Elisa Flashcards
Técnicas imunoenzimáticas
Cite para que o Elisa é usado:
- Detecção de várias moléculas infecciosas
- Detecção de enfermidades autoimunes
- Detecção de alergias
- Detecção de muitos vírus
- Aquilo que ativa o SI produzindo anticorpos e/ou que tiver proteínas disponíveis em fase liquida
Quais são as características do Elisa?
- Ensaios em fase sólida
- Anticorpos ou antígenos marcados com enzimas
- Complexo resultante possui atividade imunológica e enzimática (conjugado imunoenzimático)
- Substrato cromogênico
- Produto colorimétrico
- Detecção de antígenos ou anticorpos
- Alta sensibilidade e especificidade
- Baixo custo
- Reprodutibilidade
- Versatilidade
Quais são os tipos de métodos usados detectar antígeno e anticorpos, respectivamente?
Direto e indireto
Quais são os tipos de Elisa para detectar antígeno?
Direto, competitivo e Sandwich (duplo anticorpo)
Quais são os tipos de Elisa para detectar anticorpo?
Indireto, competitivo, Sandwich indireto e avidez
No Elisa direto para que serve a solução bloqueadora?
Para impedir que anticorpos se liguem a antígenos e partes da placa não cobertas, pois daria um falso positivo
Por que são feitas lavagens?
Para tirar as proteínas que não se aderiram a placa
Diga se é verdadeiro ou falso:
Em Elisas que usam anticorpo anti-Ig, esse pode ser de todas as espécies incluindo humana
Falso, não pode ser do homem
Por que eu uso o sandwich direto em uns casos e o direto em outros?
Devido a sensibilidade. O sandwich direto se liga com alta sensibilidade ao antígeno, sendo usado quando tiver pouco antígenos
Para que é aplicado o Elisa direto?
Titulação de anticorpos conjugados às enzimas
Para que é aplicado o Elisa indireto?
Detecção/ titulação de anticorpos em fluidos biológicos
Para que é aplicado o Elisa sandwich direto?
Detecção/quantificação de antígenos em fluidos biológicos
Para que é aplicado o Elisa sandwich indireto?
Detecção/quantificação de anticorpos em fluidos biológicos
Por que eu faço o sandwich indireto no lugar do indireto?
Devido a afinidade, se tiver pouco anticorpo uso esse método
No Elisa sandwich amplificado ao que a biotina e a avidina se ligam respectivamente?
Biotina se liga a porção Fc e a avidina se liga a biotina
Para que é aplicado o sandwich amplificado?
Quantificação de antígenos em fluidos biológicos
Como é feito a análise dos resultados no Elisa competitivo?
Aqui quanto mais colorido mais negativo é o resultado
Para que é aplicado o Elisa competitivo?
Detecção/ quantificação de antígenos em fluidos biológicos
No Elisa para determinação da avidez de IgG anti T. gondii, o que acontece quando se retira a uréia?
Retira os anticorpos com menor afinidade
Como é calculado o índice de avidez?
Densidade optica da ureia positiva dividido pela DO de ureia negativa multiplicado por 100
Classifique o índice de avidez:
Menor que 30 é baixa avidez; entre 30 e 60 avidez intermediária; maior que 60 alta avidez
Diga se é verdadeiro ou falso:
Posso considerar que a gestante está imune quando IgG for reagente e IgM não
Falso, nunca considerar que a gestante está imune
Geralmente para uma interação entre antígeno-anticorpo a Elisa é feita em Overnight. O que pode acelerar essa interação?
Aumentar a temperatura e controlar o pH.
Quais são as melhores substâncias bloqueadoras?
Leite desnatado em pó e Soroalbumina bovina - (soros de coelho/equino/cabra)
Como pode-se caracterizar sensibilidade?
O quanto o teste é eficaz em identificar corretamente dentre todos os indivíduos avaliados, aqueles que realmente apresentam a característica de interesse, ou seja verdadeiros positivos
Como pode-se caracterizar especificidade?
Quanto um teste é capaz de identificar corretamente os indivíduos que não apresentam a condição de interesse, ou seja, verdadeiros negativos
Como devo agir com cut off em pesquisas?
Aumentar o valor, mas faz surgir alguns falsos negativos
Como devo agir com cut off em laboratório?
Diminuo o valor, assim eu pego todos os doente mais alguns não doente
