Exam Final Flashcards
Quelle est l’utilité du PCR simple?
Mettre en évidence une portion du gène cible
Quelles informations peux-t-on retirer d’un PCR simple?
Présence ou non du gène
Estimation du poids moléculaire
Quelle est l’utilité du PCR-RFLP?
Détecter la présence d’une mutation
Quel réactif est essentiel au PCR-RFLP?
Enzymes de restriction spécifiques à la mutation recherchée
Quel facteur est très limitant pour la technique du PCR-RFLP?
La mutation doit absolument créer ou enlever un site de restriction sur le gène
Quelles sont les caractéristiques des séquences reconnues par les enzymes de restriction?
Ce sont des séquences palindromiques de 4 à 8 nt
Quelles sont les 2 types de coupures possibles pour une enzyme de restriction?
Bouts francs (blunt ends) : au même niveau sur les deux brins Bouts cohésifs (sticky ends) : coupures décalées
Quel est l’avantage principal du PCR en temps réel?
C’est une analyse quantitative, on peux évaluer la quantité de copies du gène
Quelle sont les particularités des amorces du qPCR?
Il y en a au moins trois dont une possède des fluorochromes qui seront mesurés par l’appareil
Pourquoi la fluorescence n’est pas détectable dès le début du qPCR?
Car chaque fluorochrome est lié à un Quencher qui l’inhibe jusqu’a ce qu’il y ait amplification
Que peux-t-on mettre en évidence en utilisant plusieurs sondes de couleurs différentes lors du qPCR?
Identification de SNP (single nucleotid polymorphism)
Mutations ponctuelles où un seul nucléotide est changé
Quel est le principal avantage du multiplex?
Permet l’amplification de plusieurs séquences différentes à la fois
Quelles sont les conditions à respecter pour faire un PCR multiplex?
Les fragments amplifiés doivent être de poids moléculaires différents
Les amorces doivent toutes êtres différentes et non-complémentaires
Que mesure le RT-PCR?
L’expression des gènes
À partir de quoi fait-on un RT-PCR?
ARNm
Quelle enzyme est essentielle au RT-PCR et d’où vient-elle?
Reverse transcriptase qui vient des rétrovirus
Nommez les différents types de PCR
Simple RFLP ( restriction fragment lenght polymorphism) En temps réel Multiplex RT-PCR
Définition antigène?
Substance étrangère qui entraîne une réaction immunitaire lorsqu’elle est introduite dans l’organisme
Comment nomme-t-on la partie de l’antigène reconnue par l’anticorps?
Épitope
V ou F, chaque antigène possède une seule sorte d’épitope
Faux, un antigène peut avoir plusieurs épitopes différents
Définition anticorps?
Protéine complexe utilisée par le système immunitaire pour détecter et neutraliser les agents pathogènes de manière spécifique
Quelle cellule sécrète les anticorps?
Plasmocytes
Comment nomme-t-on la région variable de l’anticorps qui sert à reconnaître les épitopes?
Paratopes
Nommez les 2 situations où il peut y avoir une réaction immunitaire croisée
- Si 2 antigènes différents ont des épitopes en commun
- Si 2 épitopes ont une structure chimique semblable
Nommez les types d’antigènes et leur définition
- Xenoantigène : Ag étranger à l’espèce
- Alloantigène : molécule variable selon les individus d’une même espèce
- Autoantigène : Ag du soi, non reconnu par le système immunitaire
Quelles sont les 4 techniques de transfert et que transfèrent elles?
Northern blot : ARN
Southern blot : ADN
Western blot : protéines
Eastern blot : lipides
Nommez les grandes étapes d’un western blot
Préparation de l'échantillon SDS-PAGE Buvardage Blocage (pre hybridation) Hybridation Lavage Révélation des signaux
Dans un western blot, que doit reconnaître l’anticorps primaire?
La protéine dénaturée et non la protéine native
Quelle est la sonde utilisée dans un southern blot?
Un fragment d’ADN auquel on a marqué une base
Quel principe physique est utilisé lors de l’étape du transfert d’un southern blot?
Capillarité
Quels sont les inconvénients du southern blot?
Long
Coûteux
Reproductibilité difficile
Besoin de bcp d’ADN
Le northern blot a les memes étapes que le southern blot sauf une. Laquelle et pourquoi?
La dénaturation car l’ARN est déja simple brin
À partir de quelles cellules peux-t-on faire un FISH?
Des cellules en métaphase
Que permet de détecter le FISH?
Séquences particulières
Oncogènes
Translocation et fusion
Trisomie
Qu’est ce que le séquençage?
Technique permettant de déterminer l’ordre dans lequel se présente les quatres bases de façon successive dans un brin d’ADN ou d’ARN donné
La méthode de Sanger utilise quels réactifs?
ADN simple brin et ddNTP
Qu’est ce qu’un didésoxyribonucléotide?
C’est un nucléotide dépourvu du groupement OH en 3’ donc aucun autre nucléotide peut se lier à cette extrémité
Quelles sont les 3 types de mutations?
Génomique
Chromosomique
Génique ponctuelle
Nommez les types de mutations chromosomiques
Duplication
Inversion
Deletion
Translocation
Nommez les types de mutations géniques ponctuelles
Non sens
Chgmt cadre de lecture
Silencieuse
Faux sens
Quelles sont les conditions pour qu’un allèle soit considéré polymorphique?
Plus d’un type d’allèle
Fréquence de chacun des allèles doit être d’au moins 1%
2% de la population doit être hétérozygote
Par quelle(s) méthode(s) peut on détecter les SNP (single nucleotid polymorphism)?
Séquençage
qPCR avec 2 sondes
Nommez les caractéristiques d’un STR (short tandem repeat)
1 à 7 nucléotides Se répète de 5 à 100 fois (moyenne 12 à 40) Très nombreux et polymorphes Répartis uniformément dans le génome Multi-allélique pour un même locus
