pour réfléchir electrons
coloration morte
bleu trypan
autoradiographie
avec précurseur des macromolécules marqué avec isotopes radioactif
MET coupe
ultrafine sur grille cuivre, 50 à 80 nm. avec microtome diamant
Trichrome MASSON
Hématoxyline, Fuchsine acide, Vert lumière
en survie
ex vivo
Frottis pour
cellules liquides, libre / produit de grattage sur lame verre
Vert lumière
collagène bleu vert
pouvoir séparateur oeil
0,2 mm à 200 µm
MO Fixation
en routine Paraformaldéhyde ou formol, Acide acétique, liquide Bouin (formol+ acide picrique) fluo
def cellule
unité fondamentales et fonctionnelles de la vie
en culture
in vitro
Tissus fondamentaux ?
5, Epithéliums, conjonctifs, sanguin, musculaire, nerveux
cytométrie approche ?
approche quantitative, mesure a l’échellon cellulaire
MET inclusion
déshydratation dans bain alcool, puis dans bain oxyde propylène. ou résine synthétique dur
coloration vivantes
sonde fluorescente
Colorant pour ADN
colorant basique
safran
collagène jaune
Etape MO
5, Fixation, Inclusion, Coupe(microtomie), Coloration, Montage
échantillon coupe normal
fréquent, fine ou ultrafine, 3 à 5 µm diamètre après fixation et inclusion
def histo
étude des tissus au microscope
taille cellule
5 à 20 µm en moyenne, Globule rouge 7 µm
empreinte pour
cellule apposition, formation tranche
Fuchsine acide
cytoplasme rouge
Ac Fluorescéine FITC
vert, excitation 488 nm, émission 520 nm
MET fixation instantané
fixateur ; glutaraldéhyde dans tampon cacodylate ou phosphate. post fixation avec acide osmique
MET coloration
augmenter contraste, image N&B
Etape MET
4 Fixation instantané, Inclusion, Coupe, Coloration. sous vide
Immunohistologie
avec Ac pour reconnaitre 1 protéine
Ac Phycoérythrine PE
rouge, excitation 488 nm, émission 580 nm
MO coupe
sur lame verre, 2 à 10 µm avec microtome acier. ou cryostat
MO coloration
augmenter contraste à faire après déparaffinage et réhydratation
Etape MEB
3, Fixation, Déshydratation, Métallisation
conservation ou ?
étude à 37° pour culture longue
éosine
cytoplasme rose
MEB Fixation
Fixation avec Glutaraldéhyde avec cacodylate et phosphate, PAS DE POST FIX