Examen TP Flashcards
Quelles-sont les caractéristiques d’un antigène qui déterminent son immunogénicité? (4)
1) Caractère étranger
2) Taille moléculaire
3) Sensibilité à l’apprêtement
4) Hétérogénéité chimique
La réponse immunitaires dépend également de l’hôte, quels critères peuvent influencer cette dernière? ( 3)
1) Type d’animal
2) Dose et voie d’administration
3) Utilisation d’un adjuvant.
On choisit l’animal selon 4 critères, quels sont-ils?
1) Le volume d’antisérum requis
2) La relation phylogénétique entre l’espèce choisie et la protéine immunogène
3) La fonction effectrice des anticorps produits (capacité à lier le complément, etc)
4) L’utilisation prévue des anticorps produits
Comment se nomment es deux types de lignées des espèces animales utilisées pour étudier la réponse immunitaire?
A) Produites à partir d’accouplement entre frères et soeurs pendant plusieurs générations. Populations pures composées d’homozygotes identiques, permettant d’obtenir des résultats expérimentaux homogènes.
B) Sont maintenues pour reproduire la diversité génétique d’une population naturelle d’hétérozygotes
Comment se nomment es deux types de lignées des espèces animales utilisées pour étudier la réponse immunitaire?
A) Lignées Syngéniques
B) Lignées allogéniques, ou non-consanguines
Faites les bonnes associations:
- Voie intraperitonéale
- Voie sous-cutanée
- Voie intraveineuse
- Injecter Ag soluble ou insoluble dans un site ayant un bon drainage lymphatique.
- Souvent préféré chez la souris. Permet d’injecter un grand volume d’immunogène.
- Souvent réservé à la dose de rappel. Conduit l’Ag directement à la rate, au foie et aux poumons, pour une réponse rapide et forte.
Faites les bonnes associations:
- Voie intraperitonéale et 5. Souvent préféré chez la souris. Permet d’injecter un grand volume d’immunogène.
- Voie sous-cutanée et 4. Injecter Ag soluble ou insoluble dans un site ayant un bon drainage lymphatique.
- Voie intraveineuse et 6. Souvent réservé à la dose de rappel. Conduit l’Ag directement à la rate, au foie et aux poumons, pour une réponse rapide et forte.
Pourquoi utiliser un adjuvant?
Pour augmenter le caractère immunogène d’une molécule jugée faiblement immunogène, ou disponible en petite quantité.
Quel adjuvant a été utilisé pour l’immunisation primaire dans le cadre du laboratoire?
Quil-A, saponine qui vient de l’écorce d’un arbre Quillaja saponaria molina, efficace avec les protéines membranaires.
Quels types d’anticorps seront produits lors de la réponse secondaire?
IgG
Par quel mécanisme s’opère la transition entre les IgM de la réponse primaire vers les IgG de la réponse secondaire?
La commutation de classe. L’affinité antigénique est conservée.
Qui suis-je?
Une solution dont tous les anticorps sont produits par un même clone de lymphocyte B, spécifique à un seul et même épitope de la protéine.
Solution d’anticorps monoclonale
À quoi a servi la méthode de Bradford?
Déterminer la concentration de protéines solubilisées en se basant sur l’intensité de la couleur donnée par le Bleu de Coomassie absorbé.
Pourquoi a-t-on utilisé l’ASB pour produire une courbe standard?
Parce que notre protéine purifiée n’était pas disponible.
À quoi sert le blanc dans la méthode de Bradford?
Sert de contrôle, sans échantillon expérimental. Permet d’évaluer le bruit de fond attribuable aux éléments communs qui se retrouvent dans tous les échantillons. On soustrait ensuite ce bruit de fond aux valeurs expérimentales obtenues.
Vrai ou faux, suite à l’immunisation secondaire, la latence est très courte et suivie d’une réponse rapide et prolongée, traduite par une sécrétion d’anticorps de haute affinité pour l’antigène utilisé.
Vrai.
Où se retrouvent les cellules immunitaires impliquées dans la réponse humorale? (2)
1) Organes lymphoïdes secondaires (rate et ganglions)
2) Sang et lymphe
Quel type de centrifugation utilise-t-on pour isoler les cellules immunitaires vivantes de la rate?
Isopycnique, qui veut dire sur une solution de même densité que les cellules qu’on cherche à isoler. Nous avons utilisé le Lympholyte-M.
