Examen final Flashcards
Quelles sont les 5 catégories de techniques de diagnostic de laboratoire?
- Méthode microscopique
- Méthode biologique
- Méthode biochimique
- Méthode immunologique
- Méthode moléculaire
De quoi est composé un nucléotide?
Il comprend:
* Désoxyribose (un sucre avec 5 carbones)
* Un groupement phosphate (attachée au C5)
* Une base azotée (attachée au C1)
Quels sont les 3 partie d’un nucléotide dans la photo suivante et quel est le nom de ces parties?
- À gauche il y a le groupement phosphate
- Au centre c’est le désoxyribose (sucre)
- À droite c’est une base azotée
Donne-moi une description de la structure de l’ADN
- La molécule d’ADN est composée de 2 brins
- Ils sont placés de façons à ce que les bases azotées soient l’une vis-à-vis l’autre. Les 2 brins sont antiparallèle
Comment fonctionne le mécanisme de réplication de l’ADN?
1) Une hélicase déroule la double hélice parentale.
2) Les molécules de protéines fixatrices d’ADN monocaténaire stabilisent les brins matrices qui ont été séparés.
3) Le brin directeur est synthétisé de façon continue dans le sens 5’ vers 3’ par l’ADN pol III.
4) La primase commence la synthèse de l’amorce d’ARN pour le cinquième fragment d’Ozaki.
5) L’ADN pol III termine la synthèse du quatrième fragment. Quand elle atteint l’amorce d’ARN sur le troisième fragment, elle se détache et commence à ajoute des nucléotides d’ADN à l’extrémité 3’ de l’amorce du cinquième fragment.
6) L’ADN pol I enlève l’amorce de l’extrémité 5’ du deuxième fragment et le remplace par des nucléotides d’ADN qu’elle ajoute un à un à l’extrémité 3’ du troisième fragment. Le remplacement du dernier nucléotide d’ARN par l’ADN laisse une extrémité 3’ libre au squelette désoxyribose phosphate.
7) L’ADN ligase joint l’extrémité 3’ du second fragment à l’extrémité5’ du premier fragment.
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Qu’est-ce qu’un fragment d’Okazaki?
C’est un petit brin d’ADN qui est synthétisé sur le brin d’ADN discontinu (brin d’ADN qui est synthétisé à l’inverse du brin directeur) lorsqu’ils sont mis bout à bout, les brins d’Okazaki forment le nouveau brin d’ADN.
Quel est le rôle de cette enzyme: ADN polymérase I et III?
- ADN polymérase III : Elle forme une nouvelle chaine d’ADN en ajoutant des nucléotides à partir d’un brin matrice existant
- ADN polymérase II: Elle enlève les nucléotides d’ARN de l’amorce et les remplace par des nucléotides d’ADN
Qu’est-ce que l’ARN?
Macromolécules constitué de nucleotides d’ARN.
Qu’est-ce qu’un nucléotide?
En résumé, l’assemblage de nucléotides d’une forme particulière forme les brins d’ADN et d’ARN.
Quel est le rôle de l’ADN ligase?
Elle sert à lier les fragments d’Okazaki sur le brin discontinu pendant la réplication. Elle assure donc la continuité de la nouvelle chaine d’ADN.
Quel est le rôle de l’enzyme ADN hélicase?
Elle sert à défaire la double hélice d’ADN en séparant les brins complémentaires.
Quel est le rôle de l’enzyme primase?
Elle synthétise une amorce d’ARN à l’extrémité 5’
Donne-moi une définition du terme “gène”
C’est comme une recette ou un ensemble d’instructions pour la production d’une protéine spécifique ou la régulation d’une fonction cellulaire particulière.
Explique la technique de la PCR:
C’est une technique qui permet de répliquer rapidement des portions d’une séquence sur un brin d’ADN.
