engenharia genética II Flashcards
exemplo hordieno do uso de enzimas de restrição
injeção de insulina: é preciso de um DNA humano com gene para insulina e um DNA bacteriano com a enzima. O DNA com gene para insulina precisa ter uma sequências de nucleotídeos que pode ser cortada por uma enzima de restrição de dois lados entre o gene. Com o corte feito, o gene é ligado ao DNA bacteriano por pontes de H. Como ligações de hidrogênio não são tão fortes quando ligações covalentes, é necessário uma cola de DNA=enzima DNA ligase, para colar o DNA e o gene com ligação fosfofiéster 3´5, com isso, tem-se um DNA recombinante, ou seja, tem-se a soma de DNA de origens diferentes. Após a bactéria produzir a insulina, a insulina é retirada e aplicada no diabético
como é chamado o DNA usado como suporte para o gene de interesse na técnica do DNA recombinante?
vetor(seria o equivalente ao DNA de bactérias onde o gene da insulina foi colocado)
a molécula de DNA associada ao trecho de DNA em estudo é denominada
DNA recombinante=DNA de interesse
em quem é colado= DNA de interesse
onde se cola=vetor
clonagem gênica ou clonagem de DNA
quando o DNA recombinante é introduzido em microrganismos(bactérias, vírus..) que ao se reproduzirem, multiplicam essas moléculas recombinantes, dando origem a um grande número de cópias idênticas
microrganismo bastante usado para introduzir o DNA recombinante e fazer a etapa da clonagem gênica da técnica do DNA recombinante
plasmídeo: bactéria escherichia coli, encontrada normalmente no tubo digestivo humano
a clonagem de DNA recombinante consiste na reprodução de várias cópias do DNA recombinante. Quais são as 2 formas de fazer isso?
in vivo->introdução do DNA recombinante em alguma bactéria e, quando ela se reproduzir de forma assexuada, cria várias cópias do DNA recombinante
invitro->em tubo de ensaio, com enzimas apropriadas
no que consiste a etapa de transfecção da técnica do DNA recombinante?
inserção do DNA recombinante no organismo a ser modificado->no vírus, por exemplo(que seria o vetor, ou seja, um suporte para o DNA recombinante)
no que consiste a etapa de seleção do organismos modificados na técnica do DNA recombinante?
junto com o DNA de interesse, é introduzido um gene marcador, com resistência a droga. Em seguida, aplica-se a droga no organismo a ser modificado–>só vai sobreviver o organismo que aceitou ser modificado, ou seja, que tem o gene marcador com o DNA recombinante
porque usamos plasmídeos como DNA recombinante e não o DNA de bactérias?
porque o plasmídeo é DNA extracromossomial, com gene não importantes para a sobrevivência da bactéria
PCR ou reação de cadeia de polimerase
é uma técnica de clonagem de DNA in vitro, isto é, de criação de DNA em tubos de ensaio, em altas temperas->a vantagem é que, por ser em altas temperaturas, as cópias do DNA são feitas com muita rapidez; mas a desvantagem é que enzimas desnaturam em alta temperatura. Assim, para essa técnica é preciso usar uma enzima específica que suporte esse intenso calor
