Ensaios Imunoenzimáticos (ELISA) Flashcards
Como a amostra é fixada no Elisa direto?
Amostra fixada diretamente na placa. Essa técnica é usada para deteção de anticorpos primários.
Como a amostra é fixada no Elisa indireto?
É fixada indiretamente na placa (amostra é fixada no anticorpo).
Essa técnica é usada para detecção de anticorpos secundários.
Como a amostra é fixada no Elisa Sanduíche
A anticorpo está fixado na placa.
Eliza por competição (fixação da amostra)
Um antígeno é marcado para competir com o antígeno alvo.
Quanto mais antígeno tiver na amostra, menos o antígeno marcado se ligará.
Etapas de preparação do Elisa
1°: Adsorção (superfície exposta a um líquido)
2°: Lavagem
3°: Bloqueio - o bloqueio é feito com leite em pó (solução extremamente protéica).
4°: Amostra + PBS:
5°: Incubação e lavagem:
6°: Cromogênico: substância que origina a cor.
7°: SDS
8°: Leitura
No Elisa para detectar…
Hormônios
Anticorpos (IgM e IgG)
Antígeno
Elisa é quantitativo ou qualitativo?
Ambos, qualitativo e quantitativo
Se busca-se antígeno deve-se sensibilizar a placa com Ag ou Ac? E o contrário?
Sensibiliza-se a placa com antígeno para buscar anticorpos.
Sensibiliza-se a placa com anticorpos para buscar antígeno.
Elisa Direto utiliza que tipo de amostra?
Soro, plasma ou sobrenadante.
Soro: sangue sem coagulante
Plasma: presença anticoagulante.
Sobre Elisa Direto
Não se sensibiliza a placa
Elisa Indireto
Busca-se anticorpos
Sensibiliza-se a placa com Ag específico (não há tanta interação inexpecífica)
Adiciona-se Ac secundário à enzima.
O anticorpo apresenta a porção variável com alvo a porção Fc do anticorpo primário. (Especificidade)
Elisa sanduíche
- Detecção de Antígeno
- Sensibiliza-se com anticorpo.
- Ag + Ac (sem enzima) + Ac (com enzima, de porção variável com alvo na porção Fc do anticorpo primário)
Elisa de captura
Específico para Igm
1. Sensibiliza com anticorpo (porção variável interage com a porção variável do IGM)
2. Bloqueio.
3. Amostra
4. Ag ligado à Enzima.
5. Cromógeno.
