ESTUDIO DE CARACTERÍSTICAS METABÓLICAS CON FINES DE IDENTIFICACIÓN (pruebas bioquímicas)

Question 1

Prueba de citocromo-oxidasa

Answer 1

Determina –> presencia de citocromo-oxidasa
Procedimiento –> Papel de filtro estéril + tetrametil-p-fenilendiamina +
cultivo bacteriano en medio solido
Resultado –> Positiva si en unos 30 s se desarrolla coloración violeta alrededor de la masa bacteriana

Question 2

Prueba de la catalasa

Answer 2

Tras adicionar agua oxigenada sobre un cultivo bacteriano en medio sólido
aparecerá efervescencia si la bacteria posee el enzima catalasa

Question 3

Prueba de oxido-fermentación (o/f) de la glucosa

Answer 3

Determina –> Metabolismo
Procedimiento –> 2 tubos Medio Hugh-Leifson + glucosa + inoculo por picadura + uno con parafina
Resultado –> +(amarillo) - (verde o azul)
+ / + : Metabolismo fermentativo
+ / - : Metabolismo oxidativo
- / + : Metabolismo fermentativo
- / - : No degrada el azúcar ensayado

Question 4

Prueba de la lisina descarboxilasa (LDC)

Answer 4

Determina –> Capacidad de descarboxilar la lisina
Procedimiento –> Tubo de medio moeller + bacteria + parafina
incubar por 48 h 37°
Resultado –> Morado si la bacteria produce lisina descarboxilasa
Amarillo –> negativo

Question 5

Prueba de producción de indol

Answer 5

Determina –> Presencia del sistema enzimático triptofanasa (Dessaminación reductora del
triptófano a indol, pirúvico y NH3)
Procedimiento –> Agua de triptona + inoculo + reactivo de kovacs
Reactivo –> Positiva –>Anillo rosa –> presencia de indol
Negativa –> anillo amarillo

Question 6

Prueba de la reducción del nitrato

Answer 6

Determina –> Capacidad de una bacteria de reducir el nitrato a nitrito
Procedimiento → Sembrar e incubar /37°C (2-7 dias)
Observar si hay gas en la campana de Durham + 1ml de cada reactivo nitrato (Nitrato 1 y 2)
Resultado –>
FASE 1 –> Rosado a rojo intenso –> indica la presencia de nitrito (+)
sin coloración–> no nitrito
FASE 2 –> (Prueba de la reducción del zinc) + Polvo de zinc
–>Si no cambia la coloración, la prueba es positiva (ha tenido lugar la reducción del nitrito) y gas en la campana de Durham –> reducción desasimilatoria
–> Si aparece color rosa o rojo, la prueba es negativa

Question 7

Prueba de la hidrólisis del Tween-80 (lipasa)

Answer 7

Determina –> Enzima extracelular lipasa
Procedimiento –> Al degradar tween 80 libera acido oleico
medio sierra 48hr
Resultado –> Positivo –> aparición de un precipitado puntiforme alrededor de un cultivo bacteriano –> Presencia de oleato calcico

Question 8

Prueba de la utilización de azúcares y producción de SH2 (Kligler)

Answer 8

Procedimiento –> Medio dos azúcares hierro (DSI) o agar Kligler
Resultados –>
*Fermentación de glucosa y lactosa: todo el medio aparece de color amarillo.
*Fermentación de glucosa pero no de lactosa: la zona de columna aparece amarilla. La lengüeta será roja.
*No fermentador: todo el medio aparece de color rojo intenso.
*Bacteria aerogénica: observación de burbujas en el medio de cultivo.
*Reducción del tiosulfato: observación de precipitados negros de sulfuro de hierro.

Question 9

Prueba de hidrólisis del almidón

Answer 9

Determina - - > Presencia de amilasa
Procedimiento –>Sembrar la bacteria en agar nutritivo con almidón.
Incubar 5 días a 37 ˚C
Resultado –> Añadir unas gotas de lugol sobre el crecimiento bacteriano. + desaparece almidón –> Un halo no coloreado alrededor del crecimiento bacteriano (el resto azul oscuro)

Question 10

Prueba de la hidrólisis de la caseína (caseinolisis)

Answer 10

Procedimiento –> agar leche. Incubar a 37 ˚C durante 48-72 h.
Resultado –> Positiva –> Un halo transparente alrededor del crecimiento bacteriano.