Etablissement des lignées cellulaire

Question 1

Comment établir une lignée cellulaire à partir d’un prélevement in situ, d’une culture primaire ?

Answer 1

1. dissociation du tissus sain ou pathologique : mécanique (broyage), chimique enzymatique (trypsine, collagenase), chimique non enzymatique (D-PBS)
2. isolement : selection des cellules adhérentes ou cellules en suspension ou tri cellulaire par cytométrie
3. mise en culture des cellules normales ou pathologique

Question 2

Si l’on retire la senescence que se passe-t-il chez la cellule ?

Answer 2

cellules immortalisé = cellules modifiée pour se répliqué indéfinement.

Question 3

HeLa ?

Answer 3

première lignée cellulaire humaine issu d’un cancer du col de l’utérus

Question 4

Qu’est ce que l’immortalisation des cellules ?

Answer 4

processus par lequel les cellules primaire acquièrent la capacité de se diviser indéfiniment in vitro. Càd que les cellules dépassent la limite correspondant au nombre maximal de divisions qu’une cellule normale peut effectuer avant d’entrer en sénescence réplicative.

Question 5

Qu’est ce que hTERT ?

Answer 5

• human telomerase reverse transcriptase protein, qui permet l’Immortalisation par activation de la télomérase.
• inséré par transfection ou transduction
• réduit les risques d’accumulation de dommages de l’ADN.

Question 6

Qu’est ce que des cellules packaging? Quel type ?

Answer 6

Cellules concues pour produire des aprticules virales sans etre elles-mêmes infectées par ces virus
eco : souris
ampho : toutes cellules

Question 7

Caractéristique des cellules immortalisé par hTERT ?

Answer 7

• conservation des points de controle du cycle cellulaire
• inhibation contact
• dépendance à l’adhésion
• réponse aux facturs de croissance et signaux mitotique
• caryotype normal
• pas de transformation

Question 8

Quels sont les types d’inactivation des suppresseurs de tumeurs ? par surexpression d’oncogène ?

Answer 8

• siRNA, shRNA
• inactivation par CrisprCas9
• surexprssion de l’Ag T SV40
• surexpression des oncogène du HPV16
• surexpression d’oncogènes connu par l’organisme : k-RAS, c-myc

Question 9

A quoi faut-il faire attention lors de l’immoratlisation par inactivation ou surexpression des suppresseurs de tumeurs ? comment est modifié la lignée cellulaire ?

Answer 9

• méthode de transformation en cellule cancéreuse
• induit aneudiploidie, perte de dépendance aux signaux de croissance et d’adhesion
• caractéristiques des cellules cancéreuse.

Question 10

Inactivation par siRNA, shRNA?

Answer 10

basé sur l’interference de l’ADN qui réduit l’expression de ces gènes apporté par transfection ou transduction virale.
siRNA ou shRNA induit la dégradation ou l’inhibition de l’ARNm spécifique
shRNA induit une extinction plus longue

Question 11

Inactivation par CRISPRCAS9 ?

Answer 11

Le gène suppresseur (p53 ou Rb) est ciblé et supprimé. Possibilité de coupler avec GFP puis tri par cytométrie

Question 12

Surexpression de l’AG T SV40?

Answer 12

• Ag T SV40 se lie à p53 et Rb et les inhibent
• Transfection ou transduction en présence d’un promoteur fort SV40

Question 13

QUel type d’immortalisation ?

Answer 13

• inactivation des gènes supresseur de tumeurs
• surexpression des gènes supresseur de tumeur
• hTERT
• immortalisation conditionnelle

Question 14

Quels sont les types d’immortalisation conditionnelle ?

Answer 14

• conditionnelle chimique : système c-MycER
• conditionnelle température dependant : système tsA58
• système Cre/LOX

Question 15

Quelle est la stratégie parfait de modèle en cancérologie ?

Answer 15

ps de modèle parfait
dépend :
- modèle necessaire
- utilisation
Necessite la connaissance des biais de la voies d’immortalisation

Question 16

Quelles sont les banques de cellules ?

Answer 16

ATCC :american type culture collection
ECACC: european collection of animal cell culture

Question 17

exemple de surexpression d’oncogène ?

Answer 17

papillomavirus humain de type 16 (HPC16)
- oncoprotéine E7 s’associe aux protéines de la famille du Rb
- oncoprotéine E6 favorise la dégradation de p53