Examen final Flashcards
Quelles sont les 5 catégories de techniques de diagnostic de laboratoire?
- Méthode microscopique
- Méthode biologique
- Méthode biochimique
- Méthode immunologique
- Méthode moléculaire
De quoi est composé un nucléotide?
Il comprend:
* Désoxyribose (un sucre avec 5 carbones)
* Un groupement phosphate (attachée au C5)
* Une base azotée (attachée au C1)
Quels sont les 3 partie d’un nucléotide dans la photo suivante et quel est le nom de ces parties?
- À gauche il y a le groupement phosphate
- Au centre c’est le désoxyribose (sucre)
- À droite c’est une base azotée
Donne-moi une description de la structure de l’ADN
- La molécule d’ADN est composée de 2 brins
- Ils sont placés de façons à ce que les bases azotées soient l’une vis-à-vis l’autre. Les 2 brins sont antiparallèle
Comment fonctionne le mécanisme de réplication de l’ADN?
1) Une hélicase déroule la double hélice parentale.
2) Les molécules de protéines fixatrices d’ADN monocaténaire stabilisent les brins matrices qui ont été séparés.
3) Le brin directeur est synthétisé de façon continue dans le sens 5’ vers 3’ par l’ADN pol III.
4) La primase commence la synthèse de l’amorce d’ARN pour le cinquième fragment d’Ozaki.
5) L’ADN pol III termine la synthèse du quatrième fragment. Quand elle atteint l’amorce d’ARN sur le troisième fragment, elle se détache et commence à ajoute des nucléotides d’ADN à l’extrémité 3’ de l’amorce du cinquième fragment.
6) L’ADN pol I enlève l’amorce de l’extrémité 5’ du deuxième fragment et le remplace par des nucléotides d’ADN qu’elle ajoute un à un à l’extrémité 3’ du troisième fragment. Le remplacement du dernier nucléotide d’ARN par l’ADN laisse une extrémité 3’ libre au squelette désoxyribose phosphate.
7) L’ADN ligase joint l’extrémité 3’ du second fragment à l’extrémité5’ du premier fragment.
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Qu’est-ce qu’un fragment d’Okazaki?
C’est un petit brin d’ADN qui est synthétisé sur le brin d’ADN discontinu (brin d’ADN qui est synthétisé à l’inverse du brin directeur) lorsqu’ils sont mis bout à bout, les brins d’Okazaki forment le nouveau brin d’ADN.
Quel est le rôle de cette enzyme: ADN polymérase I et III?
- ADN polymérase III : Elle forme une nouvelle chaine d’ADN en ajoutant des nucléotides à partir d’un brin matrice existant
- ADN polymérase II: Elle enlève les nucléotides d’ARN de l’amorce et les remplace par des nucléotides d’ADN
Qu’est-ce que l’ARN?
Macromolécules constitué de nucleotides d’ARN.
Qu’est-ce qu’un nucléotide?
En résumé, l’assemblage de nucléotides d’une forme particulière forme les brins d’ADN et d’ARN.
Quel est le rôle de l’ADN ligase?
Elle sert à lier les fragments d’Okazaki sur le brin discontinu pendant la réplication. Elle assure donc la continuité de la nouvelle chaine d’ADN.
Quel est le rôle de l’enzyme ADN hélicase?
Elle sert à défaire la double hélice d’ADN en séparant les brins complémentaires.
Quel est le rôle de l’enzyme primase?
Elle synthétise une amorce d’ARN à l’extrémité 5’
Donne-moi une définition du terme “gène”
C’est comme une recette ou un ensemble d’instructions pour la production d’une protéine spécifique ou la régulation d’une fonction cellulaire particulière.
Explique la technique de la PCR:
C’est une technique qui permet de répliquer rapidement des portions d’une séquence sur un brin d’ADN.
Mettre en relation la technique de la PCR et le processus de réplication de l’ADN
- L’ADN hélicase dans le processus de réplication c’est comme chauffer pour briser les liaisons hydrogènes
- Les protéines fixatrices d’ADN c’est comme le surplus d’amorces
- L’amorce d’ARN c’est l’équivalent des 2 amorces synthétiques
- L’ADN polymérase équivaut à la TAQ
- Les nucléotides triphosphate c’est l’équivalent des dATP, dCTp, dTP et dGTP pour la technique de la PCR
Quelles sont les 3 étapes du cycle d’amplification?
- Dénaturation : on chauffe pour dénaturer l’ADN et séparer les 2 brins complémentaires
- Hybridation des amorces : on baisse la température à un degré spécifique. À cette température, les amorces d’ADN spécifiques à la séquence cible se lient à chaque brin simple d’ADN, en fournissant un point de départ pour l’amplification
- Prolongation des amorces : on augmente la température pour l’activité de la TAQ. Celle-ci utilise les amorces pour synthétiser des nouveaux brins d’ADN
Qu’est-ce qu’une amorce?
C’est une courte séquence d’ADN qui est utilisée comme point de départ pour la synthèse d’une nouvelle chaine d’ADN.
Qu’est-ce que les dntp’s
Ce sont des petits brins d’ADN (des nucléotides) qui flottent dans le microtube et qui seront pris pour faire le nouveau brin complémentaire d’ADN.
Qu’est-ce que la TAQ?
C’est l’ADN polymérase, mais en version synthétique. Elle sert à attacher les nucléotides à l’extrémité du brin en formation de 5’ vers 3’
Expliquer le processus du fonctionnement de l’électrophorèse sur gel
L’ADN porte des charges négatives. Si on la soumet à un courant électrique, elle sera attirée vers la borne positive. Plus le fragment d’ADN est court, moins il est ralenti par le réseau de fibres dans le gel; il parcourt donc une plus grande distance sur le gel.
Pourquoi il est nécessaire de colorer les échantillons avec du bleu de bromophénol avant la mise en puit?
Vérifier que l’échantillon est bien dans le puit et éviter qu’il ne dépasse le gel si on le met sous tension trop longtemps.
Quelles sont les différentes applications de la PCR?
- Taxonomie (différencier 2 espèces trop semblable pour l’identification avec des critères morphologiques)
- Médecine (recherche d’une pathologie)
- Phytopathologie (recherche d’une infection en particulier, avoir la certitude que c’est la bonne maladie qu’on a diagnostiqué)
- Santé publique (covid)
Comment fait-on pour extraire l’ADN d’une bactérie?
- On doit prendre un échantillon de la bactérie en question et la cultiver sur un milieu de culture.
- Préparer des broyats afin de pouvoir amplifier l’ADN
- On doit faire la lyse cellulaire. Ça veut dire qu’on doit briser les paroi des cellules pour libérer l’ADN qu’elles contiennent.
- Dégradation des protéines et solubilisation des lipides et des protéines: on doit dégrader les protéines et les lipides qui pourraient venir interférer avec l’isolement de l’ADN en les solubilisant dans l’eau.
- Précipitation de l’ADN: l’éthanol permet de faire descendre l’ADN dans le fond du tube, puisque l’ADN N’EST PAS SOLUBLE DANS L’ÉTHANOL.
- Séchage: l’ADN est mis dans un SpeedVac qui permet de sécher le restant d’éthanol afin qu’il ne reste que l’ADN.
- Réhydratation: il faut réhydrater l’ADN dans de l’eau pour pouvoir le déplacer dans divers contenants.
Comment fait-on pour colorier et photographier un gel?
Il faut mettre du bromure d’éthidium. Celui-ci s’insère entre les brins complémentaire de l’ADN et en présence de lumière UV, cette molécule devient fluorescente.