Quelle étape doit-être faite avant la suspension des cellules de la rate dans le Lympholyte, à cause de la haute teneur membranaire de cette dernière?
Elle doit être filtrée suite à son homogénéisation.
Suite à la centrifugation, où se retrouvent les débris, cellules mortes et érythrocytes?
Dans le culot.
Qu’est-ce qui est utilisé pour identifier les glycoprotéines membranaires spécifiques des différents lymphocytes en cytométrie de flux?
Des anticorps monoclonaux spécifiques couplés à des fluorochromes.
Quelles-sont les plusieurs mesures qui peuvent être prises simultanément par la cytométrie en flux?
Taille, granularité et intensité de fluorescence.
Quels-sont les trois systèmes qui composent la cytométrie en flux?
1) La fluidique
2) L’optique
3) L’électronique
À quoi le contrôle de cellules non marquées sert-il en cytométrie en flux?
Sert à distinguer l’autofluorescence de la fluorescence des fluorochromes, ce qui détermine le bruit de fond attribué exclusivement à la fluorescence naturelle.
Qu’est-ce que le déversement de fluorescence?
Quand une partie du spectre d’émission d’un fluorochrome est capté par le filtre pour une autre fluorochrome.
Par quoi le déversement est-il causé et comment le corrige-t-on?
Causé par le chevauchement physique des spectres d’émission.
La quantité de déversement d’un fluorochrome est une fonction linéaire qui permet de faire la correction des niveaux de signaux moyens mesurés par la compensation.
Wow ayoye je me souviendrai pas de ça.
À quoi sert l’hématimère?
Dénombrer les cellules d’une solution.
Quelle est la différence entre la solution de Türk et le Bleu de Trypan pour la coloration et le décompte cellulaire?
La solution de Türk permet d’énumérer toutes les cellules en colorant les noyaux. Le Bleu de Trypan est internalisé par les cellules mortes, permet donc de déterminer le pourcentage de viabilité.
À quoi sert le test ELISA?
Titre les anticorps produits par la souris et dépister la production d’anticorps.
Quelles-sont les 5 étapes principales pour le ELISA?
- Absorption de l’Ag sur le support ( se lie au polystyrène de façon non covalente et pH-dépendante)
- Blocage des sites résiduels à l’ait du lait. (élimination du bruit de fond
- Antisérum (les anticorps se fixent à l’Ag)
- Anticorps secondaires (Anti-Ig de souris conjugués à la peroxydase de raifort
- Révélation (OPD + peroxyde) (coloration jaune dépendante de la concentration d’Ac, lue à 492 nm)
Qu’est-ce que combine l’immunoblot?
Résolution de l’électrophorèse
et la spécificité de l’immuno-détection
Quelle-est la matrice non-homogène utilisée pour la migration des molécules? Et quel facteur vient homogénéiser la charge de toutes les molécules de la solution?
La matrice est un gel de polyacrylamide et le SDS vient homogénéiser la charge.
Vrai ou faux. La détection sur membrane de PVDF fonctionne comme un ELISA.
Vrai. Blocage de membrane, anticorps primaire, anticorps secondaire, révélation.
Quelles-sont les informations qu’on peut acquérir sur les protéines à l’aide d’un immunoblot? (4)
Présence des protéines
Quantité
Poids moléculaire
Efficacité de purification
Combler les trous:
Cette technique repose sur la ________ des monomères
_____________ par l’incorporation de co-monomères
bi-fonctionnels de ______________ créant un tamis
tri-dimensionnel.
Combler les trous:
Cette technique repose sur la POLYMÉRISATION des monomères D’ACRYLAMIDE par l’incorporation de co-monomères bi-fonctionnels de BISACRYLAMIDE créant un tamis tri-dimensionnel.
Que dicte la concentration d’acrylamide dans le gel?
La longueur des chaines d’acrylamide
Que dicte la concentration de bisacrylamide dans le gel?
L’étendue de la réticulation des chaines d’acrylamides.
Que signifie %C?
Le % de monomères totaux de bisacrylamide dans la solution.
Que signifie %T?
Le % de monomères provenant de l’acrylamide + la bisacrylamide.
Qu’est-ce que les concentrations influencent dans le gel? (4)
Densité, élasticité, taille des pores et force mécanique.
