Etude Des Biomolecules Flashcards
Étalon def
Échantillon de concentration connue permettant d’établir la relation entre la grandeur mesurée et la concentration d’un analyte
Linéarité def
Intervalle de concentration de l’analyte pour lesquelles la relation entre la concentration et la grandeur mesurée (= le signal) est linéaire
Précision intrasérie def
Répétabilité : Plusieurs dosages en même temps sur un échantillon
Fidélité intermédiaire
Reproductibilité : plusieurs dosages à des instants différents
Exactitude def
Accord entre la valeur mesurée et la valeur vraie de l’échantillon
Biais d’inexactitude
100 x (M-V) / V
Incertitude de mesure
Doit intégrer tous les paramètres susceptibles de faire varier un résultat et d’éloigner le résultat de sa valeur vraie (CV_FI et E)
IC (95%)
m +- 2U
Principe spectrophotométrie
On mesure la lumière absorbée
Def fluorescence
Émission d’un photon (restitution d’énergie)
Transition électronique def
Absorption du faisceau lumineux incident
Def fluorochrome
Molécule excitée par un faisceau lumineux incident et qui retourne à son état basal par l’émission d’une radiation d’énergie moindre que la radiation incidente
Déplacement de Stockes
Écart entre longueur d’onde max d’absorption et la longueur d’onde max d’émission
Def chimiluminescence
Émission de lumière déclenchée par une réaction chimique
Constituants spectrophotomètre
Source lumineuse (blanche)
Monochromateur : travailler sur une longueur d’onde précise
Échantillon
Détecteur : quantifier la lumière sortie de l’échantillon
Formule transmittance
T = I / I0
Formule absorbance
A = -logT = epsilon Lc
Proportionnelle à concentration de l’analyte
2 méthodes de mesures en spectrophotométrie
M en point final : on att le plateau de l’absorbance
M cinétique : série de mesure (activité enzymatique)
Réaction de Trinder
H2O2 + chromogène réduit —> H2O + chromogène oxydé
Enzyme : peroxydase
Dosage du glucose
On mesure l’absorbance à 340 nm car NAD+ ne le fait pas mais NADH,H+ le fait
Dosage des bicarbonates
Diminution de l’absorbance à 340 nm proportionnelle à qtté de bicarbonates
Unité pour quantifier l’activité enzymatique
U/L (unité par litre)
Unité = nb de micro moles transformé par minute
Katal : nb de mol transformé par seconde
Signification IFCC
International Federation of Clinical Chemistry
Dosage phosphatase alcaline
Quantification par spectrophotométrie de paranitrophénol
Examen supplémentaire pour déterminer l’isoenzyme
Isoforme au niveau ostéoblastes et hepatocytes —> on fait une séparation par affinité par la lectine
Gènes phosph alcaline
G tissulaire aspecifique
G intestinal
G placentaire
Turbidimétrie
On s’intéresse au rayon transmis qui n’a rencontré aucune particule
Néphélémétrie
On s’intéresse au rayon diffusé (axe différent)
Interférences avec turbi et nephel
Hypertriglycéridemie importantes car chylom et VLDL sont susceptibles de diffuser la lumière comme complexe Ac-Ag
Potentiométrie
On utilise des électrodes pour mesurer une différence de potentiel
Potentiometrie directe
Sur échantillon non dilué
Potentiometrie indirecte
Dilution de l’échantillon dans un diluant fournit
Attention aux fausses hyponatremies qui peuvent être corrigées grâce à des formules
Principales interférences en biologie de routine
Hémolyse (prélèvement difficile ou pose de garrot trop longue)
Bilirubine
Lactescence
Adsorption = …
Phase stationnaire polaire
Adsorption phase inverse = …
Phase stationnaire apolaire
Chromatographie d’échange ionique pour …
AA, variants de l’hémoglobine, hemoglobine glyquee A1c qui possède une fonction Amine libre de moins que HgA0 donc A1c se décroche avant A0
