Étapes Flashcards
Transcription
Écartement des deux brins d’ADN
●un seul brun sera transcrit
● synthèse de ARN messager selon le principe de la complémentarité des bases azotées à partir des molécules libres dans le nucléoplasme
● liaison entre les deux bras de l’ADN avec l’enzyme ARN polymérase ●molécule ARN messager formé quitte le noyau à travers les ports nucléaires on se dirigeant vers les ribosomes du cytoplasme
L’initiation
● petite sous unités ribosomale prend place sur ARN messager au niveau du codon d’initiation ●le ribosome appelle un ARN de transfert à anticodon complémentaire portant un acide aminé Mérhianine
● ARNt suffixe sur le site P du ribosome la grande sous-unité ribosomale s’associe à la petite sous-unité au niveau de ARN messager
Élongation
● la lecture le deuxième codon de l’ARN messager fait appel à un deuxième ARNt à anticodon complémentaire et porteur d’un 2e acide aminé selon le code génétique ●fixation de ce ARN d de transfert sur le site une liaison péptidique s’établit entre le 1er et le 2ème acide aminé
●Le 1er ARNt se libère dans le cytoplasme
●Le ribosome se déplace sur l’ARN m au niveau du 3ème codon
●La lecture de l’ARN m recommence . ●Appel du 3ème acide ARNt et mise en place du 3eme acide aminé.
●Répétition du même événement
●Le polypeptide continue à s’allonger
Terminaison
●le ribosome passe par le codon Stop
●dissociation des 2 sousunités ribosomales et libération du polypeptide dans le cytoplasme
Obtention du gène à transférer
■à partir de l’ARNm:
●extraction de l’ADNc en utilisant enzyme “transcriptase reverse”
●synthese de l’ADN double brins avec “ADN polymerase”
■àpartir de l’ADN chromosomique
●extraction de l’ADN grâce à des enzymes de restriction spécifique
●les fragments d’ADN se séparent par éléctrophorèse(les fragments migrent différemment dans un champs éléctrique)
●transférer les fragments dans un filtre nitrocellulose
●incuber les fragments en une sonde moléculaire radioactive (séquence de nucléotides marqués radioactivement et complémentaire au gène recherché
●l’ADN de la sonde se fixe selon le principe de la complémentarité des bases azotées avec l’ADN du gène recherché
●l’autobiographie permet de récupérer l’ADN radioactif donc se repérer du gène recherché
(Comme la pêche à l’hameçon )
Introduction du gène dans la bactérie
●utilisation du plasmide
●insertion du gène à transférer dans le plasmide est grâce à l’enzyme “ligaze”
●obtention des molécules d’ADN recombinée
●la la cellule hôte la plus utilisee pour reçevoir l’ADN recombiné est les bactéries (echerischia coli, colibacille)
Repérage des cellules transformées
Insérer un gène pour résistance a un antibiotique inséré avec le gène transféré
Expression du gène
Le gène inséré dans le plasmide ne peut s’exprimer dans la cellule hôte que s’il est accompagné par certains signaux indispensables à son expression
(Ce sont des séquences d’ADN dites régulatrices)
●séquence”promoteur” doit précéder le gène inséré
●séquence “de fin de copie” doit lui faire suite
Extraction de la substance recherchée
■en soumettant la cellule à un choc osmotique:
●plasmolyse de la cellule permet le rejet de la substance recherchée en dehors du cytoplasme entre la membrane cytoplasmique et la coque bactérienne
●turgescence de la celule permet d’expulser la substance recherchée à l’extérieur de la cellule
■lyse de la cellule transgénique:
Dans ce cas il faut isoler la protéine recherchée dans des débris cellulaires