Quels-sont les catalyseurs de la polymérisation de l’acrylamide et du bisacrylamide?
Persulfate d’ammonium (APS) et TEDMED
À quoi sert le persulfate d’ammonium (APS)?
Fourni des radicaux libres qui catalysent la polymérisation de l’acrylamide et de la bisacrylamide.
Qui suis-je?
J’accélère le taux de formation de radicaux libres à partir du persulfate d’ammonium (APS).
TEDMED
Qu’est-ce qui fait que l’APS doit être préparée tout juste avant l’usage?
Sa propriété hygroscopique, qui cause sa dégradation presque immédiate au contact de l’eau.
Qu’est-ce qui influence la polymérisation du gel? (3)
Facteurs physiques et chimiques
Qualité de l’acrylamide
Variables expérimentales
Qu’est-ce qui influence la polymérisation du gel? (3)
Facteurs physiques et chimiques
Qualité de l’acrylamide
Variables expérimentales
Quels facteurs physiques et chimiques influencent la polymérisation du gel? (3)
Température
pH
Oxygène
Quelles variables expérimentales influencent la polymérisation du gel? (3)
Temps
Additif dans le gel (SDS)
Catalyseurs et leur concentration
Vrai ou faux.
On doit toujours utiliser des solution à haute température pour le gel d’électrophorèse et de l’eau normale.
Faux.
Température de la pièce et eau distillée ou désionisée et dégazée.
Quelle affirmation est fausse:
A) La polymérisation d’un gel est exothermique
B) La polymérisation d’un gel peut être influencée par la température ambiante
C) La polymérisation d’un gel peut être influencée par l’oxygène atmosphérique
D) La polymérisation ne dure que 15-20 minutes
Quelle affirmation est fausse:
D) La polymérisation ne dure que 15-20 minutes
Faux, se gélifie au bout de 15-20 minutes mais continue à polymériser pendant environ 2h.
Qu’est-ce que le Rf?
Mobilité relative des protéines. (mobilité d’une protéine/ mobilité du front de migration)
Le Rf est inversement proportionnel à quoi?
Le logarithme du poids moléculaire.
Vrai ou faux. On doit choisir un % d’acrylamide qui permet à la protéine de migrer jusqu’au 3/4 du gel.
Faux, jusqu’au tiers du gel dans le temps requis pour le front de migration pour atteindre le bas du gel.
Trouver l’affirmation fausse:
A) On doit choisir un gel épais pour le transfert sur PVDF
B) Le % d’acrylamide doit permettre la manipulation du gel
C) Nous avons utilisé la méthode de Laemmli, dénaturant et réducteur
Trouver l’affirmation fausse:
A) On doit choisir un gel épais pour le transfert sur PVDF
Faux, mince mais manipulable,
Compléter les trous:
Le _______ est un puissant dénaturant. Il est un détergent _________.
Compléter les trous:
Le SDS est un puissant dénaturant. Il est un détergent INONIQUE.
Que permet le SDS? (2)
Solubiliser les protéines de l’échantillon
Appliquer une charge négative constante par unité de masse, en s’enrobant autour de la structure du polypeptide
Qu’est-ce qui permet la réduction des ponts de disulfure?
l’ajout de 2-mercaptoéthanol et le chauffage
Qui suis-je?
Permet aux échantillons de se compacter et de se concentrer avant de pénétrer dans le gel de séparation.
Gel de compactage
Qu’est-ce qu’on ajoute au pour faciliter le chargement des protéines sur le gel?
Glycérol et bleu de promophénol dans le tampon réducteur. Le glycérol augmente la densité, ce qui facilite le chargement de l’échantillon dans les puits. Le bleu permet de suivre l’évolution de la migration.
Qu’est-ce qui fait le front de migration?
bleu de promophénol, qui est très petit et aionique et migre donc rapidement.
Qu’est-ce qui cause la précipitation de protéines dans le gel lors de la coloration?
L’acide acétique 10%, l’eau distillée 50% et l’éthanol 40% dans la solution de coloration, pour éviter que les protéines fuient du gel
Vrai ou faux,
On peut faire le transfert sur membrane de PVDF pour détection et la coloration des protéines sur le gel avec le même échantillon.
Faux.
La coloration est irréversible et on peut faire un ou l’autre seulement.
