Electrophorèse Flashcards
Qu’est-ce qu’une substance amphotère ?
subsatance qui peut se comporter, selon le cas, comme un acide ou une base en libérant ou en acceptant des ions H+.
Parmi ces substances, il y a les acides aminés
À quel pH un acide aminé sera-t-il un ion dipolaire ?
A un pH physiologique, appelé point isoélectrique
Électrophorèse des protéines sériques
Le laboratoire : Résultats et interprétation
Chaque pic représente une fraction
• Pic élevé et étroit représente une zone
dense et étroite de substances sur
l’électrophorégramme
• Pic moins dense et plus étendu peut
contenir une quantité égale ou même
supérieure de substance
• L’aire sous chaque pic est
ɑ à la quantité
de protéines contenues dans chacune des
fractions
• L’aire sous la courbe qui est
ɑ à la quantité
totale de substances contenues dans
l’échantillon
• Pour connaître les proportions dans
chaque fraction par rapport à l’ensemble, il
faut établir le rapport entre l’aire de chaque
fraction et l’aire totale.
• Exprimé en % de la valeur totale puis
connaissant la quantité de substances
contenues dans l’échantillon on peut
calculer en valeur absolue la quantité de
substances contenues dans chaque fraction.
Principe :
Lorsqu’un faisceau de lumière frappe une solution….
il la traverse en
diminuant de vitesse et en changeant de direction : on dit que ce
faisceau est réfracté.
Principe (suite)
L’amplitude de réfraction s’exprime en…..
Indice de refraction
Principe (suite)
L’indice de réfraction correspond à ….
La masse volumétrique.(densité)
de l’échantillon.
Principe (suite )
L’indice de réfraction est propre à …
Chaque substance.
Électrophorèse de zone
Définition
Une méthode de séparation non gravimétrique
Électrophorèse de zone
Le déplacement (migration) de particules …….?
électriquement, dans un champs électrique créé par
deux électrodes de signes ……..?reliées à une source
de courant
chargées
contraires
L’électrode ……. se nomme anode
* L’électrode …….. se nomme cathode.
POSITIVE
NEGATIVE
UTILITE ?
Une méthode utilisée principalement pour la séparation
de grosses molécules en solution, difficilement
séparables avec d’autres méthodes.
* Elle peut cependant être aussi très efficace pour séparer
des molécules de petite taille.
Électrophorèse de zone
Principe
La séparation par électrophorèse repose sur le principe
de l’attraction mutuelle des charges de signes
contraires.
PRINCIPE SUITE
- Lorsque des particules chargées électriquement sont
placées entre deux électrodes, elles sont attirées vers
l’électrode de signe….. au leur.
opposé
PRINCIPE SUITE
Les particules positives migrent vers …….. et
peuvent être séparées des particules négatives qui
migrent vers ……..
la cathode
l’anode.
PRINCIPE SUITE
Les forces d’attractions sont ……..d’une molécule à
l’autre et ces dernières migrent vers leur électrode
respective à des …….
différentes
vitesses différentes
Dans un temps donné, les molécules de même signe
…….. des distances…….. et se trouvent ainsi……..
les unes des autres.
parcourent
différentes
séparées
Que devez-vous savoir au sujet d’un appareil à
électrophorèse Cuves :
Cuves :
Indépendantes l’une de l’autre mais retenues
ensemble par le pont de support ; contiennent la
solution tampon avec des ions pour que le courant
électrique passe (pas de l’eau) et reçoivent l’une
des deux électrodes du système
Que devez-vous savoir au sujet d’un appareil à
électrophorèse Pont de support :
Pont de support :
Sert à fixer et à tendre le support à électrophorès
e
Que devez-vous savoir au sujet d’un appareil à
électrophorèse Support :
Support :
Chacune de ses extrémités rejoint l’intérieur de
l’une des deux cuves
Que devez-vous savoir au sujet d’un appareil à
électrophorèse Bloc d’alimentation :
Bloc d’alimentation :
Génère un courant électrique continu aux
électrodes de la chambre à électrophorèse ; indique
le voltage (V) et l’ampérage (A)
Quelle sera la charge d’un acide aminé si le pH du milieu est plus bas que son point isoélectrique ?
Expliquez pourquoi ?
positif
Abondance des ions H+ dans la solution
→ accepte des H+
Quelle sera la charge d’un acide aminé si le pH du milieu est plus haut que son point isoélectrique ?
Expliquez pourquoi ?
négatif
Faible concentration d’ions H+ dans la solution → donne des H+
Électrophorèse des protéines sériques
Le laboratoire : Résultats et interprétation
- Chaque pic représente une fraction
- Pic élevé et étroit représente une zone
dense et étroite de substances sur
l’électrophorégramme - Pic moins dense et plus étendu peut
contenir une quantité égale ou même
supérieure de substance - L’aire sous chaque pic est
ɑ à la quantité
de protéines contenues dans chacune des
fractions - L’aire sous la courbe qui est
ɑ à la quantité
totale de substances contenues dans
l’échantillon - Pour connaître les proportions dans
chaque fraction par rapport à l’ensemble, il
faut établir le rapport entre l’aire de chaque
fraction et l’aire totale. - Exprimé en % de la valeur totale puis
connaissant la quantité de substances
contenues dans l’échantillon on peut
calculer en valeur absolue la quantité de
substances contenues dans chaque
fraction
Électrophorèse des protéines sériques
Le laboratoire : Réfractomètre
PRINCIPE?
Principe :
Lorsqu’un faisceau de lumière frappe une solution, il la traverse en
diminuant de vitesse et en changeant de direction : on dit que ce
faisceau est réfracté.
-L’amplitude de réfraction s’exprime en indice de réfraction.
-L’indice de réfraction correspond à la masse volumétrique (densité)
de l’échantillon.
-L’indice de réfraction est propre à chaque substance.