Mettre en relation la technique de la PCR et le processus de réplication de l’ADN
- L’ADN hélicase dans le processus de réplication c’est comme chauffer pour briser les liaisons hydrogènes
- Les protéines fixatrices d’ADN c’est comme le surplus d’amorces
- L’amorce d’ARN c’est l’équivalent des 2 amorces synthétiques
- L’ADN polymérase équivaut à la TAQ
- Les nucléotides triphosphate c’est l’équivalent des dATP, dCTp, dTP et dGTP pour la technique de la PCR
Quelles sont les 3 étapes du cycle d’amplification?
- Dénaturation : on chauffe pour dénaturer l’ADN et séparer les 2 brins complémentaires
- Hybridation des amorces : on baisse la température à un degré spécifique. À cette température, les amorces d’ADN spécifiques à la séquence cible se lient à chaque brin simple d’ADN, en fournissant un point de départ pour l’amplification
- Prolongation des amorces : on augmente la température pour l’activité de la TAQ. Celle-ci utilise les amorces pour synthétiser des nouveaux brins d’ADN
Qu’est-ce qu’une amorce?
C’est une courte séquence d’ADN qui est utilisée comme point de départ pour la synthèse d’une nouvelle chaine d’ADN.
Qu’est-ce que les dntp’s
Ce sont des petits brins d’ADN (des nucléotides) qui flottent dans le microtube et qui seront pris pour faire le nouveau brin complémentaire d’ADN.
Qu’est-ce que la TAQ?
C’est l’ADN polymérase, mais en version synthétique. Elle sert à attacher les nucléotides à l’extrémité du brin en formation de 5’ vers 3’
Expliquer le processus du fonctionnement de l’électrophorèse sur gel
L’ADN porte des charges négatives. Si on la soumet à un courant électrique, elle sera attirée vers la borne positive. Plus le fragment d’ADN est court, moins il est ralenti par le réseau de fibres dans le gel; il parcourt donc une plus grande distance sur le gel.
Comment fonctionne le test ÉLISA?
- Les puits sont enduits d’un anticorps.
- L’antigène est introduit
- Un deuxième anticorps muni d’une enzyme est introduite dans le puit
- Un substrat est déposé dans le puit.
Si le substrat réagit avec l’enzyme et produit une coloration, c’est signe que l’antigène est présent.
Un rinçage est fait entre chaque étape. Il permet d’enlever tout les produits qui ont étés mis en surplus et qui n’ont pas été collés au fond du puit avec le premier anticorps.
Comment interpréter les résultats obtenus sur la figure suivante?
Les puits avec une coloration indiquent une réaction de l’anticorps et de l’antigène. Donc, si il y a une coloration, c’est que l’antigène recherché est présent.
Dans la figure ci-dessous, la deuxième série de coloration comporte uniquement 2 puits qui ont réagis. La raison est qu’il n’y a pas eu de PNP (substrat) dans le puit manquant. Le PNP c’est le substrat qui va provoquer une coloration.
Comment fonctionne la PCR en temps réel (qPCR) avec la sonde TAQMAN?
Le reporter émet une fluorescence qui est tout de suite captée par le QUENCHER. La TAQMAN vient se coller sur une certaine séquence du brin d’ADN. Lorsque le brin d’ADN est séparé en 2 pour l’élongation, la primase vient passer par-dessus la TAQMAN. Lorsqu’elle passe au-dessus, elle détache la molécule fluorescente. Puisque le REPORTER est séparée du QUENCHER, il se met à émettre de la fluorescence. Plus l’échantillon est fluorescent, plus il y a de TAQMAN qui à été utilisé, donc plus la quantité d’ADN est importante. Elle peut être mesurée avec un spectro.
Placer les différentes phases de la réaction de qPCR sur la graphique ci-dessous:
Phase d’amplification, phase transitoire, phase stationnaire.
Quelles sont les 2 méthodes de quantification de la qPCR?
- La quantitfication directe: on compare la droite obtenue avec la droite d’un échantillon connu.
- La quantification relative: on compare les Cq entre eux et avec le gène de référence
