Extraction Et Separation Des Biomolécules Flashcards
Lyse des C.
Extraction et separation des macromolécules
Études des protéines par Electophorèse
VRAI.
Extraction et separation des biomolécules.
Extraction, fractionnement et purification.
Lyse des C.
Mécanique: potter ou broyeur électrique
Physique: sonification (US/cavitation)
Chimique/enzymatique : lyse alcaline
VRAI
Cocktails antiprotéases —> lysosome/bactérie
Faux.
LYSOZYMES/bactérie
Solubilisation, Précipitation des protéines
Et fractionnement par ultracentrifugation et par chromatographie.
Yaaa.
Solubilisation des membranes,
_ Protéines solubles/extrinsèques —> tampon aqueux salin
_ Protéines intrinsèques non solubles —> détergent/tensioactif (micelle)
VRAI
DETERGENT
Détergents ioniques : anionique, desocycholate de Na
cationique, chlorure de benzalkanium (ammonium q.)
zwitterion, CHAPS
Détergents non ioniques—> polyalcools ou polyétheres (TritonX100, nonidet P40)
—> glucosides (n-octylglucopyranoside)
VRAI
Précipitation des protéines :
P. Non dénaturantes
—> par les sels neutres (Relargage) : sulfate d’ammonium
—> au pI, protéines zwitterions
—> par les AC, IP ou co-IP
P. Dénaturantes => par les acides, (acides trichloroacétiques (TCA)) => par la T*, (solubilisation et dénaturation) => par les solvants organiques, (éthanol, acétone, isopropanol,…)
VRAI
Fractionnement par ultracentrifugation en gradient,
— zonal: (taille) = protéine [kDa]
— isopycnique: (densité) = lipoprotéines [CsCl2]
VRAI.
Fractionnement des protéines par chromatographie.
Exclusion stérique (gel-froid)
Échange d’ions
Affinité X et biologique
VRAI
Electrophorèse :
—> méthode analytique et préparative
FAUX
Méthode préparative et SEPARATIVE.
Séparation des protéines par non dénaturantes,
____ protéinate (COO- protéines)
____ Ep de Zone sur gel d’agarose de SDS 0 dénaturant
VRAI
Séparation des protéines par EP dénaturantes :
—> PAGE-SDS
avec réducteur : B-mercaptoéthanol ou Dithiothréitol (DTT)
—> SDS ou LDS
(laurysulfate ou dodécylsulfate de sodium)
VRAI
Méthode de coloration des gels :
—>En général, Bleu de Coomassie.
Coloration et visualisation des protéines per ex.
VRAI
G250 : polypeptides
R250 : protéines
VRAI
(Brillant Blue)
Méthode de détection spécifique,
—>Radio-marquage (AA) ; autoradiographie
—>Marquage après transfert -> Western blot
VRAI
